Trebalo bi postojati mjesto za presavijanje živih medija za bakterije. Vidite žive ljude srednjih godina. Primjena alata diferencijalne dijagnostike

Mikrobiološka istraživanja uključuju identifikaciju čistih kultura mikroorganizama, uzgoj i uzgoj njihovih svojstava. Kulture koje sadrže mikroorganizme iste vrste nazivaju se čistim. Mirisi su potrebni u dijagnostici zaraznih bolesti, identifikaciji vrste i vrste mikroba, u istraživačkom radu, uklanjanju produkata vitalne aktivnosti mikroba (toksini, antibakterijski antibiotici, vakcine itd.).

Za uzgoj mikroorganizama (kultivacija u vještačkoj kulturi in vitro) potrebni su posebni supstrati - podloge koje daju život. Na podlogama mikroorganizama odvijaju se svi životni procesi (življenje, umiranje, razmnožavanje itd.), a nazivaju se i podlozi za uzgoj.

Živo podne

Životna sredina je osnova mikrobiološkog rada, a njena konzistentnost često određuje rezultate svakog istraživanja. Mediji su odgovorni za stvaranje optimalnih (najviših) uslova za život mikroba.

Vimogi do sredine

Seredovishch je kriv za takve prekršaje:

1) biti živ, kako bi se iz lako stečenog izgleda eliminisali svi govori neophodni za zadovoljavanje prehrambenih i energetskih potreba. Oni su grupa organogena i mineralnih (anorganskih) supstanci, uključujući i mikroelemente. Mineralni spojevi mogu prodrijeti u strukturu tkiva i aktivirati enzime, a određuju fizička i kemijska svojstva medija (osmotski tlak, pH, itd.). Prilikom uzgoja niskih mikroorganizama u mediju dodaju se sredstva za rast - vitamini, određene aminokiseline koje se ne mogu sintetizirati celulozom;

Respect! Mikroorganizmi, kao i sva živa bića, zahtijevaju veliku količinu vode.

2) majka ima optimalnu koncentraciju jona vode - pH, tako da samo oni sa optimalnom reakcijom medijuma koji se uliva u propusnost membrane mogu mikroorganizmima usvajati žive supstance.

Za većinu patogenih bakterija optimalna je blago vlažna podloga (pH 7,2-7,4). Krivac je kolera vibrio - njen optimum je u zoni livade (pH 8,5-9,0) i uzročnik tuberkuloze koja zahteva slabo kiselu reakciju (pH 6,2-6,8).

Kako se tokom rasta kiselih mikroorganizama ili vodenih produkata iz njihovog života pH ne bi promijenio, medij mora biti puferiran kako bi se uklonile tvari koje neutraliziraju proizvode; razmjena;

3) biti izotoničan za mikrobne ćelije; Dakle, osmotski pritisak u sredini je isti kao u sredini klijenta. Za većinu mikroorganizama optimalna podloga je 0,5% natrijum hlorida;

4) da su sterilni, fragmenti mikroba treće strane menjaju rast mikroba u tragovima, u zavisnosti od njegove snage i menjaju snagu sredine (skladištenje, pH, itd.);

5) debeli srednji dio je mekan i optimalne konzistencije za mikroorganizme;

6) majčin oksidativni potencijal, koji je reakcija jedinjenja koja daju i prihvataju elektrone, koji se izražava RH 2 indeksom. Taj potencijal pokazuje zasićenost sredine kiselošću. Neki mikroorganizmi zahtijevaju visok potencijal, dok drugi zahtijevaju nizak. Na primjer, anaerobi se razmnožavaju pri RH 2 ne više od 5, a aerobi - pri RH 2 ne nižem od 10. Oksidni potencijal većine medija zadovoljava mnoge aerobne i fakultativne anaerobe;

7) biti ujednačen koliko god je to moguće kako bi se održale konstantne količine ostalih sastojaka. Tako podloga za uzgoj većine patogenih bakterija mora sadržavati 0,8-1,2 g/l amino dušika NH 2 i ukupnog dušika amino grupa aminokiselina i nižih polipeptida; 2,5-3,0 g/l ugljičnog dioksida N; 0,5% hlorida za natrijum hlorid; 1% peptona.

Važno je da sredina bude providna - lakše je pratiti rast usjeva, lakše je uočiti kontaminaciju sredine mikroorganizmima trećih strana.

Klasifikacija medija

Potreba za živim govorom i snaga sredine nisu iste kod različitih vrsta mikroorganizama. Stvaranje univerzalne sredine je teško. Osim toga, izbor jednog ili drugog medija zavisi od svrhe istraživanja.

U ovom trenutku identifikovan je veliki broj medija čija je klasifikacija zasnovana na takvim znakovima.

1. Izlazne komponente. Prema izlaznim komponentama, dijele se prirodne i sintetičke medije. Prirodna medljika se priprema od proizvoda kuvanja i berbe. U Danskoj; sat probave, u kojem se vrijedni prehrambeni proizvodi (meso i dr.) zamjenjuju neprehrambenim proizvodima: grlo i pasulj, stočni kvasac, krvni ugrušci itd. Bez obzira na to što je zaliha živih medija iz prirodnih proizvoda vrlo složena i varira u skladištenju zbog izlaznog sirupa, ovi mediji su uveliko stagnirali. Sintetički mediji se pripremaju od hemijski čistih organskih i neorganskih jedinjenja uzetih u tačno određenim koncentracijama i razblaženjima iz dve destilovane vode. Važno je razumjeti ove prosjeke u smislu da je njihov sastav stabilan (očigledno, koliko i kakve riječi je u njima uključeno), jer je te prosjeke lako stvoriti.

2. Dosljednost(Nivo snage). Medijumi su rijetki, moćni i štetni. Gusta i tanka sredina priprema se sa rijetkim sastojcima, kao što su agar-agar ili želatin, dok sredina ne postigne potrebnu konzistenciju.

Agar-agar je polisaharid koji se izoluje iz raznih vrsta morskih algi. Živa je tvar za mikroorganizme i služi samo za jačanje želuca. U vodi se agar topi na 80-100 ° C, smrzava na 40-45 ° C.

Želatin je kuvani protein. Na 25-30 ° C, jezgro želatine se topi, tako da bi kulture na njima trebale rasti na sobnoj temperaturi. Jačina ovih medija se mijenja pri pH ispod 60 i iznad 70 i smrad se pogoršava. Neki mikroorganizmi koji koriste želatinu proizvode želatinu kao životvornu supstancu - njihovim rastom oštećuje se srednji dio.

Osim toga, kao deblji centar, možete zamrznuti zagorenu sirutku, zagorena jaja, krompir, a centar silika gelom.

3. dionica. Seredovishcha je podijeljena na jednostavne i složene. Prije prvog dodajte mesno peptonsku čorbu (MPB), mesni pepton agar (MPA), juhu i Hottinger agar, živu želatinu i peptonsku vodu. Preklopljeno meso se kuha, dodajući drugim mikroorganizmima krv, surutku, ugljikohidrate i druge tvari neophodne za reprodukciju.

4. Zadatak: a) glavni (kontaminirani) medij služi za uzgoj većine patogenih bakterija. Tse vishchezgadaní MPA, MPB, bujon i Hottinger agar, peptonska voda;

b) posebne podloge služe da se vide i uzgajaju mikroorganizmi koji rastu na jednostavnim podlogama. Na primjer, za uzgoj streptokoka, tsukor se dodaje u želudac, za upalu pluća i meningokoka - krvni serum, za kašalj - krv;

c) selektivni (odabrani) medijumi služe za otkrivanje prisustva različitih vrsta mikroba, čiji je rast suzbijen, gušeći i gušeći rast susednih mikroorganizama. Dakle, soli kiselina preživara, koje potiskuju rast koliforma, selektivne su za uzročnik tifusa. Medljika postaje selektivna kada se dodaju dodatni antibiotici, soli i promjene pH vrijednosti.

Rijetko selektivni mediji se nazivaju akumulacijskim medijima. Izvor takvog medija je peptonska voda sa pH 8,0. Pri ovom pH, bakterije kolere se aktivno razmnožavaju na njemu, a drugi mikroorganizmi ne rastu;

d) diferencijalno-dijagnostički mediji omogućavaju da se jedna vrsta mikroba razlikuje od druge na osnovu enzimske aktivnosti, na primjer, Hessova podloga sa ugljikohidratima i indikatorom. S rastom mikroorganizama koji razgrađuju ugljikohidrate mijenja se boja sredine;

e) sredstva za zaštitu su namenjena za početnu setvu i transport gotovog materijala; izbjegavaju izumiranje patogenih mikroorganizama i potiskuju razvoj saprofita. Zaliha takve tvari je mješavina glicerina, koja se koristi za prikupljanje praznog otpada tokom istraživanja koja se provode radi identifikacije crijevnih bakterija niskog kvaliteta.

Recepti za pripremu ovih vrsta proizvoda slični su onima u sljedećem dijelu i u drugom dijelu alata.

Kontrolišite hranu

1. Koja vrsta ljudi će vjerovatno biti zadovoljna smještajem u sredini?

2. Kako klasificirati srednje supstance nakon izlaznih komponenti?

3. Koje riječi se koriste za jačanje sredine?

4. U kakvoj sredini je jednostavno i teško živjeti, a kako da stagnira?

5. Koji srednji dijelovi se nazivaju sklopivi, koja je njihova osnova?

6. Koji mediji nam omogućavaju da eliminišemo važnost rasta nekih mikroba dok istovremeno potiskujemo druge?

7. U kojim podlogama se javlja enzimska aktivnost mikroba?

Zavdannya

Popunite formular navodeći koje su grupe uključene u sredinu.

Priprema centra

Posuđe za pripremu umaka nije podložno kontaminaciji stranih materija, na primjer, livade, koje izgledaju kao razne vrste stakla, ili oksidi koji se mogu apsorbirati u medij kada se kuhaju u zarđalim loncima. Najbolje je koristiti emajlirano ili aluminijsko posuđe. Velike količine pulpe (desetine i stotine litara) pripremaju se u posebnim kotlovima ili reaktorima (malih 14). Prije upotrebe posuđa potrebno ga je dobro oprati, isprati i osušiti. Novo posuđe prvo kuhajte 30 minuta u 1-2% klorohidronskoj kiselini ili potopite preko noći, a zatim dugo isperite u tekućoj vodi.

Respect! Posuđe koje se koristi za pripremu umaka ne može se koristiti u druge svrhe, kao što je ušteda hemijskih reagensa ili predmeta koje je potrebno dezinfikovati - imajte na umu da ove supstance mogu izazvati rast mikroorganizama zmív.

Vikend sir Za pripremu većine jela koristite kuvane ili biljne proizvode: zamene za meso i povrće, mleko, jaja, krompir, soju, kukuruz, kvasac itd.

Glavne žive čorbe pripremaju se od mesne vode ili rijetke digestije, ekstrahirane kiselom ili enzimskom hidrolizom sirovog mlijeka. Čorbe se vare 5-10 puta ekonomično, sa manje mesne vode. Prerađeni plodovi su bogati aminokiselinama, stoga su životvorni; Imaju veći puferski kapacitet, što znači da imaju stabilniju pH vrijednost. Osim toga, varenje se može pripremiti od zamjene za meso (krvni ugrušci, posteljica, kazein itd.).

U ovom trenutku, snabdijevanje laboratorija mesnom vodom i digestijom je centralizirano. Najčešće se liječe Hottingerovim pankreasnim digestom, hidrolizatima kazeina ili stočnim kvascem. Od ovih napitaka možete pripremiti potrebne sastojke za ove recepte.

Faza pripreme sredina: 1) kuvana; 2) utvrđivanje optimalne pH vrednosti; 3) pojašnjenje; 4) filtracija; 5) flaširanje; 6) sterilizacija; 7) kontrola.

Kuhajte Smjesa se kuha na otvorenoj vatri, u vodenom kupatilu, u autoklavu ili u kotlovima zagrijanim na paru.

Podesite pH Središnje tačke su orijentalno vibrirane uz pomoć indikatorskih papira. Za tačno Vozhno, pH je smeđi u potencijalu, galop je klizeći Elektrodi Vidpov je komparator (Aparat Mikhalis), a ZI stativ je skladište za uzorke (slika 15) standarda standardnog pH. Prilikom pripreme centra koristite metan-nitrofenol indikator koji mijenja boju u rasponu od 6,8-8,4.

Za određivanje pH sredine epruvete 4, prečnik i boja stakla se ne razlikuju od epruveta sa standardima, postavite ih na proreze 1, 2, 3 i 5 (div. sl. 15). Dodajte 5 ml destilovane vode u 1. i 3. epruvetu; u 5. - 7 ml; 2. - 4 ml vode i 1 ml indikatora. Postavite potrebne pH standarde na gnijezdima 4 i 6. U 1., 2. i 3. epruvetu sipajte 2 ml ohlađene smeše. Pomiješajte epruvete.

Boju epruveta u epruvetama treba podesiti na svetlu boju, što se mora uraditi tako što se zadnji prorez prekriva filterom (mat ili plavi, jer su intenzivno žute). pH uzorka koji se testira odgovara pH standarda od kojeg se izbjegava boja.

Vruće podloge sa zadatim pH, postaviti standarde u slotove 4 i 6, čija je pH vrednost bliska traženom, a u 2. epruvetu sa ispitivanim medijumom i indikatorom dodati iz birete mekoću livade, koja je isto za 2. uzorak svjetla za standarde, ili je kiselost najlakših standarda. Pula (ili kiselina) se dodaje sve dok boja uzorka u drugom uzorku ne bude u skladu sa bojom standarda. Jačina smjese (ili kiseline), dodana u 2 ml smjese u 2 uzorka, dovoljna je da pokrije cijelu smjesu pripremljene smjese. Na primjer, za podešavanje potrebnog pH, 2 kapi (0,1 ml) 0,05 N dodane su u 2 ml otopine. Rozchinu livada, onda za održavanje 1 litre treba 500 puta više, zatim 50 ml 0,05 n. ili 2,5 ml 1n. rozchinu meadow.

Tokom sterilizacije, pH medijuma se smanjuje za 0,2 zapremine da bi se medij uklonio sa pH od 7,2-7,4, a zatim se priprema sa pH od 7,4-7,6.

Osvetljenje Smrad vibrira, kao da je uzavreo, smrad postaje mutan ili taman. Da posvijetli medijum, zagrejan na 50°C, u njega uliti bjelanjak kokošjeg jajeta, umućen sa malo vode, promiješati i prokuvati. Pucajući, protein će se uvući u opsadu važnog dijela. Na isti način bjelanjak možete zamijeniti krvnim serumom (20-30 ml na 1 litar tekućine).

Filtracija Rijetke i rastopljene želatinozne jezgre vibriraju se kroz meki papir ili kroz platnene filtere. Filtriranje agar podloge je otežano - primjetan je smrad. Procijedite ih kroz filter od pamučne gaze (u filter stavite gazu i na nju komadić vate). Možete koristiti papirne ili papirne filtere ako filtrirate u vrućem autoklavu ili u zagrijanom filteru.

Filtriranje agar medija može se zamijeniti ovisno o okolnostima. Smjesa se sipa u visoku cilindričnu posudu i topi u autoklavu. Kada se sredina dovoljno ohladi, njeni važni dijelovi se talože na dno. Sljedećeg dana izvadite ugrušak agara iz posude (za šta je posudicu nepotrebno stavljati u vruću vodu) i nožem odrežite donji dio nakupljenog taloga. Gornji dio se otopi i sipa u posebnu posudu.

Flaširanje smjesu u epruvete (po 3-5 ml ili 10 ml), boce, tikvice, madrace i zdjele ne većeg od 2/3 kapaciteta, jer tokom sterilizacije čepovi mogu postati vlažni i smjesa može izgubiti sterilnost.

Seredovishche, koje se sterilizira na temperaturi iznad 100°C, sipa se u čiste, suhe posude. Proizvodi koji se steriliziraju na niskim temperaturama sipaju se u sterilne posude.

Smjesa se sipa kašikom, na čijem se kraju nalazi humusna cijev napravljena od Moraove cjediljke. Za mirno flaširanje koristite čaše, birete, dozatore, špriceve pipete itd. (malih 16).

Središte posuda treba zatvoriti čepovima od pamučne gaze, a na njih staviti papirne vrećice. Važno je da prilikom sipanja sredine ne kvasite rubove posude, inače se čepovi mogu zalijepiti za njih. Naljepnica s nazivom medija i datumom pripreme čvrsto je pričvršćena za kožu.

Sterilizacija. Režim sterilizacije se zasniva na uslovima boravka i uputstvima za Vaš recept. Zrazkovov dijagram režima sterilizacije medijalnih dijelova prikazan je u tabeli. 8.

1 (Rijetke namirnice koje sadrže ugljikohidrate, proteine ​​i vitamine najbolje se steriliziraju pomoću bakterijskih filtera.)

Kontrola pripremljene podloge: a) za kontrolu sterilnosti podloge stavite ih na termostat na 2 dana, nakon čega ponovo gledaju. Sve dok ne pokazuju znakove rasta, tretiraju se kao sterilne i prebacuju se na hemijsku kontrolu niza kožnih infekcija; b) hemijska kontrola: rezidualno podesiti pH, umesto dodavanja azota, peptona, hlorida (njihova količina može biti slična onoj koja je naznačena u receptu).

Hemijska kontrola medija se vrši u hemijskoj laboratoriji; c) za biološku kontrolu, određeni broj ležišta se inokuliše posebno odabranim kulturama mikroorganizama, a njihov rast se koristi za procjenu životnog vijeka ležišta. Prije gotovog proizvoda dodaju se etiketa i pasoš koji označavaju naziv skladišta proizvoda, rezultate kontrole itd.

Čuvajte proizvode na sobnoj temperaturi u ormarićima dizajniranim posebno za njih. Neke tečnosti, na primer tečnosti sa krvlju i vitaminima, čuvaju se u frižideru.

Recepti za pripremu jednostavnih (osnovnih) sastojaka i izotoničnih sastojaka sa natrijum hloridom

Izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodajte 9 g natrijum hlorida u 1 litar destilovane vode. Prvo filtrirajte, podesite pH vrednost, ako je potrebno, sterilišite na 120° 30 minuta.

Mesna peptonska juha (MPB). Dodajte 1% peptona i 0,5% x u vodu za meso. uključujući natrijum hlorid, kuvati na laganoj vatri 10-15 minuta da se rastvori tečnosti, podesiti potrebnu pH vrednost i ponovo kuvati 30-40 minuta dok se opsada ne oslobodi. Filtrirati, dodati vodu do prvobitne zapremine i sterilisati 20 minuta na 120°.

Hottinter's Broth. Hottingerov digest treba razrijediti vodom 5-6 puta u zavisnosti od toga koliko je aminokiselina dodano u vino i koliko je u čorbi (navedeno u pasošu digestora i receptu za čorbu). Na primjer, za pripremu medijuma sa 1,2 g/l aminskog dušika, smjesa je 9,0. g/l treba razrijediti 7-5 puta (9,0:1,2). Da biste razrijedili varenje, dodajte 0,5% natrijum hlorida i kuhajte na laganoj vatri dok se sol ne otopi.

Mesni pepton agar (MPA). U gotov bujon (prije ili poslije sterilizacije) dodajte 2-3% rafiniranog agar-agara i kuhajte, miješajući, na laganoj vatri dok se agar potpuno ne otopi. MPA se može kuhati u autoklavu koristeći Koch aparat. Pripremljeni centar se po potrebi bistri, filtrira i steriliše 20 minuta na 120°C.

Čisti agar miješa 0,4-0,5% agar-agara.

Zhivilny želatin. U gotov bujon dodati 10-15% želatine, zagrijati dok se ne rastopi (ne ključati!), sipati u sterilne posude i sterilizirati na pari.

Recepti za pripremu sklopivih sredina

Mediji sa ugljikohidratima. U glavnu juhu ili otopljeni agar dodajte potrebnu jačinu (0,1-2%) ugljikohidrata (na primjer, glukozu). Nakon doziranja sipajte u sterilne posude i sterilizirajte parom. Ostaci u ugljenim hidratima često potpadaju pod ovaj režim sterilizacije, što je najvažnije 25-30% sadržaja u ugljenim hidratima, sterilizacija kroz bakterijski filter, dodaje se po potrebi nakon aseptičnog tretmana u sterilne osnovne podloge - p.s. Za kontrolu sterilnosti sredina je spremna pre implantacije .

Seredovishcha sa krvlju pripremite sterilne jednostavne proizvode, dodajući u aseptične rezervoare (po mogućnosti u kutiju) do 30% (prosječno 5%) sterilne defibrirane krvi. Prije topljenja središta agara, rastopite ga i ohladite na 45°C. Odredite temperaturu centra podizanjem posude na dno donjeg proreza. Na potrebnoj temperaturi, osjećaj vruće hrane može biti podnošljiv, ali ne vruće. Nakon dodavanja krvi, dok se sredina ne zamrzne, pažljivo promiješajte i umjesto smjese sipajte čaše ili epruvete.

Respect! Ne možete ispljunuti krv srednje klase - krv morate promijeniti svojom moći.

Među krvnim serumom kuvaj ovako, kao prokleta stvar srednje klase. Dodajte 10-20% sirupa glavnim sastojcima, bez dodavanja konzervansa i prethodno inaktivirano na 56° 30 minuta u vodenom kupatilu ili u inaktivatoru. Kada se inaktivira, oslobađa se govor (komplement), koji štetno djeluje na mikrobe.

Među zhovchyu. Za jednostavne pripreme dodajte 10-40% smjese u smjesu, podesite željeni pH i sterilizirajte 20 minuta na 120°C. U sterilnu smjesu možete dodati sterilnu tekućinu u aseptičnim ispiranjima.

Sipanje agar medija u Petrijevu posudu. Pre prelivanja sredina se otopi u vodenom kupatilu i ohladi na 45-50°C. Za šolju prečnika 9 cm dodati 15-20 ml sredine (visina kugle je 0,25-0,3 cm) . Kako je lopta veća, kolonije se pojavljuju u kontrastu na novoj površini. Sa vrlo tankom kuglom, veliki broj živih dijelova je oštro razgraničen (sredina se brzo spušta) - upija se kultivacija uma.

Sipajte smjesu u sterilne čaše u aseptičnim rezervoarima. Stavite čaše na vrh dok ne izgore. Uzmite posudu sa centrom iz desne ruke, dodirujući je vatrom. Lijevom rukom podignite čep, stiskajući ga malim prstom i dlanom. Zapalite vrat posude i lagano otvorite poklopac prstima lijeve ruke. Ispod nje umetnite grlić boce, a da se ne lepite za ivicu šoljice. Dok sipate sredinu, zašijte je tako da se ravnomjerno širi po dnu čaše. Prilikom sipanja, lukovice vetra se pojavljuju na površini sredine, pre nego što se uhvate u sredinu, doneti polovice kolača od sira ili falnika i spljoštiti lukovice. Zatim zatvorite šolju i ostavite da se sredina uhvati. Ako provedete dan prije flaširanja, sredina se mora osušiti. Za ovu šolju pažljivo otvorite termostat i umetnite poklopce i čaše sa otvorenom stranom nadole na 20-30 minuta. Kada se setva izvrši sledećeg dana nakon prelivanja, čaše se, bez sušenja, pale u isti papir kojim su sterilisane i stave u frižider.

Priprema agar kosog. Postavite epruvete sa 4-5 ml sterilnog otopljenog jezgra agara u niski položaj (na približno 20°) tako da jezgro ne prelazi 2/3 epruvete, inače bi čep mogao postati mokar. Kada se sredina uhvati, postavite epruvete okomito kako biste omogućili da kondenzacija iscuri. Bolje je koristiti svježe narezan agar.

Respect! Nemoguće je ukloniti srednji dio, koji nema kondenzaciju. Zatim ga ponovo zagrijte u vodenom kupatilu i pokosite.

Suva sredina

Domaća industrija proizvodi suhe proizvode različitih namjena: jednostavne, selektivne, diferencijalno-dijagnostičke, posebne. Ovi puderi dolaze u bočicama sa pukotinama koje će se zeznuti. Držite suhe sastojke dobro zatvorene na tamnom mjestu - smrad je higroskopan. Laboratorija priprema prah od praha i propisuje ga na etiketi.

Razlika između suhih sastojaka i onih pripremljenih u laboratoriji - standardizacija (proizvode se u velikim serijama), jednostavnost pripreme, dostupnost svakom (sličnom) umu, stabilnost, ekonomičnost. Važno je da se mogu pripremati od zamjene za meso: hidroliziranog kazeina, fibrina, klica i proteinskih frakcija mikrobnih stanica (sarcin).

Kontrolišite hranu

1. Koji je pH medija za uzgoj većine patogenih mikroba prije sterilizacije i zašto?

2. Na kojoj temperaturi se jezgra agara tope i tope?

3. Koja je odgovornost za pripremu jela u koje se sipa smjesa sa ugljikohidratima i proteinima?

Zavdannya

1. Pripremiti MPB, MPA, bujon i Hottinger agar sa pH 7,2-7,4, sipati u boce i epruvete; sterilisati.

2. Pripremiti Hessov centar od suvih prahova, sipati 4-5 ml u epruvete i sterilisati.

3. Pripremite krvni agar i sipajte ga u Petrijeve posude.

4. Od suhih prahova pripremiti Endo, EMC, Ploskireva centar prah i sipati ih u Petrijevu posudu.

5. Pripremite kosi agar.

Metode sadnje

Važan korak u bakteriološkom istraživanju je kultura. Važno je obratiti pažnju na prirodu sjemenskog materijala i podloge i različite metode sjetve. Svi smradovi sadrže vezivno sredstvo: za zaštitu usjeva od stranih mikroba. Stoga, nastavite što je moguće lakše, ali bez oštrih talasa, koji će uzrokovati ljuljanje vjetra. Prije sata sjetve nemoguće je moliti. Radite bolje u boksu.

Respect! Ne zaboravite slijediti posebna sigurnosna pravila pri radu s materijalom.

Inokulacija iz epruvete u epruvetu. Epruvetu sa sjemenskim materijalom i epruvetu sa sredinom lagano se trljaju lijevom rukom između palca i srednjeg prsta tako da ivice epruveta budu u istom nivou, a njihovi oslonci na vrhu četke. . Postavite epruvetu sa materijalom za sadnju bliže sebi. S desne strane, poput olovke za pisanje, odrežite bakterijsku petlju i sterilizirajte je, postavljajući je okomito na polovicu kaputa. Upotrijebite mali prst i ivicu desne ruke da odmah uklonite štetne čepove. Uklonite čepove ne trzajem, već glatko - laganim vijcima. Kada su čepovi uklonjeni, rubovi epruveta su ogorčeni od strane polovine čaše. Prženu omču kroz polovinu čaše ubaciti u epruvetu sa sjemenskim materijalom, ohladiti je i, sakupivši komadiće materijala, pažljivo prebaciti iz jezgre u epruvetu.

Kod sjetve rijetke podloge sjemenski materijal se melje na epruveti iznad sredine i ispere sredinom.

Kada inokulirate sredinu štapićem, umotajte je u sredinu i isperite 3-5 sekundi. Kada se nanese na duboku sredinu, materijal se utrlja na njegovu površinu, omotavajući tampon, nakon čega se tampon ne kontaminira (stavlja se u epruvetu kada se preda u laboratoriju i autoklavira).

Respect! Pazite da sredina ne pomiče ili navlaži čep.

Kada koristite kosine, agar materijal treba utrljati po površini središta cik-cak tokovima odozdo prema vrhu, počevši između kondenzata.

Prilikom setve na debelu jezgru, sipajući u epruvete sa čepom, čep probušite omčom od sadnog materijala, tako da setvu nazovete "injekcija".

Nakon sjetve, omča se uklanja iz epruvete, rubovi epruveta se spaljuju i, provlačeći čepove kroz polovinu epruvete, epruvete se zatvaraju, nakon čega se omča prži.

Inokulacija rijetkog materijala može se obaviti sterilnim pipetama (Pasterovim ili graduiranim). Nakon sjetve, pipete se zatvaraju u prostor za dezinfekciju.

Prosijajte bočicu, dušeke i boce na približno isti način kao u epruveti, samo tako što ćete prvo sakupiti materijal (petlja ili pipeta), a zatim podići posudu od sredine.

Napišite iz zasijanog useva i stavite ga na termostat.

Inokulacija u epruvete iz Petrijevih zdjela. Saznavši prirodu rasta kulture na čaši, sa strane dna označavaju potrebnu parcelu za sjetvu s voštanom maslinom. Postavite šolju sa materijalom za sejanje ispred sebe dok vrh ne izgori. Levom rukom otvorite poklopac i ispod njega umetnite pečenu omču. Nakon hlađenja petlje, sakupite sadni materijal sa određene parcele. Zamotajte omču, zatvorite čašu i lijevom rukom uzmite epruvetu iz sredine. Setva se vrši na isti način kao od epruvete do epruvete. Nakon što ste zasijali čašu, okrenite dno dok ne izgori.

Sjetva na agar u Petrijevoj posudi. Setva sa lopaticom. Lopatica je ili staklena ili metalna cijev, čiji je kraj savijen tako da izgleda kao tricut. Lopatica se može napraviti od Pasteurove pipete, savijajući tanki kraj ispod kraja, koji se prvo zagreva u polovini posude.

Levom rukom lagano otvorite poklopac, dodirujući ga palcem i malim prstom. Uz pomoć petlje, pipete ili staklenog štapića, nanesite sjemenski materijal na površinu središta, a zatim ga pažljivo utrljajte kružnim rubovima lopatice dok lopatica ne prestane slobodno da se kreće po površini središta, svojim lijevom rukom pritisnuvši vrh i odmah zamotajte šolju. Kada je sjetva završena, izvadite lopaticu iz čaše i zatvorite poklopac. Prokleta lopatica se postavlja blizu rupe za dezinfekciju, a metalna lopatica se prži blizu polovine palete.

Sjetva u petlju. Mala količina inokuluma (od kojih se neki prvo zasiti u sterilnim izotonskim dozatorima ili bujonima) utrljava se petljom u površinu sredine duž ruba čaše, prolazeći omčom s jedne na drugu stranu nekoliko puta. Zatim, kada su pruge gotove, probušite agar petljom, uklanjajući višak sjemenskog materijala. Sjemenski materijal koji ostane na petlji raspoređen je u cik-cak pramenovima po cijeloj površini sredine. Nakon završene sjetve zatvorite čašu i peglajte omču.

Sejem u petlji u sektore. Postavite šolju sa strane na dno u sektore. Setva se rotira u cik-cak šarama od ivice čaše do centra. Potrebno je zašiti tako da udarci ne ulaze u sektor za suđenje.

Setva brisom. Stavite tampon sa sjemenskim materijalom u otvorenu čašu i trljajte ga kružnim rukama po površini sredine, omotavajući tampon i čašicu.

Sjetva sa travnjakom. Otprilike 1 ml (20 kapi) rijetke kulture (koja je kultura iz čvrstog jezgra, koja se koristi u sterilnom izotoničnom bujonu ili bujonu) nanese se na površinu agara i pažljivo rasporedi podlogu po površini jezgre. Lagano ohladite čašu i pomoću pipete uklonite višak kulture, sipajući je u rastvor za dezinfekciju. Ovdje se postavlja pipeta.

Sjetva u drug agar. Kultura uzgojena u rijetkom mediju ili emulgiranom materijalu dodaje se u posudu s otopljenim i ohlađenim na 45° agar, miješa se i sipa u sterilnu Petrijevu posudu. Sadni materijal možete dodati u praznu čašu i uliti 15-20 ml agara ohlađenog na 45°C. Za mešanje, ukradite malo i umotajte u šolju. Postavite šolje na sto dok sredina ne dođe do kraja.

Postavite čaše sa strane dna i stavite ih na termostat sa dnom prema gore.

Kontrolišite hranu

1. Koja su potrebna aseptična pranja u večernjim satima? Napravi dokaz.

2. Kako je potrebno očistiti radni prostor nakon sjetve?

Metode uzgoja

Za uspješan uzgoj, pored pravilno odabranih podloga i pravilno uzgojenih usjeva, potrebni su optimalni uslovi: temperatura, vlaga, aeracija (navijanje). Po pravilu, spoljašnji umovi su u stanju da stvaraju, pouzdano imitirajući umove prirodnog okruženja.

Temperatura. Optimalna temperatura za uzgoj većine patogenih mikroorganizama (37°C) je postavljena na termostatu (slika 17). Ovo je napravljeno od plutajućih zidova između kojih se nalazi zrak ili voda koja se zagrijava električnom energijom. Opremljen je termostatom koji automatski podešava potrebnu temperaturu, te termometrom za kontrolu temperature.

Na termostat se postavljaju epruvete sa inokulacijama u rešetkama, cjediljkama ili teglama. Čaše u termostatu su krive što su im izgorjela dna. Kako biste osigurali da zrak u termostatu slobodno cirkuliše i da je grijanje ravnomjerno, držite proreze na termostatu na mjestu i nemojte ih prenatrpati. Da biste izbjegli hlađenje kulture, nemojte okretati termostat previsoko.

Laboratorijski tehničar strume pažljivo bilježi temperaturu u termostatu i održava čistoću u opremi, a ako dođe do kvara, pozovite majstora.

Svitlo Najvažniji mikrobi (svi patogeni se prenose na njih) nisu potrebni - uzgajaju se u mraku. Međutim, da se razvije pigmentacija, koja postaje aktivnija na jakom svjetlu, kulture se ostavljaju u termostatu 2-3 dana na sobnoj svjetlosti.

Respect! Nema ni traga direktnim sedativnim promjenama, koje su štetne za usjev.

Vologist. Život mikroba je nemoguć bez vlage - doživotni govor prodire u kožu čak i sa oštećenim izgledom. Kod uzgoja na velikim podlogama potrebno ih je liječiti: sipati u čašu i pokositi u epruvete najmanje jedan dan prije sjetve. Kada uzgajate mikrobe koji su posebno osjetljivi na patogene, kao što je gonokok, postavite termostat na vruću posudu s vodom.

Uslovi uzgoja. Većina patogenih mikroba može se uzgajati 18-24 godine, ali postoje i vrste koje brzo rastu (do 4-6 godina). Da biste sačuvali vlagu u njima, nakon sjetve pamučne čepove zamijenite sterilnim gumenim čepovima ili na njih stavite gumene navlake.

Respect! Humični čepovi se sterilišu u autoklavu, prekriveni papirom.

Aeratsiya. Za potrošnju mikroba u divljini treba ih podijeliti na aerobe i anaerobe. Grupe napada će zahtijevati različite umove da se kultiviraju.

Prisustvo kiselosti, neophodnog za uzgoj aerobnih i fakultativnih anaerobnih, javlja se tokom pasivne i aktivne aeracije.

Pasivna aeracija podrazumijeva uzgoj na tankim i rijetkim centrima u posudama zatvorenim vatom ili čepovima od pamučne gaze, odnosno Petrijevim zdjelicama. Kod takvih kultiviranih mikroba u sredini se razvija kiselost, koja se nalazi u posudi iznad sredine i prolazi kroz koru. Pasivno aerirani usjevi mogu se uzgajati na površini ili tankom sloju sredine, gdje prodire kisela voda.

Aktivna aeracija se javlja tokom uzgoja gline mikroba, ako rastu u velikim sredinama. Kako bi se takvim kulturama pružila dovoljna kiselost, stavljaju se u poseban mikser - stalno miješanje kulture će osigurati kiselost. Kada se uzgaja u biljkama, koje dosežu desetine ili stotine litara, provodi se u uređajima koji se nazivaju reaktori ili fermentori, a zatim se kroz kulturu prodire pomoću posebnih uređaja.

Uzgoj anaeroba više presavijeni, niži aerobni, fragmentima mora biti omogućen pristup slobodnom kiselom vazduhu. Iz tog razloga, vjetar se uklanja iz vitalnog centra na razne načine.

Uzgoj aktinomiceta, gljiva, mikoplazmi, L-forma, spiroheta i protozoa. Uzgoj ovih mikroorganizama je vrlo sličan uzgoju mikroba. Za njih su razvijeni posebni mediji i odabrani načini rada koji zadovoljavaju njihove potrebe.

Čista kultura je nakupljanje mikroba jedne vrste na velikom ili rijetkom živom mediju.

Postoji niz metoda za sagledavanje čiste kulture na osnovu autoriteta materijala koji se proučava i svrhe istraživanja. Osigurajte da su čiste kulture izolirane iz izoliranih kolonija - akumulacija mikroba pojačana vodom u velikom mediju. Važno je zapamtiti da se kolonija najčešće razvija iz jedne mikrobne ćelije, pa se radi o čistoj kulturi tog mikroorganizma.

Faze vizije čiste kulture:

1. dan – uklanjanje izolovanih kolonija. Gotov materijal pospite omčom, pipetom ili staklenim štapićem na površinu agara u Petrijevoj posudi. Koristite lopaticu da utrljate materijal na površinu sredine; Bez paljenja ili okretanja lopatice, posipajte setvu na 2., a zatim na 3. posudu. Ovom setvom 1. čaša prima mnogo materijala i mnogo mikroba, 2. čaša prima manje, a 3. čaša još manje.

Izolirane kolonije mogu se sakupljati pomoću petlje. U tu svrhu, materijal se mora pomiješati s bujonom ili izotoničnim natrijum hloridom.

Dan 2 – mikrobi počinju da rastu na pločama. U 1. čaši postoji značajan rast - možete vidjeti da se izolirana kolonija ne vidi. Izolirane kolonije rastu na površini agara u 2. i 3. čaši. Gledaju se neprekinutim okom, pomoću lupe, mikroskopom malog povećanja i stereoskopskim mikroskopom (odjeljak 31). Željena kolonija se identifikuje sa strane dna posude i prenese na agar kose. Stavite termostat.

Respect! Izolovane kolonije mogu biti subkulturisane.

3. dan - odredite prirodu rasta na kosom agaru. Uzmite bris, pripremite ga i, nakon što ste ga testirali da biste bili sigurni da je kultura čista, pređite na inokulaciju. Čija će se vizija čiste kulture završiti. Kultura se vidi iz pjesme džerel i naziva se soj.

Kada se vidi čista hemokultura, ona se prvo „širi“ u rijetku tekućinu: 10-15 ml sterilno sakupljene krvi inokulira se u 100-150 ml rijetke tekućine. Sramota za one koji imaju malo mikroba u krvi. Odnos krvi koja se inokuliše i vitalne tečnosti je 1:10, a ne kap - tako se krv razređuje (nerazređena krv štetno deluje na mikroorganizme). Stavite tikvice za sjemenje na termostat. Koristeći vodu (ponekad nakon više od sat vremena, pustite da se kultura ukloni sa onoga što je vidljivo) umjesto tikvica, kapnite na čaše kako biste uklonili izolirane kolonije. Po potrebi ponoviti vješanje u razmacima od 2-3 dana.

Kada se iz sekcije vidi čista kultura, voda za ispiranje tikvice i druge vode se prvo centrifugiraju u aseptičnim ispiranjima i sediment se inokulira. Nadalje, vizija čiste kulture vibrira na jedinstven način.

Da biste vidjeli čistu kulturu, selektivni mediji bi trebali biti široko korišteni.

Brojne metode za izolaciju čistih vikorističkih kultura zavise od bioloških karakteristika mikroba koji se mogu vidjeti. Na primjer, ako se vide bakterije koje stvaraju spore, usjevi se zagrijavaju na 80° 10 minuta, dodajući vegetativne forme; kada se otkrije tuberkuloza, otporna na kiseline i livade, uz pomoć ovih tvari formira se sjemenski materijal iz prateće flore; Da bi se otkrili štapići pneumokoka i kuge, bijelim miševima treba dati sljedeći materijal - organizam koji je vrlo osjetljiv na svakodnevni život, a mikrobi se razmnožavaju mnogo više od drugih.

U naučnim istraživanjima, posebno tokom genetskih istraživanja, neophodno je izolovati kulture iz iste ćelije. Takva kultura se zove klon. Za uklanjanje najčešće se koristi mikromanipulator - dodatak s alatima (glave, pipete) mikroskopskih dimenzija. Uz pomoć trimacha, pod kontrolom mikroskopa, ubrizgajte lijek „viseću tačku“, izvucite potrebno tkivo (jedno) i prenesite ga u živi centar.

Vychennya vizionarskih kultura

Proučavanje morfologije, labavosti, tinktorijalne moći (odjeljak 3), prirode rasta na mediju (kulturna moć), enzimske aktivnosti i niskih drugih karakteristika viđenog mikroba omogućava nam da ustanovimo njegov taksonomski status, a zatim klasifikujemo mikroorganizam: naznačiti njegov rod, vrstu, tip, podtip, sortu Ovo se zove identifikacija. Identifikacija mikroorganizama je takođe važna u dijagnostici infekcije, utvrđenim mehanizmima prenošenja i drugim naučnim i praktičnim istraživanjima.

Kulturna moć

Različite vrste mikroorganizama različito rastu na podlozi. Ove razlike služe kao njihova diferencijacija. Neki dobro rastu na jednostavnim sastojcima, dok drugi mogu rasti samo na posebnim. Mikroorganizmi mogu proizvesti plodan rast, umjeren ili neznatan. Kulture mogu biti bez šipka, sive ili sivo-crne. Kulture mikroorganizama koje stvaraju pigment pokazuju različite boje: bijelu, žutu ili zlatnu kod stafilokoka, crvenu u čudotvornom štapiću, plavo-zelenu u plavo-zelenom štapiću, pigment koji je bezbojan u vodi, ne radi se samo o kolonije koje će biti kore, ali i sredina .

Na visokom Među mikroorganizmima u tlu u određenoj količini sjemenskog materijala stvara se ili čvrsta obloga („travnjak“) ili izolirane kolonije. Usevi su grubi i mekani, bistri i tamni, sa mat, sjajnom, glatkom, zarđalom, suvom, kvrgavom površinom.

Kolonije mogu biti velike (4-5 mm u prečniku ili veće), srednje (2-4 mm), male (1-2 mm) ili patuljaste (manje od 1 mm). Smrad se razlikuje po obliku, šarama na površini središta (zaobljeno, pljosnato, kupolasto, udubljeno, okruglo, rozeto), obliku rubova (rebrasto, uvelo, izrezano).

U rijetkim slučajevima Među mikroorganizmima mogu stvoriti glatki kalamut, proizvesti talog (zrnast, nalik na pilu, nalik na plastiku) ili se rastopiti (mekan, grub, naboran).

Uglavnom U sredini, pri sjetvi injekcijom trulih mikroba, proziva se zamućena sredina, a kod nerukhoma - rast samo "injekcije", lišavajući usta oka.

Kulturni autoriteti ukazuju na prirodu rasta kulture jednostavnim okom, koristeći lupu pod malim mikroskopom ili koristeći stereoskopski mikroskop. Veličina i oblik kolonija, oblik rubova i bistrina određuju se svjetlošću koja prolazi, gledajući čaše sa strane dna. Izlupano svjetlo (sa strane poklopca) ukazuje na prirodu površine, pripremu. Konzistentnost je označena tačkom petlje.

Morfološka moć

Variranje morfologije mikroba također može poslužiti kao njihova diferencijacija. Morfologija se utvrđuje u pripremljenim preparatima. Utvrditi oblik i veličinu ćelija, njihovu distribuciju u preparatu, prisustvo spora, kapsula, flagela. U farmaceutskim preparatima se ukazuje na odnos mikroba prema farbu (tinktorijalna moć) - dobro je ili loše uzimati farby, jer se radi o diferencijalnim efektima (u bilo kojoj boji je zabranjen Gram, Ziehl - Nielsen, itd.). Vitalna fermentacija (preživljavanje) omogućava vam da uspostavite labavost, razlikujete živa i mrtva tkiva i pratite njihov pod. Ova vrsta labavosti može se liječiti prirodnim (nepripremljenim) preparatima (odjeljak 3).

Enzimska aktivnost

Enzimska aktivnost mikroorganizama je bogata i raznolika. Može se koristiti za utvrđivanje vrste i vrste mikroba, te za identifikaciju njegovih varijanti (tzv. biovari). Pogledajmo glavne enzimske moći i njihovo jasno značenje.

Razgradnja ugljikohidrata(saharolitička aktivnost), kako bi se stvorila sposobnost cijepanja pulpe i bogatih atomskih alkohola iz otopljenih kiselina ili kiselina i plinova, djeluju na Hessove medije, koji zamjenjuju taj drugi ugljikohidrat i indikator. Uz dodatak kiseline, koja se razgradi kada se ugljikohidrati razgrade, indikator mijenja kiselost srednjeg toka. Zato se srednji dio naziva "linearni red". Mikrobi koji ne fermentiraju ovaj ugljikohidrat rastu u sredini bez promjene. Prisustvo gasa se određuje formiranjem lukovica u sredini agara ili kupovinom istog u „floatrima“ na retkim sredinama. „Float” je uska staklena epruveta sa zapečaćenim krajem, zatvorena na toploti, koja se pre sterilizacije stavlja u epruvetu sa centrom (Sl. 18).

Rice. 18. Ispitivanje sukrolitičke aktivnosti mikroorganizama. I - "linearni red": a - rijedak srednji dio sa ugljikohidratima i indikatorom Andrede; b – naprotiv, srednji dio sa indikatorom BP: 1 – mikroorganizmi ne fermentiraju ugljikohidrate; 2 - mikroorganizmi fermentiraju u ugljikohidrate iz otopljenih kiselina; 3 - mikroorganizmi fermentiraju ugljene hidrate u rastvorenim kiselinama i gasovima; II - kolonije mikroorganizama koje se ne šire (bez šipka) i izlažu laktozu (ljubičasta u sredini EMC - zla, crvena u sredini Endo - desnoruka)

Osim toga, saharolitička aktivnost se javlja u sredini Endoa, EMC-a i Ploskireva. Mikroorganizmi, fermentirajući mliječnu tikvu (laktozu) u kiselinu u ovim podlogama, fermentiraju koloniju - kiselina mijenja boju indikatora. Kolonije mikroba koje ne fermentiraju laktozu su bez štale (div. Slika 18).

Mlijeko, kada mikrobi rastu i fermentiraju laktozu, gori.

Uz rast mikroorganizama koji stvaraju amilazu, dolazi do njenog razgradnje u sredini škroba. Kako se ispostavilo, dodavanjem Lugolove mješavine kulturi klica - boja središta se ne mijenja. Nerascijepljeni škrob se proizvodi plavim preparatom.

Proteolitička moć(Ovo je sposobnost razlaganja proteina, polipeptida, itd.) u mješavini sa želatinom, mlijekom, surutom i peptonom. Kada mikrobi koji fermentiraju želatinu rastu na jezgri želatine, jezgro se razrjeđuje. Priroda razrjeđivanja koju uzrokuju različite bakterije je različita (slika 19). Mikrobi koji razgrađuju kazein (mliječni protein) uzrokuju peptonizaciju mlijeka – izgleda kao mliječna surutka. Kada se peptoni razgrađuju, mogu biti vidljivi indol, sirvoden i amonijak. Rasvjeta se postavlja uz pomoć indikatorskih papira. Filter papir će zatim iscuriti u tanke trake, osušiti, iseći na tanke kriške 5-6 dana, a nakon sjetve kulture na MPB, stavite čep između njega i zida epruvete. Nakon inkubacije na termostatu, potvrdite rezultat. Amonijak vrišti iz plavog lakmus papira; kada vidite vodu na papiru, natopljenom 20% olovnog acetata i natrijum bikarbonata, stvara se rastvor olovnog sulfata - crni papir; Indol se nalazi u crvenom papiru natopljenom oksalnom kiselinom (čudesna slika 19).

Pored značaja medija, sposobnost mikroorganizama da razgrađuju različite žive supstrate utvrđuje se pomoću papirnih diskova propuštenih tečnim reagensima (Papirni indikatorski sistemi “SIB”). Ovi diskovi se spuštaju u epruvetu sa ucrtanom kulturom i nakon 3 godine inkubacije u termostatu na 37° mijenjaju boju diskova kako bi se ocijenila raspodjela ugljikohidrata, aminokiselina, proteina itd.

Hemolitička moć (proizvodnja eritrocita) proizlazi iz krvi. Srednji dijelovi rijetko postaju čisti, ali se u većim sredinama pojavljuje čista zona u blizini kolonije (Sl. 20). Kada se methemoglobin rastvori, centar je zelen.

Očuvanje useva

Znamenitosti i varijeteti kultura koje postaju vrijedne za nauku ili proizvodnju čuvaju se u muzejima živih kultura. Muzej državne zajednice je u vlasništvu Državnog naučnog i tehničkog komiteta za standardizaciju i kontrolu medicinsko bioloških preparata. L. A. Tarasevich (DIBK).

Cilj konzervacije je održati vitalnost mikroorganizama i spriječiti njihovo obilje. U koju svrhu trebate opustiti ili povećati razmjenu mikrobnog tkiva.

Jedna od najnaprednijih metoda za temeljno očuvanje kultura je liofilizacija – sušenje u vakuumu iz zamrznutog tkiva omogućava stvaranje anabioze. Sušenje se vrši u posebnim uređajima. Čuvati kulture u zatvorenim ampulama na temperaturi od 4°C, odnosno -30-70°C.

Obnavljanje osušenih useva. Vrh ampule jako zagrijte u pola ampule i zalijepite ga vatom, lagano navlažite hladnom vodom, tako da se na površini stvore mikropukotine kroz koje mogu dobro prodrijeti u sredinu ampule. U tom slučaju, pukotine koje prolaze kroz zagrijane ivice se ponovo sterilišu.

* (Ako je na tamponu previše vode, može iscuriti u ampulu i uništiti sterilnost kulture: ona će se navlažiti kroz mikropukotine koje su se otvorile, jer u ampuli postoji vakuum.)

Respect! Ne zaboravite da zatvorena ampula ima vakuum. Ako se voda u njoj apsorbira kroz veliki otvor, kultura u ampuli se može usitniti u prah i otopiti.

Nakon što ga pustite u zrak, razbijte ga pincetom i uklonite vrh ampule. Lagano poprskajte otopinu sterilnom Pasteur pipetom ili dodajte špric u ampulu (bujon ili izotonična tekućina). Pomiješajte ampule i inokulirajte na podlogu. Rast obnovljenih usjeva u prvim sjetvama može biti brži.

Također je moguće dugo vremena čuvati usjeve rijetkim dušikom (-196°C) uz pomoć posebnih uređaja.

Metode nekonvencionalne konzervacije useva su sledeće: 1) subkultivacija (periodično prenošenje na sveže podloge) u intervalima koji su pod kontrolom mikroorganizama, medija i uma uzgoja. Između pasaža, kulture se čuvaju na 4°C; 2) štednja pod Oliya loptom. Kultura se uzgaja u agaru u hrpi visine 5-6 cm, napunjena sterilnom tekućinom vazelina (tečna kuglica je približno 2 cm) i čuva se okomito u frižideru. Kako bi se sačuvali različiti mikroorganizmi, kulture se periodično suspenduju iz epruveta kako bi se provjerila njihova vitalnost; 3) čuvati na -20-70°C; 4) čuvati u zatvorenim epruvetama. Ako je potrebno, sačuvajte materijal i objesite ga na svježu površinu.

Kontrolišite hranu

1. Šta uključuje koncept „bakteriološkog istraživanja“?

2. Kakva kultura postoji za takvo istraživanje?

3. Šta je bakterijska kolonija, kultura, soj, klon?

4. Šta uključuje koncept “kulturne moći mikroba”?

Zavdannya

1. Pročitajte i opišite grupu kolonija. Prebacite ih na agar kose i po sektoru.

2. Pročitajte i opišite prirodu rasta kulture na kosom agaru. Provjerite čistoću i morfologiju kulture fermentiranog pripravka.

3. Prenesite kulturu sa agar kosih u bujon i u podlogu za diferencijalnu dijagnostiku. Pročitajte i zabilježite u protokol prirodu rasta kulture na ovim podlogama i njenu enzimsku moć.

Mesni pepton juha i mesni pepton agar sadrže najjednostavniji živi medij za većinu bakterija. Ulazni materijal za pripremu ovih i drugih živih podloga je mesna voda, koja je jasan izvor kiselih reakcija. Mesna voda sadrži prirodna proteinska jedinjenja (albumin), ekstraktivna jedinjenja i neke soli.

Mesna voda i koncentrovana mesna peptonska juha (prema GOST 10444-63)

Nakon uklanjanja resica, sala i tetiva, kravlje ili konjsko meso se propušta kroz mašinu za mlevenje mesa, a mleveno meso se puni hladnom vodom iz česme, dodajući na kožu 500 g mlevenog mesa i 1 litar vode. Nakon miješanja smjesu dobro zagrijati do ključanja, a zatim nastaviti kuhati 1,5 godine. Mala količina mljevenog mesa pomiješanog s vodom (do 5 litara) može se kuhati na otvorenoj vatri, često miješajući da se sitni komadići mesa ne bi zagorjeli.

Mnogo je brže od ključanja u kotlu sa parnim pokrivačem. Spremnost vode za meso pokazuje se filtriranjem male količine u epruveti kroz papirni filter. Ako je filtrat bistar, voda za meso je spremna. Ako filtrat izađe zamućen, tada će prokuvana tečnost nastaviti da deluje sve dok ne izađe bistar filtrat. Po završenom ključanju iscediti sirovo meso kroz krpu ili duplo presavijenu gazu, iscediti sav sok iz kuvanog mesa i izvaditi sirovo meso, zagrejati kipuću vodu do zapremine klipa. Nema potrebe dodavati veliku količinu vode, jer će kao rezultat kuhanja mesa iz mesa iscuriti mnogo soka. Oni koji su preterano kuvali kuvano vino ili prokuvali kipuću vodu moraju se čuvati prekomernog isparavanja tečnosti.

Izvađena voda od mesa se sipa u tečne tegle, čuva i steriliše u autoklavu 20 minuta na normalnoj temperaturi od 120°W. Od ovako pripremljene mesne vode po potrebi pripremite potrebne žive tečnosti.

Da biste smanjili koncentraciju mesnog peptona bujona (MPB), dodajte 10 g peptona i 5 g natrijum hlorida u 1 litar mesne vode. Reakcija medijuma dovesti do pH 7,0-7,2, prokuvati, filtrirati kroz papirni filter, sipati u čistu epruvetu, zatvorenu pamučnim čepovima, sterilisati u autoklavu 20 minuta na temperaturi od 120 °C.

Uzgoj mesne peptonske čorbe

Priprema mesne vode se vrši na isti način kao i za koncentrovanu čorbu, ali umjesto 500 g mljevenog mesa uzima se 250 g na 1 litar vode. Pripremljenu koncentrovanu mesnu vodu možete razblažiti dva puta. U 1 litar razrijeđene mesne vode dodajte 5 g peptona, 2,5 g natrijum hlorida, postavite pH na 7,0-7,2, a zatim promiješajte na isti način kao i kod pripremanja koncentrovanog mesno-peptonskog bujona.

Ribopepton bujon

U fabrikama gde se mešaju riblje konzerve, umesto mesne vode za pripremu jezgra može se koristiti riblja voda. Ribna voda se priprema od velike mršave ribe. Najbolje ribe za ovu namjenu su smuđ, bakalar i štuka. Riba se ocijedi od četkica i masti, propušta kroz mašinu za mljevenje mesa i prelije hladnom vodom iz česme u omjeru 1 litar vode na 500 g mljevene ribe. Sve daljnje radnje za pripremu riblje vode su slične onima za pripremu mesne vode.

Ribna voda se koristi za pripremu ribopeptonskog bujona. Na 1 litar riblje vode dodajte 10 g peptona, 5 g kuhinjske soli, neutralizirajte na pH 7,0-7,2 i sterilizirajte na isti način kao i mesno-peptonsku čorbu.

Sipanje bujona u epruvete (prije sterilizacije) vrši se kroz staklenu bocu, na čijem se kraju stavlja humusna epruveta sa Mohr-ovim zapečaćenim vrhom (Sl. 52). Prilikom sipanja u epruvetu zatvorite vrh boce tako da se rubovi epruvete ne pokvase čorbom, inače će se pamučni čep osušiti i može narasti mikroorganizmima.

Uspostavljanje reakcije živih medija

U mikrobiološkim istraživanjima uvijek je potrebno izbjegavati kiselost i moć živih medija. Aktivna kiselost živog supstrata je, kako se ispostavilo, od velike važnosti u životnim procesima mikroba: doprinosi njihovom rastu, morfološkim i fiziološkim uticajima. Za većinu bakterija potreban je medij sa pH od 7,2-7,4, za kvasce i plijesan - s pH od 4,5-5,5.

Preživjeli koji se spremaju otkriti biohemijske utjecaje mikroba moraju optimalno reagirati na dati mikrob. pH pripremljenog medija može se odrediti u mikrobiološkoj laboratoriji pomoću elektrometrijskih ili kolorimetrijskih metoda. Elektrometrijski, pH se određuje pomoću laboratorijskog pH metra (na primjer, LP-58 - slika 53) ili jonomera (KFV-I1 - slika 54).

Za mjerenje pH vrijednosti tečnog medija koji se mjeri pomoću jonometra, sipajte oko 40 ml ovog medija u tikvicu, u njega ubacite uložak sa hlor-natrijum elementom i pričvrstite elektrodni uređaj. Igle galvanometra se pomiču i pokazuju pH vrijednost.

Kada koristite laboratorijski pH metar (LP-58), lakše je izmjeriti kalomelnu elektrodu. Staklena elektroda ima vrlo tanke zidove - 0,03-0,05 mm, tako da morate biti oprezni pri radu s njom. Prije sušenja stakla, elektrodu potopite u destilovanu vodu najmanje 1-2 godine, a uz čestu upotrebu potrebno ju je stalno čuvati u destilovanoj vodi, povremeno zamjenjujući svježom vodom.

Prije kalibracije pH pomoću elektrode, podesite pH skalu pufera. pH vrijednost puferske otopine je blizu pH mjerene otopine. Temperaturni kompenzator je podešen na temperaturu pufera i podešava pojačani i potenciometrijski dio jedinice iza normalnog elementa. Zatim, nakon pranja elektroda i vibrirajuće posude destilovanom vodom, napunite je preostalim medijumom i podesite pH medijuma; Postavljanjem temperaturnog kompenzatora na temperaturu jezgre i pritiskom na dugme za uključivanje uređaja na prednjoj ploči pH metra, označite strelicu galvanometra na pH skali. Pravila za čišćenje, podešavanje i nadzor uređaja detaljno su opisana u uputama koje su isporučene uz uređaje. Trajanje analize je 3-5 minuta. Rezultati su tačniji.

Elektrometrijski, pomoću pH metra i jonometra, možete ručno provjeriti pH pripremljenog medija. Prilikom pripreme živih supstrata za bakteriološke analize, fragmenti se koriste za fiksiranje trenutne pH vrijednosti podloge, te za dovođenje reakcije do željene vrijednosti, tada je kolorimetrijska metoda u praksi postala pouzdanija.

Kolorimetrijska metoda se zasniva na moći indikatora da mijenjaju svoju koncentraciju promjenom koncentracije H-hemijskih jona. Indikator kože ima karakterističan pH raspon, koji varira između svake boje. Prema GOST 10444-63, za podešavanje pH živih medija koristite 0,04% otopinu bromotimol plavog. Raspon bromotimol plave je 6,0-7,6. U kiselom srednjem povrću vino bubri žućkastom fermentacijom, na livadama - plavo. Na pH 7,1 proizvodi svijetlozelenu fermentaciju.

Da biste poboljšali reakciju srednje ili konzervirane hrane nakon razvoja mikroorganizama u njima, dodajte 0,04% bromokrezol purpure. Bromokrezol ljubičasta mijenja svoja svojstva brijanja u pH rasponu od 5,2-6,3. U kiselim sredinama vina su blijedožuta, u neutralnim su ljubičasto-ljubičasta, a na pH 6,3 daje zelenilo s ljubičastom nijansom.

Indikatori se pripremaju odmah: 0,1 g sličnog indikatora, važnog u analitičkim ispitivanjima, melje se u malter (ahat) sa 1/20 n. kausticna soda. Za doziranje 0,1 g bromotimol blackita uzmite 3,2 ml 1/20 N. rastvor NaOH; za doziranje 0,1 g bromokrezol purpure – 3,7 ml 1/20 n. rozchinu meadow. U ekstrahovane livade dodati 250 ml destilovane vode i ukloniti 0,04% indikatora. Prilikom pripreme indikatora tragove čuvati na hladnom u staklenim posudama sa brušenim čepom.

Pre sterilizacije, podesite pH medijuma na jednak (7,0-7,2). Da biste to učinili, sipajte 1,5 litara žive tekućine u veliku tikvicu (2-3 litre). Iz birete se u nju počinje kap po kap ulijevati 10% natrijum bikarbonata ili slaba otopina natrijevog hidroksida (na primjer, 0,1 N natrijevog hidroksida), a reakcija medija se provjerava cijeli sat pomoću indikatora ( u ovom slučaju, bromotimol plavo). Da biste to učinili, na bijelu porculansku pločicu (možete koristiti štednjak) nanesite nekoliko kapi srednje tvari u koju dodajte kap indikatora. Ako se za fermentaciju koristi bromotimol plava, onda se ulije soda ili se livada mora žvakati dok medij prije nego što kapljice indikatora ne postane fermentiran u svijetlozelenoj boji. Ako se u kapima tečnog medijuma pri dodavanju indikatora pojavi zeleno-plavi ton, onda je potrebno pri titriranju tečnosti iz viška i u tikvicu sa tragom tečnog medijuma dodati svež, još netitriran tečni medij i ponovo prenesite reakciju.

Dokazavši se u praksi kao dodatni komparator i standardna Michaelisova skala. Ova metoda je precizna - reakcija medija se mjeri do 0,1 pH jedinice. Za taštinu PH Društvenog vijeća za predosobu arogancije Mighalisa, nije chuly na reakciju ceremonija jezgra za pre-lakmus papírtsya reakciju, plemstvo, izhkim Yakkija u blizini ampul Iza, arrogue kriška Slid. Budući da većina živih medija zahtijeva neutralnu i slabu reakciju (pH 7,0-7,2), onda je potrebno koristiti indikator metanitrofenol i niz ampula sa pH 6,8-8,2. Prilikom sterilizacije pH supstrata treba da se smanji za 0,2 jedinice, pa da bi se stvorili optimalni uslovi za rast mikroorganizama pre sterilizacije, medij koji se priprema mora imati pH 7,2-7,4.

Nakon provjere reakcije medijuma sa lakmusom i odabira indikatora, uzmite komparator i ugradite epruvete i standardne ampule sa sličnim pH (Sl. 55). U drugu epruvetu prvog reda (br. 2) na komparatoru uliti 2 ml preostale venske tečnosti; Ovdje dodajte 4 ml destilovane vode i 1 ml 0,3% koncentracije odabranog indikatora (nazvanog, kao što je već rečeno, metanitrofenol). U dvije vanjske epruvete prvog reda br. 1 i 3 sipa se po 2 ml žive tečnosti i 5 ml destilovane vode. U srednju epruvetu drugog reda br. 5 stavite 7 ml destilovane vode. U dva krajnja otvora drugog reda komparatora br. 4 i 6 umetnuti ampule standardne veličine sa pH indikatorima, u intervalima između kojih se uspostavlja reakcija medijuma.

Ispitujući svjetlo kroz donji otvor u komparatoru na bijeloj mat ploči, izjednačiti nivo kore praćenog materijala sa nivoom kore indikatora. Ako se barbarizacija u uzorku sa medijumom izbegne lajanjem indikatora u jednoj ampuli, tada je pH vrednost medijuma ista kao i pH vrednost ove standardne ampule. Ako je boja preostalog uzorka (u drugom uzorku) svjetlija od boje standardne ampule, dodajte 10% natrijum bikarbonata ili 0,1 N u epruvetu uz uzorak kap po kap. dozirati kaustičnu sodu, za to koristite mikrobiretu. Dodavanje tvari koje se neutraliziraju nastavlja se kap po kap sve dok boja u uzorku ne bude jednaka boji u jednoj ampuli. Za koliko je mililitara sode ili vode utrošeno za neutralizaciju 2 ml rastvora (stavljenog u epruvetu br. 2), nije bitno koliko je mililitara rastvora za neutralizaciju potrebno za ugradnju pH nivo je važan u svim pripremama živog medijuma.

U vrlo kiselim sredinama, pH vrijednost se izračunava pomoću dodatnog indikatora para-nitrofenola. Indikatori su pripremljeni za naredni period.

1. Rastvorite 0,3 g meta-nitrofenola u 100 ml destilovane vode (pH raspon 6,8 do 8,4).

2. Rastvoriti 0,1 g para-nitrofenola u 100 ml destilovane vode (pH opseg 5,4 do 7,0).

Također možete postaviti približnu pH vrijednost medija pomoću dodatnog univerzalnog indikatora. Da biste to učinili, sipajte 2-3 ml gotove smjese u porculansku čašu i dodajte 2-3 kapi univerzalnog indikatora. Pomiješavši smjesu staklenim štapićem, izjednačite njenu boju sa tamno smeđom na skali boja papira. pH gotove smjese će biti isti kao što je naznačeno za glatko pripremljenu mast na skali boja. Nivo tačnosti očitavanja pH vrijednosti pomoću univerzalnog indikatora je približno 0,5.

Priprema mesnog pepton agara (MPA)

Agar ("žele" na malajskom) je fleksibilna organska tečnost koja se ekstrahuje iz morskih algi. Iza hemijskog sastava vina krije se ogromna količina ugljikohidrata, koji su u kombinaciji s polisaharidima – sličnim galaktozi – i mogu imati željeni učinak. Dodavanje agara rijetkom mediju daje mu takvu snagu da se topi iznad tačke ključanja. Agar se topi u vodi na približno 80-86 °C, a stvrdnjava na 36-40 °C. Stoga se mikrobne kulture mogu uzgajati na agar podlozi na bilo kojoj temperaturi koja im omogućava da prežive.

Mesni pepton agar se priprema od koncentrovane mesne peptonske čorbe. U veliku erlenmajerovu tikvicu od vatrostalnog stakla stavite do 2 litre, zatvorite pamučnim čepom, ulijte koncentrovanu mesnu peptonsku čorbu, dodajte 2 do 4% (ovisno o sorti) sitno isjeckanog agara i bez zatvaranja čepa ostavite do niske.

Mesni peptonski bujon se mora uzimati sa reakcijskom vrijednošću od 7,4, jer će se tokom sterilizacije pH smanjiti za 0,2. Reakcija mesnog pepton agara može se ustanoviti nakon što se ne otopi. S obzirom da se kvalitetan agar ne taloži, onda nakon podešavanja pH, prokuhajte 12-15 minuta, filtrirajte kroz vatu, sipajte u tikvice ili epruvete (ovisno o potrošnji) i sterilizirajte u autoklavu 20 minuta na 120 °C. .

Ako agar nije dovoljno pročišćen, može izazvati taloženje. U tom slučaju, prije sterilizacije, mesni pepton agar treba razbistriti. Za otopljen i ohlađen na 50°C mesni pepton agar dodati bjelanjak, pomiješati sa 30 ml vode i umutiti dok ne postane glatka. Za 1 litar soka uzmite bjelanjak od jednog pilećeg jajeta. Preporučljivo je koristiti agar sa dodatkom proteina i staviti autoklav na 10 minuta na 120°C. Tokom sata ključanja bjelanjak će izgorjeti i potrošiti sve bitne dijelove. Nakon autoklaviranja, agar se filtrira kroz filter od pamučne gaze. Da biste to učinili, uzmite čašu velikog promjera, navucite gazu preko nje i stavite tanku lopticu vate na životinju. Kipući agar filtrirajte što je brže moguće i sipajte filtrat u epruvete od 5-10 ml dok se ne zamrzne. Sterilizacija srednjeg dijela se vrši u autoklavu, kao što je gore navedeno.

Nakon sterilizacije, epruvete koje sadrže 5 ml agara stavljaju se u sredinu tako da se agar ne lijepi za čepove. Nakon hvatanja, konzumira se "kosi" (ili zakošeni) agar. Postavite epruvete sa 10 ml agara na postolje i ostavite da odstoje, uklonite sredinu, sipajte u “visoki čep”. Ne preporučuje se čuvanje kosog agara duže od 4-7 dana, jer će se osušiti.

Mesni pepton agar je glavni živi medij koji se koristi u bakteriološkim analizama u mikrobiološkim laboratorijama. Ovako to izgleda kao "jednostavni agar", ovako: nakon dodavanja ugljikohidrata, gotovi diferencijalno dijagnostički medij.

Hajde da živimo u sredini U mikrobiologiji oni nazivaju medije koji se koriste za reprodukciju bakterija i drugih mikroorganizama u laboratorijskim i industrijskim umovima.

Za pripremu hrane potreban je cijeli život od proizvoda kuhanog peršuna i algi. Od velikog značaja je prisustvo u organizmu faktora rasta koji katalizuju metaboličke procese mikrobnih ćelija (vitamini grupe B, nikotinska kiselina itd.).

Piece middleware pripremaju ukusne recepte od raznih infuzija ili infuzija kuhanih ili biljnih mješavina s dodatkom anorganskih soli, ugljikohidrata i dušičnih spojeva.

U bakteriološkoj praksi Najčešće se koriste suhe životvorne tvari, koje se temelje na dostupnosti moderne biotehnologije. Za njihovu pripremu koristi se isplativo nežetveno mlijeko: izgubili su naziv za zamjene krvi (hidrolizin-kiseli hidrolizat životinjske krvi, aminopeptid - enzimski hidrolizat krvi; biotehnološki proizvodi í̈ (krmni kvasac, krmni lizin, svinja grožđa, protein lizin).Vrlo standardno skladište.

Iza doslednosti Vitalne supstance mogu biti rijetke, štetne i moćne. Debele sredine se pripremaju dodavanjem 1,5-2% agara u tanku sredinu, odnosno 0,3-0,7% agara. Agar je proizvod prerade posebne vrste morskih algi, topi se na temperaturi od 80-86°C, stvrdne na temperaturi od oko 40°C i kada se smrzne daje srednju debljinu. U tim slučajevima koristite želatinu (10-15%) da uklonite debelu jezgru vene. Određeni broj prirodnih živih medija (spaljeni krvni serum, spaljeni bjelanjak) su također moćni.

Za dobro svih Mediji se dijele na osnovne, selektivne i diferencijalno dijagnostičke.

Glavne sadrže podloge pogodne za rast velikog broja bakterija. Riječ je o triptičkim hidrolizatima mesa, ribljih proizvoda, životinjske krvi i kazeina od kojih se priprema rijetka podloga - živa čorba i, što je još važnije, živi agar. Takve podloge su osnova za pripremu sklopivih živih podloga - pulpe, krvi i sl., koje zadovoljavaju potrebe za ljuskom patogenih bakterija.

Izborni živi mediji koriste se za uzorkovanje i akumulaciju mikroorganizama određene vrste (ili određene grupe) iz materijala koji sprječavaju raznovrsnu mikrofloru trećih strana. Stvaranjem selektivnog životnog okruženja izlazimo iz bioloških karakteristika koje razlikuju ove mikroorganizme od većine drugih. Na primjer, rast bakterija stafilokoka sprječava se povećanjem koncentracije natrijevog klorida, vibrio kolere - u srednjem dijelu.

Diferencijalno-dijagnostički živi mediji koriste se za razlikovanje različitih tipova (ili grupa) mikroorganizama. Princip ovog procesa zasniva se na činjenici da se različite vrste bakterija međusobno natječu za biohemijsku aktivnost zbog različitog skupa enzima.

Posebnu grupu čine sintetički i sintetički živi mediji. Skladište sintetičkih medija uključuje kemijski čiste tvari: aminokiseline, mineralne soli, ugljikohidrate, vitamine. U sintetičke supstance moguće je dodatno uključiti pepton, ekstrakt kvasca i druge žive spojeve. Ova stanja najčešće stagniraju u naučnim istraživanjima i mikrobiološkoj industriji kada se uklone antibiotici, vakcine i drugi lekovi.

Na kraju, zbog uštede živog materijala i brze identifikacije određenih mikroorganizama (enterobakterija, stafilokoka, streptokoka itd.), uspostaviće se takozvani mikrotest sistem (MTS). To su polistirenske ploče s rupama u koje se postavljaju sterilni diferencijalno dijagnostički mediji. Sterilizacija MTS-a se vrši UV sterilizacijom. Mikrotest sistemi su posebno korisni za masovne bakteriološke studije u praktičnim laboratorijama.

Vimogi do žive sredine

Da li živi medij može biti sličan nadolazećim prednostima: uzmite sve što je potrebno za reprodukciju mikroorganizama u obliku koji se lako apsorbira; Majka ima optimalan sadržaj vlage, viskoznost, pH, izotoničnost i moguću bistrinu. Kožno tkivo se steriliše na poseban način i čuva u skladištu.



Prilikom pripreme živih podloga potrebno je zadovoljiti potrebe mikroorganizama koji se uzgajaju u različitim živim elementima. Postoje različite klasifikacije živih medija.

Klasifikacija živih medija iza skladišta:

1. Žao mi je zbog sredine(MPB, MPA, želatina, peptonska voda). Mesno-peptonski bujon (MPB) je proteinska osnova svih sastojaka.

Postoji nekoliko načina za pripremu malih i srednjih preduzeća:

a) u mesnoj vodi od dodavanja gotovog peptona;

b) na varenje proizvoda hidrolizom izlaznog sirupa uz pomoć enzima.

Meso-pepton agar (MPA) se dodaje dodavanjem agar-agara (1,5-3%) u MPB. Ako je MPA podijeljen duž dijagonale epruvete ili boce - ovo je kosi agar. Centar je vertikalno raspoređen u uzorku visine 5-7 cm, u obliku agara. MPA, uhvaćen u Petrijevim posudama kao shashtshki - pločasti agar. U sredini se nalazi vertikalna kugla visine 2-3 cm i dijagonalna kugla iste veličine, slična agaru.

2. Preklopna sredina pripremljeno na jednostavnoj osnovi sa jednostavnim dodacima (ugljeni hidrati, hrana, hrana, jaja, surutka, mleko, so, faktori rasta itd.)

Klasifikacija živih medija na osnovu njihovih izlaznih komponenti:

1. Prirodni živi mediji- Ovo je prirodni proizvod životinjskog ili biljnog uzgoja.

Can buti:

Roslinny (proizvodi - soja, grašak, krompir, šargarepa, itd.).

Bića (izlazni proizvodi - meso, riba, jaja, mlijeko, životinjska tkiva, mliječni proizvodi, krvni serum, itd.).

Smjese (MPA, Levenshtein–Jensen sredina).

2. Piece middleware ukloniti prerađene prirodne proizvode (mesnu vodu, digest), sirovine, ekstrakte iz ovih proizvoda (pepton, ekstrakt kvasca i kukuruza) i druge aditive. Najveća i najraznovrsnija grupa međuvera nalazi se iza skladišta. Pripremaju sjajne recepte od raznih napitaka i infuzija kuhanog crnog i bijelog povrća uz dodatak anorganskih soli, ugljikohidrata i dušičnih spojeva.

3. Sintetički mediji(iz hemijskog skladišta) nastaju od hemijski čistih jedinjenja u tačno utvrđenim koncentracijama (sa dodatkom ugljenih hidrata, soli, aminokiselina, vitamina itd.). Na osnovu ovih medija, dodajući im prirodne ili umjetne medije, sadrže sintetičke medije.

Klasifikacija živih medija na osnovu konzistentnosti: srednji cvetaju rijetko(sredina bez agara), samo na štetu(sa agarom do 1%), schílni(Agarov - 1,5-2,5%). Rijetke podloge često stagniraju radi razvoja fizioloških i biohemijskih karakteristika mikroorganizama, akumulacije biomase i metaboličkih produkata. U sredini, važno je izbjeći potrebu za očuvanjem kultura, alkalnih - za posmatranje mikroorganizama, za proučavanje morfologije kolonija, u dijagnostičke svrhe, za izgled ćelije, te u antagonističke svrhe.im autoriteti i dr.

Klasifikacija živih medija za namjene: univerzalni (pocinčani) i specijalni.

Univerzalna (osnovna) sredina. Ova skuta se koristi za uzgoj velikog broja neživih mikroorganizama, ili se koristi kao osnova za pripremu specijalnih gruša, snabdijevajući ih zaklonom, zukorom, mlijekom, surutom i drugim potrebnim sastojcima te za razmnožavanje jednog ili druga vrsta mikroorganizama. Pre ove grupe dodajte: MPB – mesno-peptonski bujon, MPA – mesno-peptonski agar, MPG – mesno-peptonski želatin itd.

Specijalni srednji softver. Indicirano je promatranje i selektivno uzgajanje vrsta mikroorganizama koje rastu na jednostavnim podlogama.

Postoje sljedeće vrste specijalnih medija: obogaćene podloge, selektivne podloge, diferencijalno dijagnostičke podloge, medije za konzerviranje i akumulacijske medije.

Seredovishcha je bogat. Budući da mnogi mikroorganizmi ne rastu na osnovnim podlogama, kako bi se povećala životna vrijednost podloge, dodaju se ugljikohidrati (ugljikohidratna juha ili agar) ili proteini (sivi agar i bujon, krvni agar i juha). Krvni agar ili krvna juha se odvaja dodavanjem 5-10% zagrijane sterilne defibrinirane krvi ovce, zeca, konja ili čovjeka u tjelesnu tekućinu. Sjeme se koristi za otkrivanje streptokoka, pneumokoka i drugih bakterija, kao i za razvoj hemolitičke aktivnosti. Procijedite juhu od sirupa ili sirup agar uz dodatak 15-20% kinoe ili bichacho sirupa u jednostavnu smjesu.

2. Izborna (izborna) sredina. Ovaj medij je namijenjen uzorkovanju i akumulaciji mikroorganizama različitih vrsta iz materijala kako bi se sadržao niz vrsta mikroba. Prilikom sjetve materijala na njih da sadrži mješavinu različitih mikroorganizama, prvo identifikujemo rast vrste za koju će dati medij biti selektivan. Živost sredine postiže se stvaranjem umova koji su optimalni za uzgoj mikroba (pH, Eh, koncentracija soli, skladištenje živih tvari), zatim. pozitivna selekcija. Ili je moguće dodati supstance na sredinu reka, koje inhibiraju druge mikroorganizme (hormon, visoke koncentracije NaCl, antibiotici, itd.). negativnu selekciju. U ovu grupu:

Selenite centar- Najrasprostranjeniji izvor mikroba salmonele i dizenterije je Sonne. Selenit natrij, koji se nalazi u sredini, stimuliše rast ovih bakterija i potiskuje rast pridružene flore.

Bizmut sulfit agar pomiješajte soli sa bizmutom i dijamantskim zelenilom. Na ovom srednjem dijelu raste salmonela, koja izgleda kao kolonije crne boje. Nemojte dozvoliti da druge vrste bakterija rastu u mediju.

Zhovtkov-solni agar (ZSA) Podloga za otkrivanje stafilokoka sadrži do 10% natrijevog klorida, koji inhibira većinu bakterija koje se nalaze u materijalu. Osim toga, ovaj test je i diferencijalno dijagnostički, jer prisustvo celuloze omogućava otkrivanje enzima lecitinaze (lecitovitelase) koji proizvode patogeni stafilokoki. Lecitinaza razlaže lecitin na fosfoholine i masne kiseline, koje su netopive u vodi, pa sredina kolonija pozitivnih na lecitinazu postaje blijeda i pojavljuje se opalescentna zona u obliku „duginog vijenca“.

Zhovchny bujon selektivan za salmonelu, čija se reprodukcija stimuliše dodatkom 10% gvožđa, što istovremeno stimuliše rast pridruženih mikroorganizama.

Luzhny agar ili drugo Lužna peptonska voda selektivno za bakterije kolere, reakcija medija (pH 9,0) ne prelazi rast bakterija kolere, ali ne ometa rast drugih mikroorganizama. 3-5 dib. I

3. Diferencijalni dijagnostički medij. Diferencijalno-dijagnostički mediji se koriste za razlikovanje jedne vrste mikroorganizama od druge po prirodi njihove enzimske aktivnosti. Skladištenje ovih medija je odabrano na način da se jasno otkrije najkarakterističnija snaga određene vrste mikroorganizama, koja proizlazi iz posebnosti njegove razmjene govora.

U sredinu otkrivenih proteolitičkih i hemolitičkih svojstava mikroba, stavite u svoje skladište proteinske supstance: krv, mleko, želatin itd. Najšire srednje supstance su mesno-peptonski želatin (MPG), surutka od kinoe, mleko i krvni agar (BA).

Mediji za razvoj glikolitičke moći uključuju tri glavne komponente: živu bazu (bujon, agar), supstrat (monota disaharidi, visokoatomski alkoholi) i indikator za identifikaciju vrste enzima. Enzimska razgradnja supstrata dovodi do nulte pH vrijednosti i promjene u fermentaciji sredine. Najveća ekspanzija centra boja je kod raznih ugljikohidrata (na primjer, s bromotimol plavim, indikatorom krvnog tlaka). Šira je i sredina Hissa, koja ima razlike u sposobnosti fermentacije različitih ugljikohidrata iz kiselina i plinova.

Za razlikovanje enterobakterija, zastoj pepton vode sa setom raznih ugljikohidrata, Andredeovim indikatorom i plovcima, tako da će se otkrivena gasifikacija povući i pomoći vizualno identificirati promjenu pH vrijednosti, karakterističnu za različite mikroorganizme. Zokrema, uništena u kiselom pravcu, viklica crvenu sredinu sa Andredeovim reagensom ili vikor sa bromotimol plavim reagensom, zatim kada indikator Andrede i plavi bromotimol plavi ne menjaju količinu ir sredine. Na primjer, prisustvo patogenih bakterija u crijevima formira medije koji omogućavaju diferencijaciju patogenih mikroorganizama od stalnih stanovnika crijeva - mikroorganizama koji razgrađuju laktozu.

Takva sredina je Endo sredina. Glavne komponente Endo jezgra su MPA, laktoza, osnovni fuksin i natrijum sulfit. Živopisna sredina je pripremljena u svetlo rjavoj boji. Kada se laktoza fermentira, stvara se acetaldehid koji reagira sa sulfitom i, kada se oslobodi, fuksin pretvara kolonije u svijetlocrvenu boju. Dakle, crijevni štapić koji fermentira laktozu, kada se uzgaja na svojoj sredini, stvara crvene kolonije metalnog sjaja, a salmonela i šigeli su bez koštica, jer ne fermentiraju laktozu.

4. Mediji akumulacije, U nekim zemljama dolazi do porasta broja različitih vrsta mikroorganizama.

5. Konzervansi (transportni) mediji. Namijenjeno za očuvanje mikroorganizama tokom transporta do mjesta uviđaja. Ovi proizvodi sadrže aditive koji sprečavaju proliferaciju i smrt mikroba, čime se čuva njihova vitalnost. Utvrđeno je da su najstagnirajući spojevi glicerinski sum (Teague-ov medij), smjesa fosfata i pufera i Cari-Blair-ov, Amiesov (sa i bez aktivne vugile), Stewart-ov i drugi.

Sterilizacija živih tkiva.

Sve žive tekućine treba sipati u čiste posude i sterilizirati za njihovu namjenu. Većina medija se steriliše u autoklavu, ali se pod različitim uslovima čuvaju u svom skladištu.

1. Sintetičke podloge i sve agar podloge koje ne sadrže prirodne proteine ​​i ugljikohidrate steriliziraju se 15-20 minuta u autoklavu na temperaturi od 115-120°C i 1-1,5 atmosfere.

2. Serumi koji sadrže ugljikohidrate i mlijeko (prije uključivanja laktoze), živi želatin steriliziraju se parom na temperaturi od 100°C, bilo frakciono ili u autoklavu na 112°C i pod pritiskom do 1 atmosfere.

3. Proizvodi koji sadrže proteinske supstance (krvni serum, ascitna kiselina) obrađuju se tindalizacijom ili filtracijom.

4. Za sterilizaciju živih podloga, koji sadrže prirodne proteine ​​u svom skladištu, filtriraju se filtriranjem kroz Seitz membranske filtere.

Za kontrolu sterilnosti medija nakon sterilizacije, postavite termostat na 37°C za 3-5 dB. Rijetko je srednji dio kriv za gubljenje vida, a na površini, u debelim živim srednjim dijelovima, znakovi rasta se ne vide. Pored kontrole sterilnosti, postoji i hemijska kontrola pripremljene podloge koja se zasniva na tome da se u nekoliko uzoraka kože odredi pH, količina kiselog i amin azota i hlorida.

Postoji i biološka kontrola medija. U ovom slučaju, određeni broj uzoraka sredine inokulira se laboratorijskom kulturom mikroba za koju je sredina pripremljena i utvrđuje se priroda njenog rasta. Tek nakon što srednji izgube kontrolu, mogu se smatrati odgovornim.

Prema definicijama životne sredine, razlikuju se sljedeće glavne kategorije.

Universal- Seredovishcha, na kojoj raste mnogo vrsta patogenih i nepatogenih bakterija. Uključuju: mesno-peptonski bujon (MPB = mesna voda + 1% peptona + 0,5% NaCl), mesno-peptonski agar (MPA = MPB + 2-3% agar).

Diferencijalna dijagnostika- medij koji omogućava izolaciju određenih vrsta bakterija od drugih zbog njihove enzimske aktivnosti ili kulturnih manifestacija. Pred njima se mogu vidjeti srednje zgrade Enda, Levina, Ploskireva, Gissa i mnogih drugih.

Selektivno(Sinoniy: Viborchi, Elective, Zbagachuvalní) - jezgro, puskita rhovini, vicoristovy makroorganizmima nuklearnog žvakanja, biti uzdržan biti suzdržan do zrostani mikroorganizma. Selektivni mediji omogućavaju direktnu selekciju bakterijskih vrsta iz proučavanog materijala. Ovo uključuje mješavine Mullera, selenita, Rapoporta, 1% peptonske vode, itd.

Diferencijalno-selektivni- medij koji će apsorbirati snagu diferencijalno-dijagnostičkih i selektivnih prosjeka. Smrad je vikoriziran, usko, za brzo otkrivanje i identifikaciju bakterija, što se može pratiti do velikog broja široko rasprostranjenih vrsta enterobakterija i pseudomonada (jezgro Sivolodskog).

Poseban- Podloge posebno pripremljene da zaustave rast ovih bakterija, koje ne rastu ili čak ne rastu na univerzalnim podlogama. Prije njih su McCoy-Chapin medij (za suzbijanje rasta tularemije), krvni MPA (za suzbijanje rasta patogenih streptokoka), Levenshtein-Jensen medij (za suzbijanje rasta tuberkuloze) itd.

Sintetički- Medijum veoma složenog hemijskog sastava, koji sadrži mešavinu neorganskih soli i dodatak hemijskih jedinjenja koja služe kao katalizator ugljenika i azota. Izvor takvog sintetičkog medija je minimalni medij M-9, koji sadrži uglavnom energiju iz ugljika i glukoze, te dušik iz NH4C1. Sintetički sastojci mogu biti složeniji uz uključivanje različitih aminokiselina, baza i vitamina.

Sintetička pića- sintetički proizvodi, koji se mogu dopuniti bilo kojim prirodnim proizvodom, na primjer, krvnim serumom. Postoji mnogo različitih opcija za žive medije dizajnirane da zadovolje potrebe različitih vrsta bakterija i dijagnostičke svrhe.

Asinhroni elektromotor A4 koristi se za pogon mehanizama koji ne zahtijevaju regulaciju frekvencije namotaja (ventilatori, ispuhivači, pumpe). Glavne karakteristike motora serije A4 i njihove karakteristike možete pronaći na