Aux milieux vivants pliables pour que les bactéries se couchent. Voir les milieux vivants. Appliquer des médias de diagnostic différentiel
Recherche microbiologique - observation de cultures pures de micro-organismes, culture et culture de leur dominance. Les cultures sont dites pures si ce sont des micro-organismes de la même espèce. La puanteur est nécessaire dans le diagnostic des maladies infectieuses, l'identification des espèces et l'affiliation typique des microbes, dans les robots suivants, l'élimination des produits de la vie des microbes (toxines, antibiotiques, vaccins, etc.).
Pour la culture de micro-organismes (culture en pièces détachées in vitro), des substrats spéciaux sont nécessaires - milieu vivifiant. Au milieu du micro-organisme, tous les processus vitaux sont effectués (vivre, mourir, se multiplier finement), ils sont donc également appelés milieux de culture.
Vivre au milieu
La vie du milieu est la base du travail microbiologique, qui indique souvent les résultats de toutes les recherches. La partie médiane de la culpabilité est de créer le lavage optimal (le meilleur) pour la vie des microbes.
Vimogi au milieu
Les intermédiaires sont responsables de telles actions:
1) être vivant, pour pouvoir retirer à la personne facilement conquise tous les discours, la satisfaction nécessaire des besoins alimentaires et énergétiques. Ils sont à l'origine de discours organogènes et minéraux (inorganiques), dont des microéléments. La parole minérale n'est pas seulement incluse dans la structure du clitinum et active les enzymes, mais détermine également la puissance physique et chimique des médias (pression osmotique, pH et in.). Lors de la culture de micro-organismes bas au milieu, ajoutez des facteurs de croissance - vitamines, acides aminés actifs, tels que la clitine, impossible à synthétiser;
Respect! Les micro-organismes, comme tous les êtres vivants, auront besoin d'une grande quantité d'eau.
2) mères la concentration optimale d'ions d'eau - pH, car ce n'est qu'avec une réaction optimale du milieu, qui contribue à la pénétration de la coquille, que les micro-organismes peuvent conquérir la vie de la parole.
Pour un grand nombre de bactéries pathogènes, un milieu faiblement lumen est optimal (pH 7,2-7,4). Vignatok pour devenir le vibrion du choléra - son optimum se trouve dans la zone des flaques d'eau (pH 8,5-9,0) et le vibrateur de la tuberculose, qui nécessite une réaction légèrement acide (pH 6,2-6,8).
Sob l'heure de croissance des micro-organismes dans les produits acides ou les flaques d'eau de leur vie n'a pas modifié le pH, le milieu est responsable de la mise en mémoire tampon, afin que la parole puisse être vengée, afin que les produits soient neutralisés ; échanger;
3) être isotonique pour les cellules microbiennes ; ainsi l'emprise osmotique du milieu peut être la même que celle du milieu des cellules. Pour un grand nombre de micro-organismes, le milieu moyen est optimal, qui contient 0,5 % de différence par rapport au chlorure de sodium ;
4) être stérile, des éclats de microbes tiers modifient la croissance du microbe existant, signifiant sa puissance et modifiant la puissance du milieu (entrepôt, pH, etc.) ;
5) intergiciel principal en raison de la butyvologie et de la consistance optimale pour le micro-organisme ;
6) potentiel mère pevny okislyuvalno-vydnovny, que spіvvіdnoshnja rechovins, scho pour donner et recevoir des électrons, qui est exprimé par l'indice RH 2 . Ce potentiel montre l'augmentation au milieu de l'acidité. Pour certains micro-organismes, le potentiel élevé requis, pour d'autres - faible. Par exemple, les anaérobies se multiplient à RH 2 non supérieur à 5, et les aérobies - à RH 2 non inférieur à 10.
7) être unifié autant que possible, de manière à augmenter la quantité des autres ingrédients. Ainsi, le milieu de culture de bactéries plus pathogènes est responsable de 0,8-1,2 g/l d'azote aminé NH 2 par rapport à l'azote total des groupements aminés des acides aminés et des polypeptides inférieurs ; 2,5-3,0 g/l d'azote azote N; 0,5 % de chlorures dans la pererahunka pour le chlorure de sodium ; 1% de peptone.
Bazhano, pour que les environnements soient clairvoyants - il vaut mieux suivre la croissance des cultures, il est plus facile de se souvenir de l'égarement de l'environnement par des micro-organismes tiers.
Classement du milieu
Le besoin de discours vivants et la puissance du médium dans divers types de micro-organismes ne sont pas les mêmes. Tse création imparable du médium universel. De plus, sur le choix de ce chi du milieu, ajoutez le nombre de réalisations.
En cette heure, la grandeur du nombre des médiums a été proposée ; de tels signes sont posés comme base pour leur classification.
1. Composants externes. Par composants vihіdnim, faites la distinction entre les supports naturels et synthétiques. Les milieux naturels sont préparés à partir des produits de la plante botanique et en croissance. Au Danemark; une heure de pourriture du milieu, dans certaines variétés de produits de grub (viande et autres) sont remplacés par des produits non récoltés: boroshny kystique et ribnim, bruines de fourrage, caillots de sang et dans. Indépendamment du fait que l'entrepôt de milieux vivants à partir de produits naturels est également pliable et change de jachère sous forme de syrovine sauvage. Les milieux synthétiques sont préparés à partir de composés organiques et inorganiques chimiquement purs, issus de concentrations et différences précisément déterminées dans deux eaux distillées. La priorité de ces intermédiaires est importante pour ceux qui ont un entrepôt permanent (apparemment, les discours skіlki et yakі y sont inclus), que ces intermédiaires sont faciles à créer.
2. cohérence(Stupin schіlnostі). Ceux du milieu sont rіdkі, schіlnі et napіvіrіdki. Ces middlewares sont préparés à partir de rares, jusqu'à ce qu'ils soient ajoutés pour ajouter de l'agar-agar ou de la gélatine au milieu de la consistance requise.
L'agar-agar est un polysaccharide extrait de variétés d'algues chantantes. Vіn є pour micro-organisme avec un discours animé et ne sert qu'au renforcement du milieu. Dans l'eau, l'agar fond à 80-100°C, fond à 40-45°C.
La gélatine est la protéine du voyage de la créature. À 25-30 ° C, les milieux de gélatine fondent, de sorte que les cultures qui s'y trouvent se développent à température ambiante. L'épaisseur de ces milieux à un pH inférieur à 60 et supérieur à 70 change et la puanteur est fortement dépassée. La gélatine vicariante de micro-organisme actif comme la parole qui donne la vie - pour la croissance de її du milieu augmente.
De plus, comme cœur moyen, brûlez le sérum sanguin, brûlez les œufs, les pommes de terre, le milieu avec du gel de silice.
3. Stock. Les parties médianes sont divisées en simples et pliantes. Du bouillon de peptone de viande (MPB), de la gélose peptonée de viande (MPA), du bouillon et de la gélose Hottinger, de la gélatine vivante et de l'eau peptonée sont ajoutés au premier. Les milieux pliants sont préparés, en ajoutant du sang aux milieux simples, sirovatka, glucides et autres paroles, reproduction nécessaire de ces autres micro-organismes.
4. Rendez-vous: a) les milieux principaux (demi-vivants) servent à la culture de bactéries plus pathogènes. Tse vishchezgadani MPA, MPB, bouillon et gélose Hottinger, eau peptonée ;
b) les milieux spéciaux servent à voir et à faire pousser des micro-organismes, comme la culture sur des milieux simples. Par exemple, pour la culture du streptocoque, ajoutez tsukor au milieu, pour les méningocoques pneumo-i - sérum sanguin, pour la toux toux - sang;
c) les milieux sélectifs (sélectifs) servent à voir le type de chant des microbes, la croissance de ces puants à saturer, étouffant la croissance des micro-organismes qui les accompagnent. Ainsi, les sels d'acides zhovchnyh, aggravant la croissance des colibacilles intestinaux, rendent le milieu sélectif pour l'agent causal de la fièvre typhoïde. Le milieu devient sélectif lorsqu'on leur ajoute des antibiotiques chantants, des sels, des changements de pH.
Certains médias électifs sont appelés médias d'accumulation. Le culot d'un tel milieu est de l'eau peptonée avec un pH de 8,0. À ce pH, le vibrion cholérique s'y reproduit activement, les autres micro-organismes ne se développent pas;
d) les milieux de diagnostic différentiel permettent de distinguer (différencier) un type de microbes avec une autre activité enzymatique, par exemple, le milieu Hiss avec des glucides et un indicateur. Avec la croissance des micro-organismes, qui sont divisés en glucides, la couleur du milieu change ;
e) les milieux de conservation sont désignés pour l'ensemencement primaire et le transport du matériel ultérieur ; ils ont une préférence pour les microorganismes pathogènes et négligent le développement des saprophytes. La crosse d'un tel milieu est la somme de glycérine, qui est victorieuse pour la sélection de la vigueur lors du suivi, qui est réalisée avec la méthode de détection des bactéries de l'intestin bas.
Les recettes pour la préparation des milieux deaky sont suggérées pour l'exemple d'une division offensive et celle de l'autre partie du mouchoir.
Contrôler l'alimentation
1. Quel genre de vimog peut être satisfait des quartiers d'habitation du milieu ?
2. Comment classer les composants intermédiaires par composants externes ?
3. Quels sont les discours pour renforcer le milieu ?
4. Quels sont les milieux ?
5. Quelles sont les parties médianes dites pliables, quelle est leur base ?
6. Comment les médiums permettent-ils de prendre en compte la croissance plus importante de certains microbes tout en étranglant d'autres pendant une heure ?
7. Quels milieux montrent l'activité enzymatique des microbes ?
gestionnaire
Remplissez le formulaire en indiquant quels groupes ajoutent le milieu.
Préparation des médiums
Les ustensiles de préparation des médiums ne sont pas coupables de vengeance des discours de tiers, par exemple, les prés, qui sont vus par certaines sortes de skla, ou les salles oxydées, qui peuvent être consommées le mercredi lors de la cuisson dans des pots rouillés. Maudits soient les meilleurs, ustensiles en émail ou en aluminium. De grandes quantités de milieu (dizaines et centaines de litres) sont préparées dans des digesteurs ou réacteurs spéciaux (petits 14). Avant l'implantation, les plats doivent être soigneusement lavés, rincés et séchés. Faire bouillir la nouvelle verrerie à l'avance pendant 30 minutes dans de l'acide chlorhydrique à 1-2%, ou zanyruyut en même temps pour la nuit, après quoi elle est rincée à l'eau courante pendant une longue période.
Respect! Les ustensiles destinés à la préparation des milieux ne peuvent pas être utilisés à d'autres fins, par exemple, pour le stockage de réactifs chimiques, ou pour la décontamination, qui peuvent être désinfectés - les traces de navigation de ces discours peuvent provoquer la croissance de micro-organismes.
Vihіdnoy syrovina pour la préparation d'un grand nombre de médiums, servez les produits du voyage aborosline d'une créature: viande et yogo zaminniki, lait, œufs, pommes de terre, soja, maïs, levure et autres.
Les principaux bouillons d'élevage sont cuits dans de l'eau de viande ou des digestions, emportés par hydrolyse acide ou enzymatique de la syrovine. Bouglioni avec digestion en 5-10 fois économique, moins avec de l'eau de viande. Seredovishcha sur les digestes riches en acides aminés, otzhe, pozhivnishі; peut être plus tamponné, de sorte qu'une valeur de pH plus stable peut être obtenue. De plus, le digest peut être préparé à partir de substituts de viande (caillots sanguins, placenta, caséine aussi).
A cette heure, les laboratoires étaient approvisionnés en eau de viande et en digestions centralisées. Le plus souvent, ils sont recouverts d'une croûte de digestion pancréatique de Hottinger, d'hydrolysats de caséine ou de levures fourragères. De tsikh napіvfabrikativ pour les recettes de chant, préparez le middleware nécessaire.
Étapes de cuisson milieu : 1) variante ; 2) réglage de la valeur de pH optimale ; 3) éclairage ; 4) filtrer ; 5) mise en bouteille ; 6) stérilisation ; 7) contrôle.
ébullition médiums à feu vif, bains-marie, dans des autoclaves ou des chaudières, qui sont chauffés par paires.
Réglage du pH ceux du milieu sont orientés à l'aide de papiers indicateurs. Pour une détermination précise du pH, ils sont munis d'un potentiomètre, le verre d'électrodes zastosovuyuschie est connecté aux instructions du comparateur (appareil Mikhailis), qui consiste en un trépied avec des douilles pour tubes à essai (Fig. 15) et un ensemble de Normes de pH. Lors de la préparation des milieux, ils sonnent comme l'indicateur méthanitrophénol, qui change la couleur dans la plage de 6,8 à 8,4.
Pour déterminer le pH du milieu de l'éprouvette 4, le diamètre et la couleur des flacons, qui ne correspondent pas aux éprouvettes avec les étalons, sont placés aux nids 1, 2, 3 et 5 (div. Fig. 15). Dans les 1er et 3ème tubes verser 5 ml d'eau distillée ; en 5 ans - 7 ml; dans le 2ème - 4 ml d'eau et 1 ml de l'indicateur. Dans les nids 4 et 6, définissez la norme pour le pH requis. Aux 1ère, 2ème et 3ème éprouvettes, verser 2 ml du milieu refroidi. Au lieu de tubes à essai, mélangez.
La couleur des ridins dans les tubes à essai est égale à la lumière qui passe à travers, en fermant l'ouverture arrière avec un filtre (mat ou bleu, comme s'il était intensément jaune). Le pH de l'échantillon testé varie en fonction de la norme de pH, à partir de la couleur dont la couleur est choisie.
Préparer le milieu en réglant le pH, dans les nids 4 et 6 régler les étalons dont le pH est proche du nécessaire, et dans la 2ème éprouvette avec le milieu testé et l'indicateur, ajouter de la burette la même quantité de prairie, ainsi que la lumière dans la 2ème lumière de test pour la norme, ou la différence d'acidité est comme une norme de lumière. La flaque (ou l'acide) est ajoutée jusqu'à ce qu'elle soit calme, jusqu'à ce que la couleur de l'autre échantillon ne corresponde pas à la couleur des étalons. Kіlkіst lulu (acides), ajoutez jusqu'à 2 ml de milieu dans 2 échantillons, pereahovuyut sur toute la longueur du milieu préparé. Par exemple, 2 gouttes (0,1 ml) de 0,05 n. une prairie, alors pour le traitement de 1 litre il faut 500 fois plus, jusqu'à 50 ml de 0,05 n. ou 2,5 ml 1n. ouvrir le pré.
Lors de la stérilisation, le pH des milieux diminue de 0,2 à celui de l'élimination du milieu avec un pH de 7,2-7,4, et l'épi est préparé avec un pH de 7,4-7,6.
Éclairage les milieux vibrent, comme si lors de la cuisson, la puanteur kalamutnіyut ou s'assombrissait. Pour éclaircir le mercredi, réchauffer à 50°C, verser le blanc d'un œuf de poule, battre avec de l'eau, remuer et faire bouillir. Zgortayuchis, écureuil zahoplyuє au siège de l'appel de la partie médiane. De la même manière, il est possible de remplacer le blanc d'œuf par du sérum sanguin vicariant (20-30 ml pour 1 litre de milieu).
Bain filtrant les milieux gélatineux rares et fondants sont vibrés à travers de l'eau en papier ou à travers des filtres mater'yanі. La filtration des milieux gélosés est difficile - la puanteur s'empare rapidement. Sondez-les à travers un filtre en gaze de coton (un servlet de gaze est placé près de la virva et un sein de coton est écrit dessus). Il est possible de filtrer du papier vikoristovuvaty ou de la mater'yanі, donc effectuez la filtration dans un autoclave chaud ou dans virvah avec pidgrivom.
La filtration des milieux gélosés peut être remplacée par les circonstances. Le milieu est versé près d'un grand récipient cylindrique et fondu dans un autoclave. En cas de refroidissement suffisant du milieu du dispositif d'enroulement, l'air qu'il contient se dépose souvent au fond. Le jour suivant, le caillot d'agar est retiré du navire (pour lequel le navire est temporairement placé près de l'eau chaude) et la partie inférieure du siège est coupée avec un couteau, qui s'est accumulé. La partie supérieure est fondue et coulée en haut du récipient.
embouteillage milieux dans des tubes à essai (3-5 ml ou 10 ml chacun), flacons, flacons, matelas et balles pas plus de 2/3 de la capacité, de sorte que pendant la stérilisation, les bouchons peuvent se mouiller et les milieux perdent leur stérilité.
Le milieu, comme stérilisé à des températures supérieures à 100 ° C, versé dans des plats propres et secs. Les milieux stérilisés à basse température sont versés obov'yazkovo près de plats stériles.
Verser le milieu à l'aide d'un arrosoir, au bout duquel un tuyau de gomme est habillé du zatiskach Mora. Pour un embouteillage serein, posez béchers, burettes, doseurs, seringues, pipettes finement (petit 16).
Les ustensiles du milieu sont fermés par des bouchons en gaze de coton, sur lesquels sont posés des capuchons en papier. Il est important que lors du versement, le milieu ne mouille pas les bords de la vaisselle, sinon les bouchons pourraient y coller. Attachez une étiquette avec le nom du lieu de résidence et la date de préparation au vaisseau de la peau.
Stérilisation. Le mode de stérilisation doit être déposé dans l'entrepôt du milieu de résidence et les indications pour cette recette. Le schéma de Zrazkova pour le mode de stérilisation du support est présenté dans le tableau. huit.
1 (Certains milieux contenant des glucides, des protéines et des vitamines sont plus susceptibles d'être stérilisés pour des filtres bactériens supplémentaires.)
Contrôler milieux préparés : a) pour contrôler la stérilité du milieu, le mettre dans un thermostat pendant 2 jours, après quoi il est revu. Cependant, il n'y a aucun signe de croissance dans les environnements, ils sont considérés comme stériles et transférés pour le contrôle chimique de la quantité de lésions cutanées ; b) contrôle chimique : rétablir résiduellement le pH, à la place de l'azote total et aminé, de la peptone, des chlorures (leur quantité peut être la même que celle indiquée dans la recette).
Le contrôle chimique des milieux est effectué dans le laboratoire de chimie ; c) pour le contrôle biologique, un sprat de graines du milieu est planté avec des cultures de micro-organismes spécialement sélectionnées, et pour leur croissance pour juger de la durée de vie (croissance) de la puissance du milieu. Une étiquette et un passeport sont apposés sur le support fini, ainsi que le nom de l'entrepôt du support, les résultats du contrôle et celui en.
Ils s'occupent du milieu pour la température ambiante dans les armoires, cela leur est spécialement réservé. Deyakі seredovishcha, par exemple, seredovischa avec du sang et des vitamines, sortez-le du réfrigérateur.
Recettes pour la préparation de milieux simples (de base) et de chlorure de sodium isotonique
Solution isotonique de chlorure de sodium. A 1 litre d'eau distillée, ajouter 9 g de chlorure de sodium. Filtre Rozchin, régler le pH dans les tâches, au besoin, stériliser à 120 ° pendant 30 minutes.
Bouillon de pepton de viande (MPB). Ajouter 1 % de peptone et 0,5 % x à l'eau de viande. y compris le chlorure de sodium, faire bouillir à feu doux pendant 10 à 15 minutes pour ouvrir la bouche, rétablir le pH requis et faire bouillir à nouveau pendant 30 à 40 minutes jusqu'à ce que le siège soit terminé. Filtrer, ajouter au volume primaire avec de l'eau et stériliser 20 minutes à 120°.
Bouillon Hotinter. Digérer le digestat de Hottinger avec de l'eau 5 à 6 fois en jachère, en fonction de la quantité d'azote aminé pouvant être éliminée et de la quantité pouvant se trouver dans le bouillon (indiqué dans le passeport du digesteur et la recette du milieu). Par exemple, pour la préparation d'un milieu à 1,2 g/l d'azote aminé, celui-ci a été digéré à 9,0. g/l doit être dilué 7 5 fois (9.0:1.2). Ajouter 0,5 % de chlorure de sodium au digestat dilué et faire bouillir à feu doux jusqu'à ce que le sel soit clair.
Gélose mésopeptone (MPA). Au bouillon fini (avant ou après la stérilisation), ajoutez 2 à 3% de l'agar-agar raffiné et faites bouillir, en remuant, à feu doux jusqu'à ce que l'agar soit complètement fondu. Le MPA peut être cuit dans un autoclave ou un appareil Koch. Le milieu est prêt, car il faut, allumer, filtrer et stériliser pendant 20 heures à 120°C.
Napіrіdky agar smite 0,4-0,5% agar-agar.
Gélatine Zhivilny. Ajoutez 10 à 15 % de gélatine au bouillon prêt, faites-le chauffer jusqu'à ce qu'il fonde (ne faites pas bouillir !), versez-le dans des plats stériles et stérilisez-le à la vapeur.
Recettes pour faire des noyaux pliables
Milieu avec glucides. Au bouillon principal d'agar fondu, ajoutez la quantité requise (0,1-2%) d'un glucide pur (par exemple, le glucose). Après cela, ils sont versés dans des plats stériles et stérilisés avec une paire droite. Les fragments de glucides sont souvent détruits dans ce mode de stérilisation, surtout 25 à 30% des différences de glucides, stérilisation à travers un filtre bactérien, ajouter l'asepsie nécessaire au milieu principal stérile - après le contrôle de la stérilité, le noyau est prêt à être implanté.
Milieu du sang préparer 3 milieux simples stériles, en complétant dans des réservoirs aseptiques (de préférence dans des boîtes) avec jusqu'à 30 % (disons 5 %) de sang défibriné stérile. Les milieux gélosés sont fondus et refroidis à 45°C avant la cym. À la température requise, il peut être toléré comme chaud, mais pas opiku. Après l'ajout de sang, jusqu'à ce que le milieu soit dépassé, à la place du juge, ils mélangent et versent résolument des tasses ou des tubes à essai.
Respect! Vous ne pouvez pas cracher au milieu avec du sang - le sang peut changer votre autorité.
Parmi le sang gris préparez-vous juste comme ça, comme un milieu du sang. Aux milieux principaux ajouter 10-20% du sérum, afin de ne pas venger le conservateur et transmettre inactivé à 56° avec un étirement de 30 minutes au bain-marie ou dans un inactivateur. Lorsqu'il est inactivé, la parole (complément) s'effondre, comme un effet néfaste sur les microbes.
Au milieu de la vie. Aux milieux simples, ajouter du jovch à raison de 10 à 40 % du milieu, rétablir le pH requis et stériliser pendant 20 minutes à 120°C. Vous pouvez ajouter du jovch stérile à un milieu stérile dans des fosses aseptiques.
Embouteillage des milieux gélosés à la boîte de Petri. Avant la mise en bouteille, le milieu est fondu au bain-marie et refroidi à 45-50°C. Pour une tasse de 9 cm de diamètre, ajouter 15-20 ml de milieu (hauteur de bille 0,25-0,3 cm). Comme la boule est plus grosse, les colonies regardent la nouvelle plus petite en contraste. À l'arche d'une boule mince, une poignée de discours mortels et de vologs (le milieu est shvidko pendant) sont nettement bordés - la culture de l'esprit diminue.
Verser les milieux dans des coupelles stériles dans des cuves aseptiques. Mettez les tasses avec un couvercle, brûlez. Prenez le récipient avec le milieu de la main droite, en coupant la flamme du feu. De la main gauche, ils essorent le bouchon en le pressant avec le petit doigt et ce côté. Brûlez le cou du juge et avec deux doigts de la main gauche faites légèrement une couverture. Introduire sous le col du flacon sans coller au bord du gobelet. Verser le milieu, coudre, de sorte qu'il se lève uniformément le long du fond de la tasse. Comme si, en versant sur la surface du milieu, les bulbes se remettaient en place, devant eux, comme le milieu est attrapé, ils apportent une demi-journée de sirnik ou de palnik - les bulbes vont peler. Ensuite, nous fermons la tasse et laissons les milieux s'attraper. Yakshcho sivba passe le jour de la mise en bouteille, le milieu est nécessaire pour sécher. Pour cette tasse dans un thermostat, ouvrez soigneusement et installez les couvercles de cette tasse avec le côté ouvert vers le bas pendant 20 à 30 minutes. Comment passer le jour suivant après la mise en bouteille, les tasses, ne séchant pas, brûlent au même papier, qu'elles ont stérilisé, et placez-les au réfrigérateur.
Préparation inclinée d'agar. Des tubes à essai avec 4-5 ml de milieu gélosé fondu stérile sont placés dans une position fragile (environ 20° en dessous de la coupe) avec un espace tel que le milieu ne dépasse pas les 2/3 du tube, sinon il peut mouiller le Liège. Après cela, lorsque le milieu est attrapé, placez les tubes à essai verticalement - pour drainer le condensat. Il vaut mieux s'habituer à la gélose fraîchement coupée.
Respect! Il n'est pas possible de coristuvatysya avec le milieu, pour lequel il n'y a pas de condensat. Її Ensuite, je fais à nouveau fondre les roses au bain-marie et je tonds.
Milieu sec
Vitchiznyana promyslov_st vpuskaє milieu sec de reconnaissance différente: simple, électif, diagnostic différentiel, spécial. Poudres de tsé dans des flacons avec des bouchons qui vont bousiller. Ils enlèvent le milieu sec de la brume sombre et le ferment - la puanteur est hygroscopique. Au laboratoire, les poudres sont utilisées pour préparer les cahiers du milieu sur les étiquettes.
L'avantage des milieux secs en milieux purs préparés au laboratoire est standard (ils sont produits en grandes séries), facilité de préparation, de sorte qu'ils peuvent être rendus accessibles à tous les esprits (navit), stabilité, économie. Il est important qu'ils puissent être préparés à partir de substituts de viande : hydrolysat de caséine, fibrine, sprats, et induire des fractions protéiques de cellules microbiennes (sarcine).
Contrôler l'alimentation
1. Comment puis-je utiliser le pH du milieu pour cultiver plus de microbes pathogènes avant la stérilisation et pourquoi ?
2. À quelle température les milieux gélosés fondent-ils et attrapent-ils ?
3. En quoi est-ce à blâmer pour la préparation des plats, dans lesquels les milieux sont versés avec des glucides et des protéines ?
gestionnaire
1. Préparer le MPB, le MPA, le bouillon et la gélose Hottinger pH 7,2-7,4, verser dans des flacons et des tubes à essai ; stériliser.
2. Préparer à partir de poudres sèches du milieu de Hess, verser dans des éprouvettes de 4-5 ml et stériliser.
3. Préparez la gélose au sang et versez le yogo dans des boîtes de Petri.
4. Préparez à partir de poudres sèches du milieu d'Endo, EMC, Ploskireva et versez-les dans une boîte de Pétri.
5. Préparez les pentes d'agar.
Méthodes de Posiviv
Une étape importante du suivi bactériologique est l'affichage. Il est nécessaire d'étudier la nature du matériel d'ensemencement et le milieu de vioreux dans les différentes méthodes de semis. Toutes les odeurs incluent la méthode de liaison : protection contre les microbes tiers. Pour cela, pratiquez le prochain jeûne, mais sans rukhivs pointus, ce qui aidera le colivanna à chaque fois. Il n'est pas possible de parler de l'heure de posіvіv. Travaillez mieux à la boxe.
Respect! N'oubliez pas de suivre les règles de sécurité particulières pour une heure de travail avec le matériel.
Semer d'éprouvette en éprouvette. Le tube à essai avec le matériau d'origine et le tube à essai avec le milieu sont légèrement ratatinés dans la main gauche entre les pouces et les doigts de sorte que les bords des tubes à essai soient au même niveau et que leurs bases soient au-dessus de la brosse. Faites sonner le tube à essai à partir du matériau source plus près de vous. À la main droite, comme un stylo à écrire, ils coupent la boucle bactérienne et la stérilisent en la taillant verticalement en demi-lune. Avec le petit doigt de ce bord de la paume de la main droite, offensez d'un coup les embouteillages. Tirez sur les bouchons non pas avec un rivk, mais en douceur - avec de légers mouvements tordus. Bouchons de liège clignotants, les bords des tubes à essai sont brûlés par une demi-lune de palnik. Introduisez la boucle frite à travers une demi-lune du palnik dans le tube à essai avec le matériau central, refroidissez-la et, après avoir recueilli un peu de matériau, transférez-la soigneusement dans le tube à essai à partir du milieu.
Lors de la plantation du milieu, le dernier matériau est frotté sur les parois des tubes à essai au-dessus de la patrie et strié avec le milieu.
Lors de la plantation sur un support régulier avec un tampon, le yoga doit être lavé au milieu pendant 3 à 5 secondes, rincé avec. Lorsque sivbі sur le noyau du milieu, le matériau est frotté à la surface, en enveloppant un tampon, après quoi le tampon n'est pas infecté (placé sur le tube à essai, de la même manière que vous le livrez au laboratoire, il est autoclavé) .
Respect! Gardez à l'esprit que le milieu n'a pas bougé et n'a pas mouillé le bouchon.
Lorsque sivbі sur des biseaux d'agar, le matériau doit être frotté sur la surface du milieu avec un roux en forme de zigzag du bas vers le haut, en commençant entre le condensat.
Lorsque sіvbі on schіlnі middles, versé dans des tubes à essai avec un stovpchik, percer le stovpchik avec une boucle avec le matériau, en vibrant pour que les rangs soient plantés avec une "piqûre".
Après le semis, la boucle est sortie du tube à essai, les bords des tubes à essai sont brûlés et, après avoir passé les bouchons à travers la demi-largeur du palnik, les tubes à essai sont fermés, après quoi la boucle est frite.
Le matériel rare peut être ensemencé avec des pipettes stériles (Pasteur ou graduation). Après le semis, les pipettes seront zanuryuyut à la patrie désinfectante.
Posivi au niveau des bouteilles, des matelas et des bouteilles vibrent approximativement, comme dans un tube à essai, il suffit de ramasser le matériau à l'arrière (avec une boucle ou une pipette), puis d'ouvrir le récipient avec le milieu.
Les juges de la culture plantée sont écrits et placés au thermostat.
Semis sur éprouvettes de boîtes de Petri. Caractère Vivchivshi de la culture croissante sur le bol, du côté du fond, avec un olivier à cire, la plantation nécessaire d'un delyanka. Mettez une tasse avec un matériau riche devant vous avec un couvercle brûlé. Ouvrez le couvercle avec la main gauche et insérez la boucle brûlée en dessous. Après avoir refroidi la boucle, récupérez les fournitures, le matériel de la parcelle désignée. Nous faisons une boucle, fermons la tasse et prenons un tube à essai au milieu de la main gauche. Le semis s'effectue de la même manière, c'est-à-dire d'éprouvette en éprouvette. Après avoir posé la tasse, retournez-la.
Semis sur gélose près d'une boîte de Petri. Semer à la spatule. La spatule est un tube de verre ou de métal dont l'extrémité est recourbée à l'allure du tricutnik. La spatule peut être travaillée avec une pipette de pasteur, zignuvshi sous le kutom її kіnets minces, devant elle dans la demi-lune de la palnica.
Ouvrez légèrement le couvercle avec la main gauche, en le caressant avec un doigt grand et impressionnant. Avec une boucle, avec une pipette ou avec un bâton de verre, appliquez le matériau de revêtement sur la surface du milieu, après quoi vous le frottez soigneusement avec une spatule circulaire doti, n'arrêtez pas de déplacer la spatule le long de la surface du milieu, avec votre main gauche, avec elle, coupez le couvercle et enveloppez immédiatement la tasse. À la fin du semis, la spatule est retirée de la tasse et le couvercle est fermé. Une spatule qui grince est placée près d'un désinfectant et une spatule en métal est frite près d'un demi-brûleur.
Semez une boucle. Une petite quantité de matériel de plantation (même s'il est mélangé à l'avant avec une rosette ou un bouillon isotonique stérile) est frottée avec une boucle dans la surface du milieu du bord de la tasse, le sprat est une fois passé à travers la boucle du côté à le bec. Attendons jusqu'à la fin de ce mois, lorsque les coups sont terminés, percez la gélose avec une boucle, sachant trop de matériel de semence. Le matériau restant, qui reste sur les boucles, est étalé avec des volants en zigzag sur toute la surface du milieu. Après avoir terminé le semis, fermez la coupelle et désherbez la boucle.
Semez une boucle sur le secteur. La coupe du côté du fond est plissée en secteurs. Le semis est balancé avec des vagues en zigzag du bord de la tasse au centre. Il est nécessaire de garder les points de suture pour que les traits n'entrent pas dans le secteur terrestre.
Semer avec un tampon. Un tampon avec un matériau supplémentaire doit être introduit dans la tasse au niveau de la troch et frotté avec des ruhs circulaires sur la surface du milieu, en enroulant autour du tampon et de la tasse.
Semer une pelouse. Environ 1 ml (20 gouttes) d'une culture native (telle qu'une culture du milieu de l'estomac, qui peut être mélangée avec une variété isotonique stérile ou un bouillon) est appliqué à la surface de la gélose et étale soigneusement les selles sur la surface de le moyen. La coupe est légèrement cicatrisée et à l'aide d'une pipette, l'excès de culture est retiré, ondulant dans le désinfectant. Là, ils ont mis une pipette.
Semer de l'agar avec un camarade. La culture cultivée sur un milieu rare ou du matériel émulsionné doit être ajoutée dans un récipient avec de la gélose fondue et refroidie à 45 ° C, mélangée et agitée dans une boîte de Pétri stérile. Vous pouvez ajouter du matériel supplémentaire dans une tasse vide et verser 15 à 20 ml d'agar refroidi à 45 ° C. Pour mélanger à la place du gobelet, les trochs sont volés et emballés. Les tasses sont laissées sur la table jusqu'à ce que le milieu soit attrapé.
Les tasses d'éclairage sont signées du côté du bas et placées au thermostat avec le bas vers le haut.
Contrôler l'alimentation
1. De quoi avez-vous besoin pour un lavage aseptique pendant une journée de sivby ? Arrondissez-le.
2. Comment faut-il compléter l'espace de travail après la plantation ?
Méthodes de culture
Pour une culture réussie, un milieu correctement sélectionné et un semis correctement cultivé, vous avez besoin d'un esprit optimal: température, teneur en humidité, aération (répétition du patch). En règle générale, les esprits conscients sont autorisés à créer, résolument soucieux de l'environnement naturel.
Température. La température optimale pour la culture de la plupart des micro-organismes pathogènes (37 ° C) est déterminée au thermostat (Fig. 17). Il s'agit d'un attachement constitué de murs suspendus, qui peuvent être connus encore et encore, ou d'eau, qui est chauffée à l'électricité. Vient zabezpecheniy avec un thermostat, qui ajuste automatiquement la température requise, et un thermomètre pour contrôler la température.
Des tubes à essai avec des récoltes dans des racks, des filets à fléchettes ou des bocaux sont installés sur des thermostats de police. Les tasses du thermostat sont renversées. Ainsi, en répétant dans le thermostat, il circulait librement et le chauffage était égal, la police dans le thermostat soufflait de coupures et ne submergeait pas. Afin de ne pas refroidir la culture, le thermostat ne la prive pas d'eau douce.
L'assistant de laboratoire des goitres peut enregistrer la température dans le thermostat et améliorer la propreté des accessoires, et en cas de dysfonctionnement, appeler le maître.
Lumière Les microbes les plus importants (tous les agents pathogènes peuvent être vus avant eux) ne sont pas nécessaires - ils sont cultivés dans des arbres sombres. Cependant, pour la culture de la pigmentation, comme elle est plus active sur une lumière rose, la culture issue du thermostat est mise en vibration pendant 2-3 jours dans une lumière ambiante.
Respect! Le prochain coup unique d'échanges directs de sony, qui est préjudiciable à la culture.
Teneur en eau. La vie des microbes est impossible sans vologie - la vie de la parole pénètre moins dans le clitine que le regard rozchinennym. Il est nécessaire de les protéger lors de la culture sur des milieux ouverts : versez-les dans une coupelle et fauchez-les dans des éprouvettes plus souvent qu'une journée de semis. Lors de la culture de microbes particulièrement sensibles à la présence d'eau, par exemple les gonocoques, placez un thermostat dans un récipient rempli d'eau.
Conditions de culture. La plupart des microbes pathogènes sont cultivés pendant 18 à 24 ans, mais veillez à ce qu'ils se développent correctement (jusqu'à 4 à 6 jours). Afin d'économiser l'eau qu'ils contiennent, les tampons de coton doivent être remplacés par des tampons humiques stériles, ou des tampons humiques doivent être placés dessus.
Respect! Les bouchons de gomme sont stérilisés dans un autoclave, brûlés dans du papier.
Aération. Pour la consommation de microbes dans un acide libre, ils peuvent être divisés en aérobies et anaérobies. Les groupes offensifs nécessiteront des esprits de culture différents.
La supplémentation en acide, nécessaire à la culture des aérobies et des anaérobies facultatifs, se développe avec une aération passive et active.
Aération passive - ce culture sur milieux fins et rares dans des récipients, fermés avec des bouchons de coton ou de gaze de coton, ou des boîtes de Petri. Avec une telle culture, les microbes gardent l'acide, il y a des différences au milieu, qui se trouvent dans le vaisseau au-dessus du milieu et traversent la croûte. Les cultures passivement aérées peuvent être cultivées à la surface ou sur une fine boule du milieu, où l'air acide pénètre.
L'aération active est stagnante avec la culture de glibine de microbes, s'ils se développent dans le grand obsyagi du milieu. Afin d'assurer une acidité suffisante de ces cultures, elles sont placées dans un goydalka spécial - un remixage constant des cultures pour assurer la sécurité des répétitions. Lors de la culture en obsyagi rіdini, qui atteint des dizaines et des centaines de litres, qui sont effectués dans des pièces jointes, ils sont appelés réacteurs ou fermenteurs, ils sont à nouveau soufflés à travers la culture à l'aide de dépendances spéciales.
Culture d'anaérobies pliées, aérobies inférieures, les coquilles Saint-Jacques sont nécessaires pour permettre l'accès à un air libre. Pour qui, vous devez répéter le support vital de différentes manières.
Culture d'actinomycètes, de champignons, de mycoplasmes, de formes L, de spirochètes et des plus simples. La culture de ces micro-organismes est essentiellement similaire à la culture de microbes. Pour eux, des médias spéciaux et des régimes sélectionnés ont été développés pour répondre à leurs besoins.
Une culture pure est appelée une collection de microbes de la même espèce sur un milieu vivant alcalin ou rare.
Nous utilisons un certain nombre de méthodes pour voir la culture pure en jachère en termes de puissance du matériel cultivé et de meti dosledzhennya. Cultures pures saines des colonies isolées - la concentration de microbes sur le milieu alcalin. Il est important de noter que la majeure partie de la colonie se développe à partir d'une cellule microbienne, de sorte qu'il s'agit d'une culture pure de ce micro-organisme.
Étapes de voir la culture pure :
1er jour - élimination des colonies isolées. Déposez le matériau fini avec une boucle, appliquez avec une pipette ou un bâtonnet de verre sur la surface de la gélose dans des boîtes de Pétri. Utilisez une spatule pour frotter le matériau sur la surface du noyau ; sans proplyuyuchi et sans retourner la spatule, étalez la graine sur le 2ème, puis sur le 3ème bol. Avec un tel étalement, le 1er gobelet contient beaucoup de matière et beaucoup de microbes, le 2e gobelet moins et le 3e gobelet encore moins.
Vous pouvez supprimer l'isolement des colonies avec une boucle sib. A cet effet, le matériau est émulsionné dans du bouillon ou du chlorure de sodium isotonique.
2ème jour - les microbes se développent sur les tasses. À la 1ère tasse, le son pousse plus sucily - vous ne pouvez pas voir la colonie isolée. Des colonies isolées se développent à la surface de la gélose dans les 2e et 3e boîtes. Ils se tortillent d'un œil infatigable, pour une aide supplémentaire, avec une petite augmentation du microscope et dans le cas d'un microscope stéréoscopique (div. division 31). Une colonie est prélevée sur le côté du fond de la boîte et transférée sur des biseaux de gélose. Posivi à mettre au thermostat.
Respect! Il est possible de conserver des colonies moins isolées.
3ème jour - cultiver la nature de la croissance sur une gélose inclinée. Voler un frottis, farbuyut yogo i, ayant changé, que la culture est pure, passez à її vyvchennya. Dont la vision de la culture pure prendra fin. Vu du dzherel chantant, cette culture cultivée s'appelle une souche.
Lorsque vous voyez une culture de sang pur (hémoculture) devant le milieu rare : 10-15 ml de sang prélevé stérile sont inoculés dans 100-150 ml de milieu rare. Tellement timide pour celui qui a peu de microbes dans le sang. Spivvіdnoshenie krovі, shо sіvaєєєє, je zhivotnoe sredovischa 1:10 pas vypadkovo - alors atteignez le sang de rozvedennâ (zhubno de sang non mélangé sur mikroorganіzmi). Colby doit être placé au thermostat. Au moyen de dobu (et après plus d'une heure de culture en jachère, ce qui se voit) à partir de la place des flacons, déposer des tentures sur des plats pour isoler les colonies. Si nécessaire, répétez la suspension à des intervalles de 2-3 jours.
Quand on voit de la culture pure issue de la section, des eaux de lavage de la canalisation et autres rodins, elles sont centrifugées à l'avant dans des cuves aseptiques et sèment le siège. Plus loin, la vision de la culture pure vibre de façon extraordinaire.
Pour voir une culture pure, des milieux sélectifs sont largement plantés.
Un certain nombre de méthodes pour développer des cultures de vicory pures ont des caractéristiques biologiques du microbe qui sont observées. Par exemple, lorsque vous voyez des bactéries sporulées, chauffez à 80 ° pendant 10 minutes, en conduisant sous la forme végétative; en cas de voir la tuberculose buddnik, résistante aux acides et aux prairies, à l'aide de ces discours, le matériel est réduit sous la forme de la flore qui l'accompagne; pour voir des pneumocoques et des bâtonnets de peste, le matériel doit être administré à plus de souris - dans cet organisme, qui est très sensible à ces personnes, les microbes se multiplient plus rapidement que les autres.
Dans les robots scientifiquement avancés, en particulier pour les études génétiques, il est nécessaire de prélever des cultures d'une cellule. Une telle culture s'appelle un clone. Pour її otrimannya, ils sont le plus souvent pelés avec un micromanipulateur - une pièce jointe, avec des outils (aiguilles, pipettes) d'expansions microscopiques. Pour l'aide de trimach sous le contrôle d'un microscope, il faut leur injecter le médicament "gouttelette suspendue", prendre le clitina (un) et le transférer dans le milieu qui donne la vie.
Voir des cultures
Morphologues de Vivchennya, effondrements, pouvoir tinktorial du pouvoir (div. Rodil 3), la nature du zrutanni sur le noyau (pouvoir culturel), enzymatique activement le bas des mirobs visibles, les yogo taxis, le Tobto est le Type de la classe , , variété. C'est ce qu'on appelle l'identification. L'identification du micro-organisme est également importante dans le diagnostic des infections, l'insertion du dzherel et des canaux dans les transferts її et au plus bas des résultats scientifiques et pratiques.
Autorités culturelles
Différents types de micro-organismes se développent de différentes manières sur le support. Tsі vіdminnosti sert à différencier. Certaines sont bonnes à cultiver sur des supports simples, d'autres sont fortes et ne poussent que sur des supports spéciaux. Les micro-organismes peuvent donner une croissance plus légère (pishne), la paix ou l'avarice. Les cultures peuvent être bezbarvnimi, siruvatimi, siro-blakitnimi. Les cultures de micro-organismes, qui fabriquent le pigment, peuvent être d'infestation différente : blanc, jaune ou doré chez les staphylocoques, chervone - dans le bâton magique, bleu-vert - dans le bâton bleu-vert, le pigment est différent dans l'eau, la serpentine n'est pas seulement.
Sur schіlnyh Parmi les micro-organismes de la jachère, en fonction de la quantité de matériel de plantation, soit du saccharose pour ("pelouse"), soit des colonies isolées sont approuvées. Les cultures sont rugueuses et basses, trouées et opaques, avec une surface mate, brillante, lisse, courte, sèche, bosselée.
Les colonies peuvent être grandes (4-5 mm de diamètre et plus), moyennes (2-4 mm), petites (1-2 mm) et naines (moins de 1 mm). La puanteur se différencie par la forme, pourrissant à la surface du milieu (opukli, plat, en forme de dôme, déprimé, rond, en forme de rosette), par la forme des bords (unis, crépus, déchirés).
Rare Le micro-organisme du milieu peut faire un calamute lisse, donner un siège (granuleux, en forme de scie, en forme de plastique) ou cracher (inférieur, rugueux, ridée).
Par exemple lorsqu'ils sont plantés avec une piqûre, les microbes deviennent troubles, ceux du milieu deviennent nuageux, ceux du milieu ne poussent qu'après la «piqûre», bloquant l'ouverture de l'espace.
Les pouvoirs culturels signifient, illustrant la nature de la croissance de la culture d'un simple œil, à l'aide d'une loupe sous un petit grossissement d'un microscope ou d'un microscope stéréoscopique corrosif. La taille et la forme des colonies, la forme des bords et la transparence se voient dans la lumière qui passe à travers, en regardant les tasses du côté du fond. Dans la lumière brisée (du côté du couvercle), le caractère de la surface, la fourrure, est déterminé. La cohérence est déterminée par le point de la boucle.
Pouvoir morphologique
L'étude de la morphologie des microbes peut servir à leur différenciation. La morphologie est observée dans les préparations traitées. Restaurer la forme et la taille de la clitine, son expansion dans la préparation, la présence de spores, capsules, flagelles. Dans les préparations farbovanisées, il est nécessaire d'apporter des microbes à farb (pouvoir tinctorial) - il est bon ou mauvais de prendre farb, car il peut être amené à zabarvlen différentiel (dans une telle couleur, c'est zabarvlyuєtsya pour Gram, Tsil - Nielsen et in. ). Vital (vivant) zabarvlennya vous permet d'installer la frivolité, de différencier les cellules vivantes et mortes, de suivre leur podil. La subdivision et la friabilité peuvent être traitées dans des préparations natives (non contaminées) (div. section 3).
Activité enzymatique
L'activité enzymatique du micro-organisme dans le bagat est différente. Il peut être utilisé comme une espèce et un type appartenant à un microbe, et il peut être utilisé pour désigner sa variante (la soi-disant biovariante). Jetons un coup d'œil au principal pouvoir enzymatique de ce rendez-vous de yoga yakisne.
Décomposition en glucides(activité saccharolytique), de sorte que la capacité de décomposer l'anneau et l'alcool atomique riche avec de l'acide dissous et du gaz acide, se développe au milieu de Hiss, yakі venger ce qui est l'autre glucide et indicateur. Sous l'action de l'acide, qui est satisfait lors de la séparation en glucides, l'indicateur modifie la contamination du milieu. C'est pourquoi le milieu est appelé "rangée de cordes". Les microbes, qui ne fermentent pas en glucides, se développent sur le milieu, sans le modifier. La présence de gaz est établie pour la fermeture des bulbes dans les milieux avec de la gélose, ou pour le groupage du yoga dans les « flotteurs » sur les milieux rares. "Flotteur" - un tube de verre avec un verre soudé, un animal en montée, de sorte qu'avant la stérilisation, ils placent un tube à essai du milieu (Fig. 18).
Riz. 18. Activité tsukrolytique de Vivchennya du micro-organisme. I - "chaîne de cordes": a - milieu moyen avec des glucides et l'indicateur d'Andrede; b - similaire au milieu avec l'indicateur BP : 1 - les micro-organismes ne fermentent pas en glucides ; 2 - les micro-organismes fermentent en glucides à partir de solutions acides; 3 - les micro-organismes fermentent en hydrates de carbone avec de l'acide et du gaz dissous ; II - colonies de micro-organismes qui ne s'étalent pas (bezbarvnі) et étalent du lactose
De plus, l'activité saccharolytique est montrée sur les milieux d'Endo, EMC, Ploskireva. Les micro-organismes, fermentant l'acide lactique (lactose) jusqu'à l'acidité dans leur milieu, infectent la colonie - l'acide modifie la couleur de l'indicateur. Les colonies de microbes qui ne fermentent pas le lactose sont stériles (div. Fig. 18).
Le lait avec la croissance des microbes, qui fermente le lactose, est avalé.
Avec la croissance du micro-organisme qui utvoryuyut amylase, au milieu de l'amidon, il se décompose. Ils le savent, ayant ajouté le sprat de Lugol à la culture, la couleur du milieu ne change pas. L'amidon non décomposé est donné à partir de cym rozchinom blue farbuvannya.
Pouvoir protéolytique(A cet effet, la capacité de diviser les protéines, les polypeptides, etc.) se développe sur les supports avec de la gélatine, du lait, de la sirovatka, de la peptone. Lors de la croissance sur le milieu gélatineux des microbes, qui fermentent la gélatine, le milieu se développe. La nature de la distribution, appelée par différentes bactéries, est différente (Fig. 19). Les microbes qui décomposent la caséine (protéine du lait), appellent à la peptonisation du lait - cela ressemble à de l'asclépiade laiteuse. Lors de la séparation des peptones, de l'indole, de l'eau circulatoire, de l'ammoniac peut être observé. La lumière est installée à l'aide de papiers indicateurs. Le papier filtre suinte ces derniers temps avec des roses chantantes, suspendues, striées de femelles étroites avec une dozhina de 5-6 divs, et après avoir planté la culture sur le MPB, un bouchon est placé entre elle et la paroi du tube à essai. Après incubation au thermostat, le résultat est garanti. L'ammiac devient bleu sur le papyrus de tournesol; lorsque vous voyez sirvodnya sur du paprika, une fuite d'acétate de plomb à 20% et de bicarbonate de sodium, le sulfate de plomb est dissous - paprika noir; indole viklikaє paprika noir, filtré avec de l'acide oxalique (div. fig. 19).
Krіm zaznachenih sredovishch, zdatnіst mikroorganіzmіv rasplyuvatі vіznі zhivnі substrats vyznachayut à l'aide de disques en papier, fuites de réactifs de chansons (systèmes indicateurs de papier "SIB"). Les disques sont descendus près de l'éprouvette avec la culture finale et après 3 ans d'incubation dans un thermostat à 37°C, changer la couleur des disques pour juger de la répartition des glucides, acides aminés, protéines, etc.
Le pouvoir hémolytique (développement des érythrocytes) se développe au milieu du sang. Certains des milieux deviennent clairs d'eux-mêmes, mais dans les milieux étroits de la colonie, il y a une zone claire (Fig. 20). Lorsqu'il est approuvé par la méthémoglobine, le milieu est vert.
conservation des cultures
Vidileni et vyvchenі kultury (shtami), scho pour devenir précieux pour la science ou virobnitstva, sont extraits de musées de cultures vivantes. Le Musée de l'Union Souveraine est situé à l'Institut National Souverain de Normalisation et de Contrôle des Préparations Biologiques Médicales. L.A. Tarasevich (DIBK).
Zavdannya zberіgannya - pіdtremati zhittєzdatnіst microorganіzmіv devant nous. Pour qui vous avez besoin de vous détendre, ou d'ajouter un échange de cellules microbiennes.
L'une des méthodes les plus avancées de conservation des cultures est la lyophilisation - le séchage sous vide à partir d'un moulin congelé permet la mise en place d'un camp d'anabiose. La traînée est effectuée sur des appareils spéciaux. Conserver les cultures dans des ampoules scellées à une température de 4°C, de préférence -30-70°C.
Réinvention des cultures séchées. Chauffez fortement l'embout de l'ampoule en demi-lune et collez-le avec un nouveau coton-tige, imbibez-le légèrement d'eau froide, de manière à créer des microfissures sur les plis, à travers lesquelles il est possible de pénétrer au milieu de l'ampoule. Avec cela, en passant par les bords fissurés des fissures, ils seront à nouveau stérilisés.
* (S'il y a trop d'eau sur le tampon, vous pouvez la boire dans l'ampoule et détruire la stérilité de la culture : elle se mouille à travers les microfissures qui se sont établies, il y a donc un vide dans l'ampoule.)
Respect! N'oubliez pas que les ampoules scellées ont un vide. Dès que vous la frottez à travers la grande ouverture, la culture qui se trouve dans l'ampoule peut se répandre et elle sortira.
Laissez-vous voir dans les airs, avec une pince à épiler, cassez et retirez le haut de l'ampoule. Brûler légèrement l'ouverture et pasteuriser avec une pipette stérile, ou ajouter un bouillon ou un bouillon isotonique dans l'ampoule avec une seringue. Mélanger les ampoules ensemble et semer sur le milieu. La croissance de nouvelles cultures dans les premières cultures peut être plus fréquente.
La conservation à long terme de la culture peut aussi se faire avec de l'azote rare (-196°C) avec des accessoires spéciaux.
Les méthodes de conservation non triviales des cultures sont les suivantes : 1) la sous-culture (replantation périodique sur des milieux frais) à intervalles, de sorte que le micro-organisme, le milieu et les esprits de culture soient déposés au pouvoir du micro-organisme. Les cultures intermédiaires sont prises à 4° ; 2) économies sous la boule d'olії. La culture est cultivée dans un support de gélose de 5 à 6 cm de haut, versé avec de l'huile de vaseline stérile (boule d'huile d'environ 2 cm) et stockée verticalement au réfrigérateur. Les conditions de conservation des différents micro-organismes dans des conditions différentes de celles des tubes à essai accrochent périodiquement la culture, afin d'en vérifier la durée de vie ; 3) stockage à -20-70 ° С; 4) prélèvement à partir de tubes à essai scellés. Si nécessaire, le matériel est prélevé et accroché sur un centre frais.
Contrôler l'alimentation
1. Que faut-il comprendre dans la compréhension de la « recherche bactériologique » ?
2. Quel genre de culture peut être pour un tel suivi ?
3. Qu'est-ce qu'une colonie bactérienne, une culture, une souche, un clone ?
4. Quelle est la compréhension du "pouvoir culturel des microbes" ?
gestionnaire
1. Apprenez et décrivez le sprat des colonies. Réensemencez-les pour l'inclinaison de l'agar par secteur.
2. Vivechit et décrivez la nature de la croissance - culture sur gélose inclinée. Tenir compte de la pureté et de la morphologie de la culture dans la préparation inoculée.
3. Transférer la culture de la gélose inclinée vers le bouillon et le milieu de diagnostic différentiel. Vérifiez et notez dans le protocole la nature de la croissance de la culture sur ces supports et la puissance enzymatique.
Le bouillon m'yasopeptonny et la gélose m'yasopeptonny sont les milieux vivants les plus simples ajoutés à la plupart des bactéries. Le matériau principal pour la préparation de ces milieux vivants et d'autres est l'eau de viande, qui est le jaune de la terre natale avec une réaction acide. L'eau de M'yasna pour venger la parole blanche (albumine), la parole extractive et le sel actif.
Eau de viande et concentrations de bouillon de viande-pepton (selon GOST 10444-63)
M'yaso yaloviche ou kіnské après le retrait des brosses, de la graisse et du tendon sont passés dans un hachoir à viande, et la viande hachée est versée avec de l'eau froide du robinet, en versant 500 g de viande hachée dans 1 litre d'eau sur la peau. Après avoir mélangé la somme, ils la chauffent jusqu'au point d'ébullition, puis la réchauffent pendant 1,5 ans. Une petite quantité de viande hachée summish avec de l'eau (jusqu'à 5 l) peut être bouillie à feu vif, en remuant souvent, afin que les particules sèches de viande ne brûlent pas.
Une grande quantité vaut mieux que bouillir dans des chaudrons avec une chemise à vapeur. La préparation de l'eau de viande est due au filtrage d'une petite quantité d'entre eux dans un tube à essai à travers un filtre en papier. Yakshcho filtrat prozory, l'eau de viande est prête. Si le filtrat sort kalamutny, l'étape suivante consiste à doti, les quais ne voient pas le filtrat prozory. Après la fin de la cuisson, la patrie est bouillie à travers la toile, ou la gaze à double pli, toute la patrie sik et otriman est sortie de la viande bouillie, apportée avec de l'eau bouillie au volume en torchis. Il n'est pas nécessaire d'ajouter une grande quantité d'eau car, à la suite de la cuisson de la viande, l'eau laissera passer beaucoup de jus de viande. Seulement dans le cas d'une variante trop tempétueuse, cet arc d'ébullition bruyante, il y a une grande évaporation du radiny.
L'eau de viande d'Otriman est versée dans des bocaux en verre, puis elle est bouillie et stérilisée dans un autoclave pendant 20 minutes à une température normale de 120 °C. À partir de l'eau de viande récoltée par un tel rang, si nécessaire, préparez le milieu vital nécessaire.
Pour réduire la concentration du bouillon de peptone de viande (MPB), ajoutez 10 g de peptone et 5 g de chlorure de sodium à 1 litre d'eau de viande. Amener la réaction du milieu à pH 7,0-7,2, faire bouillir, filtrer sur papier filtre, verser dans des éprouvettes propres et fermer avec des bouchons de coton, stériliser en autoclave pendant 20 minutes à une température de 120 °C.
Bouillon d'élevage m'yasopeptonny
La préparation de l'eau de viande s'effectue de la même manière que pour le bouillon concentré, et au lieu de 500 g de viande hachée, on prend 250 g de yogo pour 1 litre d'eau. Il est possible de diluer l'eau de viande concentrée préparée dans vdvіchі. Ajoutez 5 g de peptone, 2,5 g de chlorure de sodium à 1 litre d'eau de viande diluée, ajustez le pH à 7,0-7,2 et laissez mijoter de la même manière que lors de la préparation d'un bouillon concentré de peptone de viande.
bouillon de ribopeptone
Dans les usines qui fabriquent du poisson en conserve, l'eau de viande pour la préparation des milieux peut être séchée avec de l'eau de poisson. L'eau de Ribna doit être préparée à partir du grand ribi mince. Idéal pour cієї rencontré la sandre, la morue et le brochet. Zvіlnenu vіd kіstok et la graisse riba sont passées dans un hachoir à viande et versées avec de l'eau froide du robinet d'un romarin 1 litre d'eau pour 500 g de poisson haché. Toutes les autres opérations de préparation de l'eau de poisson sont similaires à celles de la préparation de l'eau de viande.
L'eau de Ribna est vicorée pour la préparation du bouillon de ribopeptone. Pour 1 litre d'eau de poisson, ajouter 10 g de peptone, 5 g de sel de cuisine, neutraliser à pH 7,0-7,2 et stériliser tel quel, comme un bouillon de viande-peptone.
Le coulage du bouillon dans des tubes à essai (avant la stérilisation) est effectué à travers un verre de virva, au bout duquel un tube de gomme est mis en place avec une pointe et une poignée de Mora (Fig. 52). Courbez la pointe du sprat lorsque vous le versez dans un tube à essai, de sorte que les bords du tube à essai ne soient pas mouillés de bouillon, sinon le tampon de coton est sec au point et peut être germé par des micro-organismes.
Réactions installées des milieux donneurs de vie
Avec les découvertes microbiologiques, il faut maintenir en vie l'acidité et la puissance des milieux de vie. L'acidité du substrat vivant est active, comme on le supposait, d'une grande importance dans les processus vitaux des microbes : ils y ajoutent leur pouvoir de croissance, morphologique et physiologique. Pour la plupart des bactéries, un milieu avec un pH de 7,2-7,4 est nécessaire, pour les levures et une pléthore - avec un pH de 4,5-5,5.
La vie du milieu, qui est préparée pour la manifestation des pouvoirs biochimiques des microbes, est due à la mère de la réaction optimale strictement assignée à ce microbe. Régler le pH du milieu préparé dans le laboratoire de microbiologie peut être soit des méthodes électrométriques ou colorimétriques. Electrométriquement, le pH est déterminé à l'aide d'un pH-mètre de laboratoire (par exemple, LP-58 - Fig. 53) ou d'un ionomir (KFV-I1 - Fig. 54).
Afin de mesurer la valeur du pH du milieu revitalisant ajouté pour un ionomère supplémentaire, versez environ 40 ml du milieu dans le ballon, remplissez-le avec une cartouche avec un élément chlore-argent et ajoutez un accessoire électrique. Les flèches du galvanomètre se déplacent et indiquent la valeur du pH.
Lors de l'utilisation d'un pH-mètre de laboratoire (LP-58), il est plus facile de mettre l'électrode de verre et de calomel. Un sac d'électrode de verre peut même avoir des parois minces - 0,03-0,05 mm, donc lorsque vous travaillez avec, vous devez être prudent. Avant que l'électrode zastosuvannya sklyany ne soit conservée dans de l'eau distillée pendant au moins 1 à 2 ans, et en cas de fonctionnement fréquent, il est nécessaire de conserver progressivement le yoga dans de l'eau distillée, en le remplaçant périodiquement par de l'eau douce.
Avant d'ajuster le pH avec une électrode de verre, corrigez l'échelle de pH du tampon. Romarin Le pH de la gamme tamponnée peut être proche du pH de la gamme spécifiée. Le compensateur de température de l'accessoire est réglé sur la température de la plage tampon et ajuste la partie de réglage et potentiométrique de l'accessoire derrière l'élément normal. Ensuite, après avoir rincé l'électrode avec de l'eau distillée et un récipient vimiryuvalny, rappelez-lui le milieu dosledzhuvanim et modérez le pH du milieu; en réglant le compensateur de température à la température du milieu et en appuyant sur le bouton pour allumer l'accessoire sur le doshtsi avant du pH-mètre, marquez l'indication des flèches du galvanomètre sur l'échelle de pH. Les règles détaillées pour corystuvannya, nalashtuvannya et la surveillance des accessoires sont décrites dans les instructions sur la façon d'ajouter des accessoires. Trivalité de l'analyse 3-5 min. Rapportez les résultats avec précision.
Électrométriquement à l'aide d'un pH-mètre et d'un ionomir, vous pouvez également vérifier manuellement le pH du milieu préparé. Lors de la préparation de substrats vivants pour des analyses bactériologiques, il est nécessaire d'ajuster le niveau de pH du milieu, et d'amener la réaction à la valeur la plus élevée, alors la méthode colorimétrique pratique s'avérera efficace.
La base de la méthode colorimétrique repose sur la capacité des indicateurs à modifier leur concentration en modifiant la concentration en ions H-ion. Pour un indicateur de peau, sa gamme caractéristique de pH, dans la gamme de n'importe quelle couleur, change. Selon GOST 10444-63, pour l'établissement du pH des milieux vivants, 0,04% de bleu de bromthymol est ajouté. La gamme de bleu de bromthymol est de 6,0 à 7,6. Dans les milieux acides, les vignes sont remplies de zabarvlennya jaune, dans des flaques d'eau - bleues. A pH 7,1, il donne une légère infestation vert-vert.
Aux fins de la réaction du milieu ou des produits en conserve, après le développement de micro-organismes, 0,04% des composés de bromocrésolpurpur sont ajoutés. Le bromocrésolpurpur modifie la contamination dans la plage de pH de 5,2 à 6,3. Dans les milieux aigres, les vins sont jaune pâle, dans les neutres - rouge-violet, et à pH 6,3, ils donnent du vert avec une teinte violette de zabarvlennia.
Les indicateurs sont préparés dans le rang suivant: 0,1 g d'un indicateur viable, nommé sur les ronds analytiques, est frotté au moyeu (agate bagzhano) à partir de 1/20 n. soude caustique. Pour distribuer 0,1 g de blackite de bromthymol, prendre 3,2 ml de 1/20 n. la différence de NaOH ; pour la distribution de 0,1 g purpur de bromocrésol - 3,7 ml 1/20 n. ouvrir le pré. Ajouter 250 ml d'eau distillée à la solution de flaque d'eau finie et ajouter 0,04 % de la solution d'indicateur. Les préparatifs pour le développement de l'indicateur doivent être pris à froid dans des récipients en verre avec un bouchon en liège.
Avant la stérilisation, le pH du milieu doit être ajusté pour être égal (7,0 à 7,2). Pour cela, un grand flacon (2-3 l) est versé dans 1,5 l de milieu vivant. À partir des burettes qu'il contient, commencez à verser goutte à goutte 10% de la solution de bicarbonate de soude ou une solution faible du pré (par exemple, 0,1 N. de la solution d'hydroxyde de sodium), tout le temps pereveryayuschie réaction du milieu selon le indicateur (dans ce cas, selon le bleu de bromthymol). A cet effet, sur un carreau de porcelaine blanche (il est possible de faire un cachelna), appliquez un sprat de grains du milieu, auquel ajoutez un grain d'indicateur. Si le bleu de bromthymol, lorsque vous lui donnez un zhovte zabarvlennya, alors l'infusion de soda ou la prairie doit continuer doti, les quais du milieu de la journée dans les gouttes de l'indicateur ne s'enlisent pas dans des couleurs vert clair. Si un ton vert-bleu apparaît dans les gouttelettes du milieu restant lorsque l'indicateur est ajouté, alors la coloration de la flaque, lorsqu'elle est titrée, afflue en excès et dans le flacon avec le milieu, doit être ajoutée plus fraîche, pas encore titrée, la durée de vie - milieu donnant et la réaction sera redécouverte.
Parfaitement prouvé dans la pratique à l'aide d'un comparateur et de l'échelle standard de Michaelis. Cette méthode doit être précise - la réaction du milieu varie jusqu'à 0,1 unité de pH. Pour déterminer le pH du milieu pour l'accessoire supplémentaire de Michaelis, il est nécessaire de passer outre la réaction du milieu pour le paprika de tournesol supplémentaire, afin de savoir, comme indicateur d'un tel nombre d'ampoules de l'accessoire de Michaelis, il devrait être accéléré. Étant donné que pour la plupart des milieux vivants, une réaction neutre et à faible lumière (pH 7,0-7,2) est nécessaire, il est nécessaire de prendre l'indicateur méthanitrophénol et un certain nombre d'ampoules avec un pH de 6,8-8,2. Pendant la stérilisation, le pH du substrat doit diminuer de 0,2 unité, donc pour la création d'esprits optimaux pour la croissance des micro-organismes avant la stérilisation, le milieu, qui est préparé, est la faute de la mère pH 7,2-7,4.
Après avoir revérifié la réaction du milieu en fonction du tournesol et choisi un indicateur, prenez un comparateur, installez des ampoules standard avec le pH correct dans un nouveau tube à essai (Fig. 55). Chez un ami, une éprouvette du premier rang (n°2) est versée dans le comparateur avec 2 ml du dernier milieu revitalisant ; ici, ajoutez 4 ml d'eau distillée et 1 ml d'une solution à 0,3% de l'indicateur sélectionné (appelé, comme déjà mentionné, méthanitrophénol). Aux deux éprouvettes extrêmes de la première rangée n° 1 et 3, on verse 2 ml du milieu revitalisant et 5 ml d'eau distillée. Au tube du milieu d'une autre rangée n° 5, placez seulement 7 ml d'eau distillée. Aux deux prises extrêmes de l'autre rangée du comparateur n° 4 et 6, insérez des ampoules avec une gamme standard d'indicateurs de pH, dans l'intervalle entre lesquels la réaction du milieu est rétablie.
En regardant les tubes à essai de lumière à travers l'ouverture inférieure du comparateur sur une plaque blanche mate, en examinant le zabarvlennya dosledzhuvannya rodini du zabarvlennyam de l'indicateur. Si la contamination de l'échantillon par le milieu provient de la contamination de l'indicateur dans une ampoule, la valeur du pH du milieu est alors égale à la valeur du pH de cette ampoule standard. Si la couleur du milieu fini (dans un autre échantillon) apparaît plus claire, plus basse dans l'ampoule standard, alors le tube à essai avec le milieu est ajouté goutte à goutte avec 10% de la quantité de bicarbonate de soude ou 0,1 n. rozchin їdkogo natra, microburette vikoristuuuuchi pour cela. L'infusion de variations, qui neutralisent, goutte à goutte les points, jusqu'à ce que la couleur de l'échantillon ne corresponde pas à la couleur d'une ampoule. Pour une certaine quantité de millilitres d'abolugu de soude, striés pour neutralisation 2 ml du milieu (placés dans l'éprouvette n°2), peu importe, il faut quelques millilitres d'une quantité neutralisante pour régler le niveau de pH dans le toute préparation obligatoire d'un organisme vivant.
Dans les environnements très acides, la valeur du pH est attribuée à l'indicateur supplémentaire para-nitrophénol. Les rozchini _indikatorіv préparent le rang à venir.
1. 0,3 g de méta-nitrophénol est mélangé dans 100 ml d'eau distillée (plage de pH de 6,8 à 8,4).
2. 0,1 g de para-nitrophénol est dissous dans 100 ml d'eau distillée (plage de pH de 5,4 à 7,0).
Vous pouvez également définir une valeur approximative du pH du milieu à l'aide d'un indicateur universel. Pour cela, versez 2-3 ml du dernier milieu dans une tasse en porcelaine et ajoutez 2-3 gouttes d'un indicateur universel. Après avoir mélangé la somme avec un bâton de verre, fumez la couleur de l'essaim d'essaims sur l'échelle de couleurs du papier. Le pH du milieu fini sera le même que celui indiqué dans la femelle d'élevage égal de l'échelle de couleur. Le degré de précision de l'attribution du pH par un indicateur universel est proche de 0,5.
Préparation de la gélose peptonée à la viande (MPA)
Agar (en malais "gelée") est un discours organique pliable, qui est tiré d'algues marines. Derrière l'entrepôt chimique des vins, il y a une somme de glucides, que l'on peut voir jusqu'aux polysaccharides - semblables au galactose - et que l'on peut souhaiter construire. Les ajouts à la gélose de milieu rare donnent une épaisseur telle que la fusion est supérieure à la température d'ébullition. L'agar fond dans l'eau à environ 80-86 °C, plus dur à 36-40 °C. Zavdyaki tsoma sur des milieux gélosés peut être cultivé des microbes pour n'importe quelle température qui leur permet de vivre.
La gélose à la peptone de viande est préparée à partir de bouillon de peptone de viande concentré. Dans un grand flacon Erlenmeyerivsk avec une couche réfractaire, la capacité est de 2 litres, scellé avec un bouchon de coton, versez des concentrations de bouillon m'yasopeptonny, ajoutez 2 à 4% (variété de dépôt) d'agar finement haché, sans courber avec un bouchon, mettre un bouchon faible.
Le bouillon de pepton de viande doit être pris avec une réaction moyenne de 7,4, de sorte que pendant la stérilisation, le pH diminue de 0,2. La réaction de la m'yasopeptone agar peut s'installer si elle apparaît en dehors du bain de fusion. Si la gélose est de bonne viscosité et ne précipite pas, alors après que le pH est fixé, faire bouillir pendant 12-15 minutes, filtrer sur du coton et verser dans le flacon ou les tubes à essai (dépôt pour la consommation), stériliser dans un autoclave pendant 20 min à 120 °C.
Si l'agar n'est pas une purification suffisante, vous pouvez donner un siège. Dans tous les cas, avant la stérilisation, la gélose m'yasopeptone doit être clarifiée. Pour cela, jusqu'à ce qu'il soit fondu et refroidi à 50°C, gélosez à la peptone de viande, ajoutez le blanc d'œuf, mélangez avec 30 ml d'eau et battez jusqu'à ce que je devienne une épingle. Pour 1 litre de milieu, prenez la protéine d'un œuf de poule. La gélose doit être prise au sérieux avec l'introduction de protéines et mise en autoclave pendant 10 minutes à 120°C. Sous l'heure d'ébullition, les blancs brûlent et étouffent toutes les parties importantes. Après autoclavage, la gélose est filtrée sur un filtre en gaze de coton. Pour qui, prenez un verre de virva de grand diamètre, tirez dessus de la gaze, et mettez une fine boule de coton sur l'animal. Filtrer rapidement la gélose bouillante au besoin et filtrer jusqu'à ce qu'elle soit versée dans des tubes à essai de 5 à 10 ml. La stérilisation du milieu est réalisée à l'autoclave, comme indiqué ci-dessus.
Après avoir stérilisé les tubes à essai avec le milieu, qui doit être remplacé par 5 ml d'agar, mettre au camp maladif afin que l'agar ne dépasse pas du bouchon. Après avoir été capturés, ils gagnent de la gélose "oblique" (ou biseautée). Des tubes à essai avec 10 ml d'agar sont placés sur un trépied et laissés attraper, en enlevant le milieu, versez sur une "table haute". La gélose oblique n'est pas recommandée pendant plus de 4 à 7 jours, des éclats de vin pendent.
La gélose au pepton de viande est le principal milieu donneur de vie, qui est vicorisé lors des analyses bactériologiques dans les laboratoires de microbiologie. Vous pouvez le battre comme une «simple gélose», comme ceci: après avoir ajouté des glucides, créez un milieu de diagnostic différentiel complexe.
Vivre au milieu en microbiologie, ils nomment les supports, qui sont différents du côté pliant d'un simple entrepôt, comme zastosovuyutsya pour la reproduction de bactéries et d'autres micro-organismes dans les esprits industriels de laboratoire.
Prêt pour la vie au milieu des produits du nombre d'aventures croissantes de la créature. Grande importance dans le milieu vital des facteurs de croissance qui catalysent les processus métaboliques des cellules microbiennes (vitamines du groupe B, acide nicotinique, etc.).
Morceau de média préparez-vous à chanter des recettes à partir d'infusions diverses ou du voyage de saumure et d'aboroslyne avec l'ajout de sels inorganiques, de glucides et de discours azotés.
En pratique bactériologique le plus souvent par procuration sont des milieux secs donnant la vie, qui sont obtenus sur la base de la biotechnologie actuelle. Для їх приготування використовують економічно рентабельну нехарчову сировину: що втратили термін придатності кровозамінники (гідролізин-кислотний гідролізат крові тварин, амінопептид - ферментативний гідролізат крові; продукти біотехнології (кормові дріжджі, кормовий лізин, виноградне борошно, білколізин). часу, зручні при транспортуванні та мають Entrepôt type visible.
Pour la cohérence les centres vitaux peuvent être rares, napіrіdkie, schіlniy. D'autres milieux sont préparés avec un chemin pour ajouter 1,5-2% d'agar à un milieu rare, par exemple - 0,3-0,7% d'agar. L'agar est un produit du traitement d'un type spécial d'algues, il fond à une température de 80-86 ° C, il est plus dur à une température proche de 40 ° C et à l'état congelé, il a une épaisseur moyenne. Dans certains cas, pour l'extraction du milieu scléral vivifiant, de la gélatine (10-15%) est utilisée. Un certain nombre de milieux vivants naturels (sérum sanguin brûlé, blanc d'œuf brûlé) sont des coquilles Saint-Jacques.
A des fins de reconnaissance les milieux sont subdivisés sur le diagnostic principal, sélectif et différentiel.
Jusqu'aux principaux, on peut voir ceux du milieu, qui zastosovuetsya pour la croissance de bactéries riches. Ce sont des hydrolysats tryptiques de viande, de produits de la pêche, de créatures sanguines ou de caséine, à partir desquels ils préparent un milieu rare - un bouillon vif et une gélose vive. Ces milieux sont à la base de la préparation de milieux gras pliés - sanglants, sanglants qui satisfont les besoins alimentaires des bactéries pathogènes.
Les médiums donneurs de vie électifs sont reconnus pour la vision vibrante et l'accumulation de micro-organismes de type chanson (ou groupe chantant) à partir de matériaux, qui vont venger une microflore tierce différente. Lorsque les organismes vivants sélectifs sont combinés, ils émergent des caractéristiques biologiques, qui sont similaires aux données de micro-organismes du plus grand nombre d'autres. Par exemple, la croissance vibratoire de staphylococcus aureus est associée à une concentration accrue de chlorure de sodium, vibrio cholerae - dans le milieu de la flaque d'eau.
Les milieux vivifiants de diagnostic différentiel sont vicieux pour la démarcation de quatre espèces (ou groupes) de micro-organismes. Le principe d'encouragement de ces milieux repose sur le fait que différentes bactéries peuvent être distinguées entre elles pour l'activité biochimique due à un ensemble inégal d'enzymes.
Un groupe spécial est composé de médiums vivifiants synthétiques et non synthétiques. L'entrepôt de médias synthétiques comprend de la parole chimiquement pure: acides aminés, sels minéraux, glucides, vitamines. Dans le milieu synthétique, incluez en outre de la peptone, de l'extrait de levure et d'autres paroles vivantes. Ces intermédiaires sont le plus souvent utilisés par des robots scientifiquement avancés et dans l'industrie microbiologique avec la sélection d'antibiotiques, de vaccins et d'autres préparations.
Dans le reste du monde, avec la méthode de sauvetage des morts, l'identification accélérée de certains micro-organismes (entérobactéries, staphylocoques, streptocoques, etc.) s'appellera le système microtest (MTS). La puanteur est constituée de plaques de polystyrène trouées, dans lesquelles sont placés des milieux de diagnostic différentiel stériles. La stérilisation du MTS est réalisée par test UV. Les systèmes de microtests sont particulièrement efficaces en cas d'études bactériologiques massives dans des laboratoires pratiques.
Wimogi au milieu vivant
Qu'il s'agisse d'un médium vivifiant, on peut se rassurer en faisant avancer le vimog : revenge tout le nécessaire à la reproduction du micro-organisme de la parole sous une forme facile à conquérir ; les mères ont une teneur en eau, une viscosité et un pH optimaux, mais sont isotoniques et peuvent être transparentes. Le milieu vivifiant de la peau est stérilisé de manière chantante en jachère dans l'entrepôt.
Lors de la préparation de milieux vitaux, il est nécessaire de protéger le besoin de micro-organismes, qui sont cultivés, dans divers éléments de la vie. Іsnuyut différentes classifications des milieux vivants.
Classement des milieux vivants derrière l'entrepôt :
1. Pardonne le milieu(MPB, MPA, gélatine, eau peptonée). Le bouillon de viande-pepton (MPB) est la base protéique de tous les milieux.
Іsnuє kіlka façons de préparer MSB:
a) sur de l'eau charnue en ajoutant de la peptone finie;
b) sur les digestions des produits d'hydrolyse du sirop libre avec des enzymes supplémentaires.
M'yaso-peptonny agar (MPA) otrimuyut un moyen d'ajouter de l'agar-agar (1,5-3%) au MPB. Par exemple, les divisions MPA le long de la diagonale des tubes à essai et des flacons sont les mêmes que les biseaux de la gélose. Comme la partie médiane, l'échantillon mesure verticalement 5 à 7 cm de haut, avec un support de gélose. MPA, pris dans des boîtes de Petri comme shtastshki - parties de plaque d'agar. Comme celle du milieu, il y a une boule verticale de 2-3 cm de haut et une boule diagonale de même taille, le prix de l'agar agar.
2. Milieu pliable préparé à base d'additifs simples (glucides, sang, zhovch, œufs, sirovatka, lait, sel, facteurs de croissance aussi)
Classification des milieux vitaux pour les composants externes :
1. Centres de vie naturelle- C'est un produit naturel d'une créature ou d'une plante en croissance.
Peut buti :
Roslinnі (produits externes - soja, pois, pommes de terre, carottes).
Créatures (produits externes - viande, poisson, œufs, lait, tissus animaux, jovch, sérum sanguin).
Zmishani (MPA, milieu de Levenshtein - Jensen toshcho).
2. Morceau de média pour emporter les produits naturels transformés (eau de viande, digest), la parole, otrimanі z tsikh produktіv (extraits de peptone, de levure et de maïs) et divers additifs. Le groupe de supports le plus varié et le plus varié stagne le plus souvent derrière l'entrepôt. Ils sont préparés pour chanter des recettes à partir de diverses infusions de chi dans le nombre sauvage de la plante, avec l'ajout de sels inorganiques, de glucides et de discours azotés.
3. Médias synthétiques(dans l'entrepôt de produits chimiques à domicile) sont formés à partir de stocks chimiquement purs aux concentrations exactes (avec l'ajout de glucides, de sels, d'acides aminés, de vitamines, etc.). A partir de ces milieux, en leur ajoutant des milieux naturels ou reconstitués, ils acquièrent des milieux synthétiques.
Classification des milieux vivants pour la cohérence : milieu buvayut rare(milieu sans gélose), Comme(Avec gélose jusqu'à 1%), schіlnі(Agarovi - 1,5-2,5%). Les milieux rares sont le plus souvent utilisés pour la culture des caractéristiques physiologiques et biochimiques des micro-organismes, pour l'accumulation de la biomasse et des produits d'échange. Napіvridkі seredovishcha chante vicoriste dans les cultures de zberіgannya, shіlnі - vіdіlennya mikroorganіzmіv, vyvchennya morphologiiї colіnіy, dіnostichnyh іlіy, kolіkіsny inіku, vznаhіchnyt antagoniste
Classement des milieux vivants aux fins de reconnaissance : universel (diffusé) et spécial.
Médiums universels (de base). Les milieux vicoreux sont utilisés pour cultiver plus de micro-organismes nevibagly, ou comme base pour préparer des milieux spéciaux, en leur ajoutant du sang, du zukor, du lait, du babeurre et d'autres ingrédients nécessaires à la reproduction de ce micro-organisme. Aux groupes tsієї se trouvent: MPB - bouillon m'yaso-pepton, MPA - gélose m'yaso-pepton, MPZH - gélatine m'yaso-pepton en fine couche.
Média spécial. Nommé vidilennya et culture sélective d'espèces de micro-organismes chanteurs, les yakі poussent sur des supports simples.
Il existe de tels types de milieux spéciaux : milieux d'enrichissement, milieux électifs, de diagnostic différentiel, conservateurs et d'accumulation.
Richesse moyenne. Beaucoup de micro-organismes ne se développent pas sur des milieux naturels, pour augmenter la valeur vivante du milieu, on y ajoute des glucides (bouillon de saccharose ou gélose) ou des protéines (gélose et bouillon de serovatkovy, gélose au sang et bouillon). La gélose au sang ou le bouillon de sang est prélevé avec un chemin pour ajouter 5 à 10% de sang défibriné stérile d'un mouton, d'un lapin, d'un cheval, d'un être humain au milieu vital. Le vicoriste moyen est utilisé pour l'observation des streptocoques, des pneumocoques et d'autres bactéries, ainsi que pour le développement de l'activité hémolytique. Le bouillon Sirovatkovy ou la gélose grisâtre est pris en passant pour ajouter aux milieux simples 15 à 20% de Kіnskoy ou de bichachoї syrovatka.
2. Moyens électifs (sélectifs). Ces médiums sont reconnus pour faire vibrer la vision et l'accumulation de micro-organismes du même type à partir du matériel, ce qui revient à venger l'apparition des microbes. Lors de l'affichage sur eux du matériel pour venger la somme de différents micro-organismes, nous montrerons la croissance de cette espèce, pour laquelle le milieu donné sera sélectif. La vivacité du médium est atteinte par la voie de la création d'esprits optimaux pour la culture de microbes chantants (pH, Eh, concentration en sel, stockage de paroles vivantes), tobto. sélection positive. Une façon d'ajouter au milieu des discours, qui seront ignorés par d'autres micro-organismes (zhovch, fortes concentrations de NaCl, antibiotiques, etc.), tobto. sélection négative. Pour tsієї groupe de mentir:
Milieu sélénite- є le meilleur terrain d'entente pour les microbes de la salmonelle et de la dysenterie à Sonne. Le sélénium de sodium, qui se trouve au milieu, stimule la croissance de ces bactéries et supprime la croissance de la flore qui les accompagne.
Gélose au sulfite de bismuth venger le sel dans la boue, le diamant vert. Les salmonelles se développent au milieu du milieu qui ressemble à des colonies de couleur noire. Sinon, ne donnez pas de bactéries sur la croissance moyenne.
Gélose Zhovtkovo-salage (JSA) le terrain d'entente pour l'observation des staphylocoques est jusqu'à 10% de chlorure de sodium, ce qui prend en compte le plus grand nombre de bactéries contenues dans le matériau. De plus, le milieu est également différentiellement diagnostique, puisque la présence de jaune d'œuf permet de détecter l'enzyme lécithinase (lécitovitelase), qui tue les staphylocoques pathogènes. La lécithinase décompose la lécithine en phosphorcholine et en acides gras non réactifs à l'eau, c'est pourquoi le milieu des colonies lécithinase positives à la calamité apparaît comme une zone opalescente sous l'apparence d'une "veine radiale".
bouillon de boeuf sélectif pour la salmonelle, la reproduction de ces stimulants est ajoutée à 10% de zhovch, ce qui galmue immédiatement la croissance des micro-organismes qui l'accompagnent.
flaque d'agar ou flaque d'eau peptonée sélectif pour le vibrion cholérique, la réaction de flaque d'eau du milieu (pH 9,0) ne modifie pas la croissance du vibrion cholérique, mais galmui la croissance d'autres micro-organismes. 3-5 déb. ET
3. Médias de diagnostic différentiel. Les milieux de diagnostic différentiel doivent être utilisés pour la différenciation d'un type de micro-organisme avec un caractère différent de leur activité enzymatique. L'entrepôt de ces médiums doit être sélectionné avec un tel chapelet, afin de révéler clairement la dominance la plus caractéristique du type de micro-organisme chantant, soulignant les particularités de son échange de parole.
Au milieu de la manifestation de microbes protéolytiques et hémolytiques zdatnosti, vengeance dans votre entrepôt de parole protéique: sang, lait, gélatine fine. Les milieux les plus variés sont la viande-peptone gélatine (MPZ), qui a été brûlée, le lait et la gélose au sang (KA).
Les milieux de développement des pouvoirs glycoliques comprennent trois composants principaux : une base vivifiante (bouillon, gélose), un substrat (monota de disaccharide, alcool riche) et un indicateur de la manifestation de certaines enzymes. Clive enzymatiquement les substrats pour produire une valeur de pH qui modifie la contamination du milieu. La plus large gamme de couleurs du milieu avec divers glucides (par exemple, du bleu de bromthymol, indicateur BP). Le milieu de Giss est également plus large, dans lequel ils protègent la diversité et la capacité de fermenter différents glucides avec des solutions acides, acides et gazeuses.
Pour la différenciation des entérobactéries, saturez l'eau peptonée avec un ensemble de divers glucides, l'indicateur d'Andrede et des flotteurs, qui facilitent la détection de la gazéification et aident à déterminer visuellement le changement de pH, caractéristique de divers micro-organismes. Zokrema, écrasé du côté acide, rougit le milieu avec le réactif d'Andride, ou pozhovtinnya avec un milieu indirect avec du bleu de bromthymol, de la même manière lorsqu'il est étamé avec l'indicateur d'Andrede et du bromthymol bleu, ne change pas la couleur du milieu. Par exemple, l'observation de bactéries pathogènes provenant des intestins infecte le milieu, ce qui permet de différencier les microorganismes pathogènes des habitants post-intestinaux - microorganismes qui décomposent le lactose.
Un tel milieu est le milieu d'Endo. Les principaux composants du milieu Endo sont le MPA, le lactose et la fuchsine basique, le sulfite de sodium. Au milieu de l'endroit qui donne la vie, le centre a été transformé en une couleur claire d'érysipèle. Lors de la fermentation du lactose, l'acétaldéhyde est dissous, ce qui réagit avec le sulfite i, qui vibre avec le coma, la fuchsine transforme les colonies en une couleur rouge vif. Pour cela, le bâtonnet intestinal, au fur et à mesure qu'il fermente le lactose, en poussant sur ce milieu, il établit des colonies rouges avec un blisk métallique, et des salmonelles et des shigels sans baril, car cette puanteur ne fermente pas le lactose.
4. Le milieu de l'accumulation, dans certains d'entre eux, il y a une augmentation du nombre d'espèces uniques de micro-organismes.
5. Milieux de conservation (transport). Nommé pour la conservation du micro-organisme au cours de la prochaine heure de transport jusqu'au mois de livraison. Ces milieux doivent prendre soin des additifs, qui empêchent la reproduction et la mort des microbes, ce qui leur sauve la vie. Glycerin sum (Tiga's medium), phosphate-buffer sum et Kari-Bleyr, Amies (avec vugillia activé et sans vugillya activé), Stewart et in.
Stérilisation des milieux vitaux.
Tous les médiums vitaux sont versés indépendamment de leur signe dans des plats propres et stérilisés. La plupart des médiums sont stérilisés à l'autoclave, mais dans des conditions différentes, en jachère dans leur entrepôt.
1. Les milieux synthétiques et tous les milieux gélosés, qui ne doivent pas être conservés dans son propre entrepôt de protéines et de glucides natifs, sont stérilisés pendant 15 à 20 minutes dans un autoclave à une température de 115-120°C et une pression de 1-1,5 atmosphères.
2. Seredovishcha avec des glucides et du lait (jusqu'au niveau de lactose), la gélatine vivante est stérilisée à la vapeur droite à une température de 100 ° C de manière fractionnée ou dans un autoclave à 112 ° C et avec une pression allant jusqu'à 1 atmosphère.
3. Seredovishcha, dans l'entrepôt duquel entre la parole blanche (sérum sanguin, patrie ascitique), fluctue avec la tyndalisation ou la filtration.
4. Pour la stérilisation des milieux vitaux, qui sont conservés dans leur propre entrepôt, les protéines natives sont durcies par filtration à travers les filtres à membrane Seitz.
Pour contrôler la stérilité du milieu après stérilisation, placer un thermostat à 37°C pour 3-5 dB. Certaines des parties médianes des coupables sont laissées ouvertes et, à la surface, chez les camarades des parties médianes vivantes des innocents, il y a des signes de croissance. Pour le contrôle de la stérilité, le contrôle chimique des milieux préparés est déterminé, ce qui affecte le fait que le pH, la quantité d'azote total et aminé et les chlorures sont déterminés dans les décalcomanies de la série cutanée.
Іsnuє également le contrôle biologique des médias. Dans ce cas, un sprat de germes du milieu est planté avec une culture de laboratoire de ce microbe, pour lequel le milieu est préparé, et le caractère de la croissance yogo est cultivé. Ce n'est qu'après cela, comme les intermédiaires ont montré le contrôle, qu'ils peuvent être victorieux pour les aveux.
Pour la reconnaissance des logements, ceux du milieu sont subdivisés en catégories principales.
Universel- Milieu, sur lequel une bonne croissance est riche en espèces de bactéries pathogènes et non pathogènes. Avant eux, vous pouvez voir: bouillon de viande-pepton (MPB = eau de viande + 1% peptone + 0,5% NaCl), gélose viande-pepton (MPA = MPB + 2-3% agar).
Différentiel et diagnostic- les intergiciels, qui permettent de traiter une espèce de bactérie avec d'autres types d'activités enzymatiques ou de manifestations culturelles. Devant eux on peut voir les milieux d'Endo, Levina, Ploskirev, Gissa et bien d'autres.
sélectif(synonymes: sélectif, sélectif, zbagachuvalnі) - intergiciels, qui vengent la parole, qui sont délégués par des micro-organismes de la première espèce et ne prennent pas ou ne provoquent pas de changement dans la croissance d'autres micro-organismes. Les milieux sélectifs permettent une sélection directe des bactéries à partir du matériel étudié. Parmi ceux-ci figurent Muller, Selenitov, Rapoport, 1% d'eau peptonée et autres.
Différentiel sélectif- les médiums, qui acquerront la puissance des médiums différentiels-diagnostiques et sélectifs. La puanteur vikoristovuyutsya, zokrema, pour l'identification précoce de cette identification de bactéries, qui peut être vue pour un grand nombre d'espèces largement élargies d'entérobactéries et de pseudomonades (milieu de Syvolodsky).
Spécial- Milieux, spécialement préparés pour la croissance des bactéries silencieuses, afin de ne pas se développer, sinon c'est méchant de se développer sur des milieux universels. Devant eux, on peut voir les milieux de McCoy-Chapin (pour la prévention de la croissance de la tularémie), le sang du MPA (pour la prévention de la croissance des streptocoques pathogènes), le milieu de Levenshtein-Jensen (pour l'observation de la tuberculose), et dans.
Synthétique- Au milieu d'un entrepôt chimique salé, qui est une source de sels inorganiques avec des ajouts de champs chimiques, le yak sert de dzherel de charbon ou d'azote. Le culot d'un tel milieu synthétique est le milieu minimum M-9, dans lequel l'énergie et le carbone sont le glucose, et l'azote est le NH4C1. Les supports synthétiques peuvent être plus pliables avec l'inclusion de divers acides aminés, bases et vitamines.
Sieste_synthétique- les milieux synthétiques auxquels ils s'ajoutent, qu'il s'agisse d'un produit d'exposition naturelle, par exemple le sérum sanguin. Il existe de nombreuses options différentes pour les milieux vivants, conçues pour répondre aux besoins de différents types de bactéries et à des fins de diagnostic.
Moteur électrique asynchrone A4 pour les mécanismes d'entraînement qui n'affectent pas le contrôle de la fréquence de l'emballage (ventilateurs, ventilateurs d'extraction, pompes). Vous pouvez découvrir les caractéristiques des moteurs de la série A4 et leurs caractéristiques sur
