A mezzi viventi pieghevoli per far sdraiare i batteri. Vedi i mezzi viventi. Applicare mezzi diagnostici differenziali

Ricerca microbiologica: l'osservazione di colture pure di microrganismi, coltivazione e coltivazione del loro predominio. Le culture si dicono pure se sono microrganismi della stessa specie. Il fetore è necessario nella diagnosi delle malattie infettive, nell'identificazione delle specie e nell'affiliazione tipica dei microbi, nei seguenti robot, nell'eliminazione dei prodotti della vita dei microbi (tossine, antibiotici, vaccini, ecc.).

Per la coltivazione di microrganismi (coltivazione in pezzi in vitro), sono necessari substrati speciali - mezzo vitale. Al centro del microrganismo vengono eseguiti tutti i processi vitali (vivi, muori, si moltiplica sottilmente), quindi sono anche chiamati i centri per la coltivazione.

Vivi nel mezzo

La vita del mezzo è la base del lavoro microbiologico, che spesso indica i risultati di tutte le ricerche. La parte centrale del senso di colpa è creare il lavaggio ottimale (migliore) per la vita dei microbi.

Vimogi al centro

I medi sono responsabili di tali azioni:

1) essere vivi, in modo da poter togliere alla persona facilmente conquistabile tutti i discorsi, la necessaria soddisfazione dei bisogni alimentari ed energetici. Sono la fonte di organogeni e discorsi minerali (inorganici), inclusi i microelementi. Il linguaggio minerale non è solo incluso nella struttura del clitino e attiva gli enzimi, ma determina anche il potere fisico e chimico del mezzo (pressione osmotica, pH e in.). Quando si coltivano microrganismi bassi nel mezzo, aggiungere fattori di crescita: vitamine, aminoacidi attivi, come la clitina, che è impossibile da sintetizzare;

Rispetto! I microrganismi, come tutti gli esseri viventi, richiedono una grande quantità di acqua.

2) madri la concentrazione ottimale di ioni d'acqua - pH, in modo che solo con la reazione ottimale del mezzo, che contribuisce alla penetrazione della tunica, i microrganismi possano conquistare la vitalità del discorso.

Per un gran numero di batteri patogeni, un mezzo debolmente lume è ottimale (pH 7,2-7,4). Vignatok diventa colera vibrio: il suo ottimale si trova nella zona della pozzanghera (pH 8,5-9,0) e nel vibratore della tubercolosi, che richiede una reazione leggermente acida (pH 6,2-6,8).

Singhiozzo l'ora di crescita del microrganismo nei prodotti acidi o nelle pozzanghere della loro vita non ha cambiato il pH, il mezzo è responsabile del tamponamento, in modo che la parola possa essere vendicata, in modo che i prodotti siano neutralizzati; scambio;

3) essere isotonico per le cellule microbiche; quindi la presa osmotica del centro può essere la stessa del centro delle cellule. Per un gran numero di microrganismi, il mezzo medio è ottimale, che contiene lo 0,5% di differenza rispetto al cloruro di sodio;

4) essere sterili, frammenti di microbi di terze parti modificano la crescita del microbo esistente, indicandone il potere e modificando il potere del mezzo (magazzino, pH, ecc.);

5) middleware principale dovuto alla butivologia e alla consistenza ottimale per il microrganismo;

6) potenziale madre pevny okislyuvalno-vydnovny, che spіvvіdnoshnja rechovins, scho per dare e ricevere elettroni, che è espresso dall'indice RH 2 . Questo potenziale mostra l'aumento nel mezzo dell'acidità. Per alcuni microrganismi, l'alto potenziale richiesto, per altri - basso. Ad esempio, gli anaerobi si moltiplicano a RH 2 non superiore a 5 e gli aerobi - a RH 2 non inferiore a 10.

7) essere unificato il più possibile, in modo da aumentare la quantità degli altri ingredienti. Pertanto, il mezzo per la coltivazione di batteri più patogeni è responsabile di 0,8-1,2 g/l di azoto amminico NH 2 rispetto all'azoto totale dei gruppi amminici di aminoacidi e dei polipeptidi inferiori; 2,5-3,0 g/l di azoto azoto N; 0,5% di cloruri nella pererahunka per cloruro di sodio; 1% peptone.

Bazhano, in modo che gli ambienti fossero perspicaci: è meglio seguire la crescita delle culture, è più facile ricordare l'allontanamento dell'ambiente da parte di microrganismi di terze parti.

Classificazione del mezzo

La necessità di discorsi viventi e il potere del mezzo in vari tipi di microrganismi non è la stessa. È la creazione inarrestabile del mezzo universale. Inoltre, sulla scelta di quel chi di mezzo, aggiungi il numero di conquiste.

In quest'ora è stata proposta la grandezza del numero dei medium: tali segni sono posti come base per la loro classificazione.

1. Componenti esterni. Con i componenti vihіdnim distinguere tra mezzi naturali e sintetici. I mezzi naturali sono preparati dai prodotti della pianta botanica e in crescita. In Danimarca; un'ora di decomposizione nel mezzo, in alcune varietà di prodotti a base di larve (carne e altro) sono sostituiti da quelli non raccolti: cistica e ribnim boroshny, pioggerella di foraggio, coaguli di sangue e dentro. Indipendentemente dal fatto che anche il magazzino di vivande di prodotti naturali sia pieghevole e cambi in maggese sotto forma di sirovina selvatica. I mezzi sintetici sono preparati da composti organici e inorganici chimicamente puri, prelevati da concentrazioni e differenze determinate con precisione in due acque distillate. La priorità di questi mezzi è importante per coloro che hanno un magazzino permanente (apparentemente, i discorsi skіlki e yakі sono inclusi in essi), che questi mezzi sono facili da creare.

2. consistenza(Stupin schіlnostі). Quelli di mezzo sono rіdkі, schіlnі e napіvіrіdki. Questi middleware sono preparati da quelli rari, fino a quando non vengono aggiunti per aggiungere agar-agar o gelatina al centro della consistenza richiesta.

L'agar-agar è un polisaccaride, che è preso dalle varietà cantate delle alghe. In є per il microrganismo con un discorso vivace e serve solo per il rafforzamento del mezzo. In acqua, l'agar fonde a 80-100°C, fonde a 40-45°C.

La gelatina è la proteina del viaggio della creatura. A 25-30 ° C, i mezzi gelatinosi si sciolgono, quindi le colture su di essi vibreranno a temperatura ambiente. Lo spessore di questi mezzi a un pH inferiore a 60 e superiore a 70 cambia e la puzza è gravemente superata. Gelatina vicaria di microrganismi attivi come il discorso vivificante - per la crescita del mezzo si alza.

Inoltre, come cuore cattivo, brucia il siero del sangue bruciato, brucia le uova, le patate, il centro con gel di silice.

3. scorta. Le parti centrali sono divise in semplici e pieghevoli. Ai primi si aggiungono brodo di peptone di carne (MPB), agar di peptone di carne (MPA), brodo e agar di Hottinger, gelatina viva e acqua di peptone. I mezzi pieghevoli sono preparati, aggiungendo sangue a mezzi semplici, sirovatka, carboidrati e altri discorsi, la riproduzione necessaria di questi altri microrganismi.

4. Appuntamento: a) i mezzi principali (emiviventi) servono per la coltivazione di batteri più patogeni. Tse vishchezgadani MPA, MPB, brodo e agar Hottinger, acqua peptone;

b) i media speciali servono per vedere e far crescere i microrganismi, come la crescita su semplici media. Ad esempio, per la coltivazione dello streptococco, aggiungi tsukor al centro, per pneumo-i meningococchi - siero del sangue, per tosse tosse - sangue;

c) i mezzi selettivi (selettivi) servono a vedere il tipo canoro dei microbi, la crescita di tali puzza da saturare, soffocando la crescita dei microrganismi di accompagnamento. Pertanto, i sali degli acidi zhovchnyh, aggravando la crescita dei coli intestinali, rendono il mezzo selettivo per l'agente eziologico della febbre tifoide. Il mezzo diventa selettivo quando viene aggiunto a loro cantando antibiotici, sali, cambiamenti di pH.

Alcuni media elettivi sono chiamati mezzi di accumulo. Il calcio di un tale mezzo è acqua peptonata con un pH di 8,0. A questo pH, il colera vibrio si riproduce attivamente su di esso, altri microrganismi non crescono;

d) i mezzi diagnostici differenziali consentono di distinguere (differenziare) un tipo di microbi con altra attività enzimatica, per esempio, il mezzo Hiss con carboidrati e un indicatore. Con la crescita dei microrganismi, che si dividono in carboidrati, il colore del mezzo cambia;

e) i mezzi di conservazione siano destinati alla semina primaria e al trasporto del materiale successivo; prediligono i microrganismi patogeni e trascurano lo sviluppo dei saprofiti. Il calcio di un tale mezzo è la somma di glicerina, che è vittoriosa per la selezione del vigore durante il follow-up, che viene effettuato con il metodo di rilevamento dei batteri intestinali bassi.

Le ricette per la preparazione delle stoffe sono suggerite per l'esempio di una divisione offensiva e quella dell'altra parte del fazzoletto.

Controllare la nutrizione

1. Che tipo di vimog può essere soddisfatto degli alloggi del centro?

2. Come classificare i componenti intermedi per componenti esterni?

3. Quali discorsi servono per rafforzare la parte centrale?

4. Quali sono i mezzi?

5. Quali sono le parti centrali chiamate pieghevoli, qual è la loro base?

6. In che modo i medium consentono di tenere conto della crescita più importante di alcuni microbi mentre si strangolano altri per un'ora?

7. Quali mezzi mostrano l'attività enzimatica dei microbi?

gestore

Compila il modulo, indicando quali gruppi aggiungono il centro.

Preparazione dei mezzi

Gli utensili per la preparazione dei mezzi non sono colpevoli di vendetta di discorsi di terze parti, ad esempio i prati, che sono visti da una sorta di skla, o sale ossidate, che possono essere consumate mercoledì cucinando її in pentole arrugginite. Malediciamo i migliori, utensili smaltati o in alluminio. Grandi quantità di medium (decine e centinaia di litri) vengono preparate in appositi digestori o reattori (piccoli 14). Prima dell'impianto, i piatti devono essere accuratamente lavati, risciacquati e asciugati. Far bollire la nuova vetreria in anticipo per 30 minuti nell'1-2% di acido cloridrico o zanyruyut alla stessa ora per la notte, dopodiché viene sciacquata a lungo con acqua corrente.

Rispetto! I piatti destinati alla preparazione di mezzi non possono essere utilizzati per altri scopi, ad esempio per la conservazione di reagenti chimici o per la decontaminazione, che possono essere disinfettati: le tracce di navit di questi discorsi possono causare la crescita di microrganismi.

Vihіdnoy syrovina per la preparazione di un gran numero di mezzi, servire i prodotti del viaggio aborosline di una creatura: carne e yogo zaminniki, latte, uova, patate, semi di soia, mais, lievito e altro.

I principali brodi di bestiame vengono cotti in acqua di carne o digestione, asportati con idrolisi acida o enzimatica della sirovina. Bouglioni con digestione in 5-10 volte economica, meno con acqua di carne. Seredovishcha sui digerisce ricchi di aminoacidi, otzhe, pozhivnishі; può essere più tamponato, in modo da ottenere un valore di pH più stabile. Inoltre, il digerito può essere preparato da sostituti della carne (coaguli di sangue, placenta, anche caseina).

A quest'ora, i laboratori venivano riforniti di acqua di carne e digestione centralizzata. Molto spesso sono incrostati con digerito pancreatico di Hottinger, idrolizzati di caseina o lieviti foraggeri. Da tsikh napіvfabrikativ per cantare le ricette prepara il middleware necessario.

Fasi di cottura mezzo: 1) variante; 2) impostazione del valore di pH ottimale; 3) illuminazione; 4) filtrazione; 5) imbottigliamento; 6) sterilizzazione; 7) controllo.

Bollire mezzi su fuoco caldo, bagni d'acqua, in autoclavi o caldaie, che vengono riscaldati in coppia.

Impostazione del pH quelli centrali sono orientati per l'aiuto di carte indicatrici. Per una determinazione accurata del pH, sono animati con un potenziometro, il vetro zastosovuyuschie degli elettrodi è collegato alle istruzioni del comparatore (apparato Mikhailis), che consiste in un treppiede con prese per provette (Fig. 15) e un set di Standard di pH. Quando si preparano le parti centrali, suonano come l'indicatore del metanitrofenolo, che cambia il colore nell'intervallo 6,8-8,4.

Per determinare il pH del mezzo della provetta 4, il diametro e il colore dei flaconi, che non corrispondono alle provette con gli standard, sono posti ai nidi 1, 2, 3 e 5 (div. Fig. 15). Nella 1a e 3a provetta versare 5 ml di acqua distillata; in 5 anni - 7 ml; nel 2° - 4 ml di acqua e 1 ml dell'indicatore. Nel nido 4 e 6, impostare lo standard per il pH richiesto. Nella 1a, 2a e 3a provetta, versare 2 ml del mezzo raffreddato. Al posto delle provette, mescolare.

Il colore dei ridens in provetta è uguale alla luce che passa, chiudendo l'apertura posteriore con un filtro (opaco o blu, come se fosse giallo intenso). Il pH del campione testato varia a seconda del pH standard, dal colore di cui si sceglie il colore.

Preparando il terreno impostando il pH, nei nidi 4 e 6 fissare gli standard, il cui pH è vicino al necessario, e nella 2a provetta con il terreno testato e l'indicatore, aggiungere dalla buretta la stessa quantità di prato, così come la luce nella 2a luce di prova per lo standard, o la differenza di acidità è come uno standard leggero. La pozza (o l'acido) viene aggiunta fino a quando non è tranquilla, fino a quando il colore dell'altro campione non corrisponde al colore degli standard. Kіlkіst lulu (aboacidi), aggiungere fino a 2 ml di mezzo in 2 campioni, pereahovuyut per l'intera lunghezza del mezzo preparato. Ad esempio, 2 gocce (0,1 ml) da 0,05 n. un prato, quindi per il trattamento di 1 litro occorrono 500 volte di più, tobto 50 ml di 0,05 n. o 2,5 ml 1n. apri il prato.

Durante la sterilizzazione, il pH dei mezzi diminuisce di 0,2 a quello per la rimozione del mezzo con un pH di 7,2-7,4 e la pannocchia viene preparata con un pH di 7,4-7,6.

Illuminazione i mezzi vibrano, come se durante la cottura, la puzza kalamutnіyut o si scurisse. Per schiarire il mercoledì, scaldare a 50°C, versare l'albume di un uovo di gallina, sbattere con acqua, mescolare e far bollire. Zgortayuchis, scoiattolo zahoplyuє nell'assedio del richiamo della parte centrale. Allo stesso modo, è possibile sostituire l'albume con siero di sangue vicario (20-30 ml per 1 litro di terreno).

Bagno di filtrazione mezzi gelatinosi rari e fondenti vengono fatti vibrare attraverso l'acqua di carta o attraverso filtri materici. La filtrazione dei mezzi di agar è difficile: la puzza si cattura rapidamente. Filtrarli attraverso un filtro di garza di cotone (un servlet di garza è posto vicino alla virva e su di esso è scritto un petto di cotone idrofilo). È possibile vikoristovuvaty paper o mater'yanі filtry, quindi eseguire la filtrazione in un'autoclave calda o in virvah con pidgrivom.

La filtrazione dei terreni di agar può essere sostituita dalle circostanze. Il mezzo viene versato vicino a un alto recipiente cilindrico e fuso in un'autoclave. In caso di raffreddamento sufficiente della parte centrale del dispositivo di avvolgimento, l'aria al suo interno si deposita spesso sul fondo. Il giorno successivo, il coagulo di agar viene rimosso dalla nave (per la quale la nave viene temporaneamente collocata vicino all'acqua calda) e la parte inferiore dell'assedio viene tagliata con un coltello, che si è accumulato. La parte superiore viene sciolta e versata nella parte superiore del contenitore.

imbottigliamento metà in provette (3-5 ml o 10 ml ciascuna), fiale, flaconi, materassi e palline di capacità non superiore a 2/3, in modo che durante la sterilizzazione i tappi possano bagnarsi e le metà perdano sterilità.

Il centro, come sterilizzato a temperature superiori a 100 ° C, viene versato in piatti puliti e asciutti. I mezzi che vengono sterilizzati a basse temperature vengono versati obov'yazkovo vicino a piatti sterili.

Versando il mezzo per l'aiuto di un annaffiatoio, all'estremità del quale è vestito un tubo di gomma dallo zatiskach Mora. Per l'imbottigliamento tranquillo, mettere sottilmente bicchieri, burette, dosatori, siringhe, pipette (piccolo 16).

Gli utensili dal centro sono chiusi con tappi di garza di cotone, sui quali vengono messi dei cappucci di carta. È importante che durante il versamento, il centro non abbia bagnato i bordi dei piatti, altrimenti i tappi potrebbero attaccarsi. Attaccare un'etichetta con il nome del luogo di residenza e la data di preparazione al vaso cutaneo.

Sterilizzazione. La modalità di sterilizzazione va depositata nel magazzino del mezzo di residenza e le indicazioni per questa ricetta. Lo schema Zrazkova per la modalità di sterilizzazione dei media è mostrato in Tabella. otto.

1 (Alcuni mezzi con carboidrati, proteine ​​e vitamine hanno maggiori probabilità di essere sterilizzati per ulteriori filtri batterici.)

Il controllo terreno preparato: a) per controllare la sterilità del terreno, metterlo in un termostato per 2 giorni, dopodiché viene rivisto. Non vi sono invece segni di crescita negli ambienti, sono considerati sterili e trasferiti per il controllo chimico della quantità di lesioni cutanee; b) controllo chimico: ripristinare in via residuale il pH, al posto dell'azoto totale e amminico, del peptone, dei cloruri (la loro quantità può essere uguale a quella indicata nella ricetta).

Il controllo chimico dei mezzi viene eseguito nel laboratorio chimico; c) per il controllo biologico, uno spratto di semi del mezzo viene inoculato con colture di microrganismi appositamente selezionate e per la loro crescita per giudicare la vita (crescita) della potenza del mezzo. Al supporto finito vengono aggiunti un'etichetta e un passaporto, e il nome del magazzino del supporto, i risultati del controllo e quello in.

Si prendono cura del mezzo per la temperatura ambiente negli armadi, a loro è particolarmente riservato. Deyakі seredovishcha, ad esempio, seredovischa con sangue e vitamine, prendilo dal frigorifero.

Ricette per la preparazione di mezzi semplici (di base) e cloruro di sodio isotonico

Soluzione isotonica di cloruro di sodio. A 1 litro di acqua distillata aggiungere 9 g di cloruro di sodio. Filtro Rozchin, impostare il pH nelle attività, secondo necessità, sterilizzare a 120 ° per 30 minuti.

Brodo di carne al peptone (MPB). Aggiungere l'1% di peptone e lo 0,5% x all'acqua della carne. compreso il cloruro di sodio, far bollire a fuoco basso per 10-15 minuti per aprire le bocche, ripristinare il pH richiesto e far bollire nuovamente per 30-40 minuti fino alla fine dell'assedio. Filtrare, aggiungere al volume primario con acqua e sterilizzare per 20 minuti a 120°.

Brodo caldo. Digerire il digerito di Hottinger con acqua 5-6 volte a maggese, a seconda di quanto azoto amminico può essere rimosso e quanto può esserci nel brodo (indicato nel passaporto del digerito e nella ricetta del mezzo). Ad esempio, per la preparazione di un mezzo con 1,2 g/l di azoto amminico, si è digerito a 9,0. g/l deve essere diluito 7 5 volte (9.0:1.2). Aggiungere lo 0,5% di cloruro di sodio al digerito diluito e far bollire a fuoco basso fino a quando il sale non è limpido.

Agar mesopeptone (MPA). Al brodo finito (prima della sterilizzazione o dopo), aggiungere il 2-3% dell'agar-agar raffinato e far bollire, mescolando, a fuoco debole fino a quando l'agar è completamente sciolto. L'MPA può essere bollito in un'autoclave o in un apparato di Koch. Il mezzo è pronto, quanto occorre, illuminare, filtrare e sterilizzare per 20 ore a 120°C.

L'agar napіdky colpisce lo 0,4-0,5% di agar-agar.

Gelatina di Zivilny. Aggiungere il 10-15% di gelatina al brodo pronto, scaldarlo finché non si scioglie (non far bollire!), versarlo in piatti sterili e sterilizzare a vapore.

Ricette per realizzare anime pieghevoli

Medio con carboidrati. Al brodo principale di agar fuso, aggiungere la quantità richiesta (0,1-2%) di un carboidrato puro (ad esempio glucosio). Successivamente, vengono versati in piatti sterili e sterilizzati con una coppia dritta. I frammenti di carboidrati vengono spesso distrutti in questa modalità di sterilizzazione, soprattutto il 25-30% delle differenze di carboidrati, sterilizzazione attraverso un filtro batterico, aggiunta dell'asepsi necessaria al mezzo principale sterile - dopo il controllo della sterilità, il nucleo è pronto per l'impianto.

In mezzo al sangue preparare 3 semplici mezzi sterili, integrando in serbatoi asettici (preferibilmente in scatole) fino al 30% (diciamo 5%) di sangue defibrinato sterile. Le parti centrali dell'agar vengono sciolte e raffreddate a 45 ° C prima del cym. Alla temperatura richiesta, può essere tollerato caldo, ma non opiku. Dopo l'aggiunta del sangue, fino a raggiungere il centro, al posto del giudice, mescolano e versano risolutamente tazze o provette.

Rispetto! Non puoi sputare nel mezzo con il sangue: il sangue può cambiare la tua autorità.

Tra il sangue grigio prepararsi proprio così, come un mezzo di sangue. Alle centrali principali aggiungere il 10-20% di siero, per non vendicare il conservante e inattivare in avanti a 56° con uno stiramento di 30 minuti a bagnomaria o in attivatore. Quando inattivato, il discorso (complemento) crolla, come effetto dannoso sui microbi.

Nel mezzo della vita. Ai medium semplici, aggiungere jovch in una quantità del 10-40% del medium, ripristinare il pH richiesto e sterilizzare per 20 minuti a 120°C. È possibile aggiungere jovch sterile ad un medium sterile in fosse asettiche.

Imbottigliamento di mezzi agar nella capsula di Petri. Prima dell'imbottigliamento, il centro viene sciolto a bagnomaria e raffreddato a 45-50 ° C. Per una tazza con un diametro di 9 cm, aggiungere 15-20 ml di mezzo (altezza della palla 0,25-0,3 cm). Poiché la palla è più grande, le colonie guardano la nuova più piccola in contrasto. All'arco di una palla sottile, una manciata di discorsi e volog mortali (il centro è shvidko pendulo) sono nettamente delimitati: la coltivazione della mente sta diminuendo.

Versare il centro in tazze sterili in serbatoi asettici. Metti le tazze con un coperchio, brucia. Prendi il vaso con il centro dalla mano destra, tagliando la fiamma di fuoco. Con la mano sinistra strizzano il tappo, strizzandolo con il mignolo e quel lato. Brucia il collo del giudice e con due dita della mano sinistra fai leggermente una copertura. Introdurre sotto il collo della fiala senza attaccarsi al bordo della coppa. Versando il centro, cuci, in modo che si alzi uniformemente lungo il fondo della tazza. Come quando si versa sulla superficie del centro, i bulbi vengono rimessi a posto, prima di loro, come se il centro fosse catturato, portano mezza giornata di sirnik o palnik: i bulbi si sbucceranno. Quindi chiudiamo la tazza e lasciamo catturare le parti centrali. Yakshcho sivba trascorre il giorno dell'imbottigliamento, il centro è necessario per asciugarsi. Per questa tazza in un termostato, apri con attenzione e installa i coperchi di quella tazza con il lato aperto verso il basso per 20-30 minuti. Come trascorrere il giorno successivo all'imbottigliamento, i bicchieri, non asciugandosi, bruciano sulla stessa carta, che hanno sterilizzato, e li ripongono in frigorifero.

Preparazione dell'agar slant. Le provette con 4-5 ml di terreno sterile agar fuso vengono poste in una posizione fragile (circa 20° sotto il taglio) con uno spazio tale che il centro non vada oltre i 2/3 della provetta, altrimenti può bagnare il sughero. Dopodiché, quando viene catturato il centro, metti le provette verticalmente, per scaricare la condensa. È meglio abituarsi all'agar appena tagliato.

Rispetto! Non è possibile coristuvatysya con il mezzo, per il quale non c'è condensa. Її Dopo, sciolgo di nuovo le rose a bagnomaria e falcio.

Mezzo secco

Vitchiznyana promyslov_st vpuskaє mezzo secco di diverso riconoscimento: semplice, elettivo, diagnostico differenziale, speciale. Tse polveri in bottiglie con tappi che si rovinano. Tolgono il mezzo secco dalla nebbia scura e lo chiudono: la puzza è igroscopica. In laboratorio, le polveri vengono utilizzate per preparare i libri di mezzo sulle etichette.

Il vantaggio dei mezzi secchi in mezzi puri preparati in laboratorio è standard (sono prodotti in grandi lotti), facilità di preparazione, in modo che possano essere resi disponibili in qualsiasi mente (navit), stabilità, economia. È importante che possano essere preparati a partire da sostituti della carne: idrolizzato di caseina, fibrina, spratto e per indurre frazioni proteiche di cellule microbiche (sarcina).

Controllare la nutrizione

1. Come posso utilizzare il pH del terreno per coltivare più microbi patogeni prima della sterilizzazione e perché?

2. A quale temperatura si sciolgono e catturano i mezzi di agar?

3. Come è colpa della preparazione dei piatti, in cui i mezzi vengono versati con carboidrati e proteine?

gestore

1. Preparare MPB, MPA, brodo e agar Hottinger pH 7,2-7,4, versare in fiale e provette; sterilizzare.

2. Preparare dalle polveri secche del mezzo Hiss, versare in provette da 4-5 ml e sterilizzare.

3. Preparare l'agar sangue e versare lo yogo nelle piastre Petri.

4. Preparare dalle polveri secche del centro di Endo, EMC, Ploskireva e versarle nella capsula di Petri.

5. Preparare gli slant di agar.

Metodi di Posiviv

Un passo importante nel follow-up batteriologico è la pubblicazione. È necessario studiare la natura del materiale di semina e il mezzo di vicoroso vicoroso in diversi metodi di semina. Tutti gli odori includono il metodo di legame: protezione contro i microbi di terze parti. Per questo, pratica il prossimo digiuno, ma senza bruschi rukhiv, che aiuteranno la colivanna ogni volta. Non è possibile raccontare l'ora del positivo. Lavora meglio nella boxe.

Rispetto! Non dimenticare di seguire le regole di sicurezza speciale per un'ora di lavoro con il materiale.

Semina da provetta a provetta. La provetta con il materiale originale e la provetta con il centro sono leggermente accartocciate nella mano sinistra tra i pollici e le dita in modo che i bordi delle provette siano allo stesso livello e le loro basi siano sopra il pennello. Suona la provetta dal materiale sorgente più vicino a te. Alla mano destra, come una penna da scrittura, tagliano l'ansa batterica e la sterilizzano, rifilando verticalmente a mezza luna. Con il mignolo di quel bordo del palmo della mano destra, offendi subito gli ingorghi. Spara ai tappi non con un rivk, ma senza intoppi, con mosse leggere e contorte. Tappi ammiccanti, i bordi delle provette sono bruciati da una mezzaluna di un palnik. Introdurre l'anello fritto attraverso una mezzaluna del palnik nella provetta con il materiale centrale, raffreddarlo e, dopo aver raccolto un po' di materiale, trasferirlo con cura nella provetta dal centro.

Quando si pianta il centro, l'ultimo materiale viene strofinato sulle pareti delle provette sulla madrepatria e striato con il centro.

Quando si pianta su un terreno normale con un tampone, lo yoga deve essere lavato nel mezzo per 3-5 secondi, risciacquato con esso. Quando sivbі sul nucleo centrale, il materiale viene strofinato sulla superficie, avvolgendo un tampone, dopodiché il tampone non viene infetto (posizionato sulla provetta, nello stesso modo in cui lo consegni al laboratorio, viene sterilizzato in autoclave) .

Rispetto! Tieni presente che il centro non si agitava e non bagnava il tappo.

Quando sivbі su smussi di agar, il materiale deve essere strofinato sulla superficie centrale con roux a zigzag dal basso in salita, a partire da tra la condensa.

Quando sivbі sulla fessura del mezzo, versato in provette con un calpestio, un anello con il materiale viene trafitto con un calpestio, vibrando in modo che i ranghi siano piantati con una "puntura".

Dopo la semina, l'anello viene rimosso dalla provetta, i bordi delle provette vengono bruciati e, dopo aver passato i tappi attraverso la metà del palnik, le provette vengono chiuse, dopodiché l'anello viene fritto.

Il materiale raro può essere seminato con pipette sterili (Pasteur o graduate). Dopo la semina, le pipette zanuryuyut nella madrepatria disinfettante.

Posizionare le bottiglie, i materassi e le bottiglie all'incirca così, come in una provetta, basta raccogliere il materiale sul retro (con un anello o una pipetta), quindi aprire il recipiente con il centro.

I giudici della cultura piantata vengono scritti e posti al termostato.

Semina in provetta da piastre Petri. Carattere di Vivchivshi della cultura in crescita sulla ciotola, dal lato del fondo, con un olivo di cera, la piantagione necessaria di un delyanka. Metti una tazza con un materiale ricco davanti a te con un coperchio bruciato. Apri il coperchio con la mano sinistra e inserisci l'anello bruciato sotto di esso. Dopo aver raffreddato il circuito, raccogli rifornimenti, materiale dalla trama designata. Facciamo un anello, chiudiamo la tazza e prendiamo una provetta dal centro della mano sinistra. La semina avviene allo stesso modo, come da provetta a provetta. Dopo aver posato la tazza, capovolgerla.

Semina su agar vicino a una capsula di Petri. Semina con una spatola. La spatola è un tubo di vetro o metallo, la cui estremità è piegata all'aspetto del tricutnik. La spatola può essere lavorata con una pipetta da pastorista, zignuvshi sotto il kutom її kinnets sottili, di fronte ad essa nella mezzaluna della palnica.

Apri leggermente il coperchio con la mano sinistra, accarezzandolo con un dito grande e impressionante. Con un cappio, con una pipetta o con un bastoncino di vetro, applicare il materiale di copertura sulla superficie del centro, dopodiché strofinarlo accuratamente con una spatola circolare doti, non smettere di muovere la spatola lungo la superficie del centro, con la vostra mano sinistra, con essa, rifilate il coperchio e avvolgete subito la tazza. Al termine della semina, la spatola viene rimossa dalla tazza e il coperchio viene chiuso. Una spatola cigolante viene posizionata vicino a un disinfettante e una spatola di metallo viene fritta vicino a un mezzo bruciatore.

Semina un cappio. Una piccola quantità di materiale vegetale (anche se mescolato davanti a una rosetta isotonica sterile o brodo) viene strofinata con un anello sulla superficie del centro del bordo della tazza, lo spratto viene una volta passato attraverso l'anello dal lato verso il becco. Aspettiamo fino alla fine di quel mese, quando i colpi sono finiti, foriamo l'agar con un cappio, conoscendo troppo materiale del seme. Il materiale rimanente, che viene lasciato sui passanti, è distribuito con balze a zigzag lungo l'intera superficie del centro. Dopo aver terminato la semina, chiudere la tazza e diserbare l'anello.

Semina un anello sul settore. La tazza dal lato del fondo è piegata in settori. La semina viene agitata con onde a zigzag dal bordo della tazza al centro. È necessario mantenere i punti in modo che i tratti non entrino nel settore del terreno.

Semina con tampone. Metti un tampone con materiale aggiuntivo vicino al troch per aprire una tazza e strofinalo con dei giri circolari sulla superficie del centro, avvolgendo il tampone e la tazza.

Semina un prato. Approssimativamente 1 ml (20 gocce) di una coltura nativa (come una coltura dal terreno dello stomaco, che può essere miscelata con una varietà isotonica sterile o brodo) viene applicato sulla superficie dell'agar e spargete con cura le feci sulla superficie del Il mezzo. La tazza è leggermente guarita e con una pipetta, la coltura in eccesso viene rimossa, agitando il disinfettante. Lì hanno messo una pipetta.

Semina agar con un compagno. La coltura coltivata su un terreno raro o il materiale emulsionato deve essere aggiunto a un recipiente con agar fuso e raffreddato a 45 ° C, mescolato e agitato in una capsula di Petri sterile. È possibile aggiungere materiale aggiuntivo in una tazza vuota e versare 15-20 ml di agar raffreddato a 45 ° C. Per la miscelazione al posto della tazza, i troch vengono rubati e avvolti. Le tazze vengono lasciate sul tavolo fino a quando non viene catturato il centro.

Le coppe di illuminazione sono firmate dal lato del fondo e posizionate al termostato con il basso verso l'alto.

Controllare la nutrizione

1. Di cosa hai bisogno per il lavaggio asettico per una giornata di sivby? Arrotondalo.

2. Come è necessario completare lo spazio di lavoro dopo la semina?

Metodi di coltivazione

Per una coltivazione di successo, un terreno selezionato correttamente e una semina correttamente coltivata, è necessaria una mente ottimale: temperatura, contenuto di umidità, aerazione (ripetizione del cerotto). Di norma, le menti sono autorizzate a creare, decisamente attente all'ambiente naturale.

Temperatura. La temperatura ottimale per la coltivazione della maggior parte dei microrganismi patogeni (37 ° C) viene determinata al termostato (Fig. 17). Questo è un attaccamento fatto di pareti sotterranee, che possono essere conosciute ancora e ancora, o di acqua, che è riscaldata dall'elettricità. In zabezpecheniy con un termostato, che regola automaticamente la temperatura richiesta, e un termometro per controllare la temperatura.

Le provette con i raccolti in rack, reti per freccette o barattoli sono installate sulla polizia del termostato. Le tazze nel termostato sono capovolte. Quindi, ripetendo nel termostato, circolava liberamente e il riscaldamento era uguale, la polizia nel termostato soffiava con tagli e non travolgeva. Per non raffreddare la cultura, il termostato non la priva di acqua dolce.

L'assistente di laboratorio dei gozzi può registrare la temperatura nel termostato e migliorare la pulizia degli accessori e, in caso di malfunzionamento, chiamare il maestro.

Leggero I microbi più importanti (tutti gli agenti patogeni possono essere visti prima di loro) non sono necessari: vengono coltivati ​​in alberi scuri. Tuttavia, per la coltivazione della pigmentazione, poiché è più attiva su una luce rosa, la coltura dopo il termostato viene fatta vibrare per 2-3 giorni alla luce della stanza.

Rispetto! Il prossimo colpo unico di scambi diretti di Sony, che è dannoso per la cultura.

Contenuto di acqua. La vita dei microbi è impossibile senza vology: la vita della parola penetra nel clitina meno dell'aspetto rozchinennym. È necessario proteggere quando si coltiva su terreni aperti: versarli in una tazza e falciarli in provette più spesso di un giorno di semina. Quando si coltivano microbi particolarmente sensibili alla presenza di acqua, ad esempio i gonococchi, mettere un termostato in un recipiente pieno d'acqua.

Termini di coltivazione. La maggior parte dei microbi patogeni viene coltivata per 18-24 anni, ma osserva che cresce correttamente (fino a 4-6 giorni). Per risparmiare l'acqua al loro interno, i tamponi di cotone dovrebbero essere sostituiti con quelli umici sterili o dovrebbero essere applicati tamponi umici.

Rispetto! I tappi di gomma vengono sterilizzati in autoclave, bruciati su carta.

Aerazione. Per il consumo di microbi in un acido libero, possono essere suddivisi in aerobi e anaerobi. I gruppi offensivi richiederanno diverse menti di coltivazione.

La supplementazione di acido, necessaria per la coltivazione di aerobi e anaerobi facoltativi, si sviluppa con aerazione passiva e attiva.

Aerazione passiva - coltivazione ce su terreni sottili e rari in vasi, chiusi con tappi di cotone o garza di cotone o piastre Petri. Con una tale coltivazione, i microbi mantengono l'acido, ci sono differenze nel mezzo, che si trova nella nave sopra il centro e passa attraverso la crosta. Le colture aerate passivamente possono essere coltivate in superficie o su una palla sottile al centro, dove penetra l'aria acida.

L'aerazione attiva è stagnante con la coltivazione di microbi in glibin, se crescono nei grandi obsyagi del mezzo. Al fine di garantire una sufficiente acidità di tali culture, vengono collocate in uno speciale goydalka: un costante rimescolamento di culture per garantire la sicurezza delle ripetizioni. Quando si coltiva in obsyagi rіdini, che raggiungono decine e centinaia di litri, che vengono eseguiti in accessori, gli yak sono chiamati reattori o fermentatori, vengono nuovamente soffiati attraverso la cultura per l'aiuto di annessi speciali.

Coltivazione di anaerobi piegato, aerobico inferiore, capesante sono necessarie per consentire l'accesso all'aria libera. Per chi, è necessario ripetere il medium vivificante in modi diversi.

Coltivazione di actinomiceti, funghi, micoplasmi, forme L, spirochete e le più semplici. La coltivazione di questi microrganismi è molto simile alla coltivazione dei microbi. Per loro sono stati sviluppati mezzi di comunicazione speciali e regimi selezionati che soddisfano le loro esigenze.

Una coltura pura è chiamata raccolta di microbi della stessa specie su un mezzo vivente alcalino o raro.

Usiamo una serie di metodi per vedere la cultura pura a maggese in termini di potere del materiale, che viene coltivato, e meti dosledzhennya. Colture pure del suono dalle colonie isolate - la concentrazione di microbi sul mezzo alcalino. È importante notare che la maggior parte della colonia si sviluppa da una cellula microbica, quindi è una coltura pura di quel microrganismo.

Fasi del vedere la cultura pura:

1° giorno - rimozione delle colonie isolate. Far cadere il materiale finito con un anello, applicare con una pipetta o un bastoncino di vetro sulla superficie dell'agar nelle piastre Petri. Utilizzare una spatola per strofinare il materiale sulla superficie dell'anima; senza proplyuyuchi e senza capovolgere la spatola, spargere il seme sulla 2a e poi sulla 3a ciotola. Con una tale diffusione, la 1a tazza ha molto materiale e molti microbi, la 2a tazza in meno e la 3a tazza ancora meno.

È possibile rimuovere l'isolamento delle colonie con un sib loop. A tale scopo, il materiale viene emulsionato in brodo o cloruro di sodio isotonico.

2° giorno - i microbi crescono sulle tazze. Alla prima tazza, suona in modo più succinto: non puoi vedere la colonia isolata. Colonie isolate crescono sulla superficie dell'agar nella 2a e 3a piastra. Si muovono con occhio instancabile, per un aiuto in più, con un piccolo aumento del microscopio e nel caso del microscopio stereoscopico (divisione div. 31). Una colonia viene prelevata dal lato del fondo del piatto e trasferita su biselli di agar. Posivi da mettere al termostato.

Rispetto! È possibile peresivare colonie meno isolate.

3° giorno - coltivare la natura della crescita su agar inclinato. Rubando una macchia, farbuyut yogo i, dopo aver cambiato, che la cultura è pura, procedi a її vyvchennya. La cui visione di pura cultura giungerà al termine. Visto dal canto dzherel, quella cultura coltivata è chiamata ceppo.

Quando si vede un'emocoltura pura (emocoltura) davanti al mezzo raro: 10-15 ml di sangue prelevato sterile vengono inoculati in 100-150 ml del mezzo raro. Così timido per chi ha pochi microbi nel sangue. Spivvіdnoshenie krovі, shо sіvaєєєє, i zhivotnoe sredovischa 1:10 non vypadkovo - quindi raggiungi il sangue di rozvedennâ (sangue non miscelato zhubno іє іє su mikroorganіzmi). Colby dovrebbe essere posizionato al termostato. Attraverso il dobu (e dopo più di un'ora la coltura a maggese, come si vede) invece dei flaconi, far cadere i tendaggi sui piatti per isolare le colonie. Se necessario, ripetere l'impiccagione a intervalli di 2-3 giorni.

Quando vedi cultura pura dalla sezione, acque di lavaggio del canale di scolo e altri rodin, vengono centrifugati in avanti in vasche asettiche e seminano l'assedio. Più lontano, la visione della cultura pura vibra in modo straordinario.

Per vedere una cultura pura, i terreni selettivi sono ampiamente piantati.

Un certo numero di metodi per lo sviluppo di colture di vicoria pura hanno caratteristiche biologiche del microbo che si vedono. Ad esempio, vedendo batteri sporigeni, riscaldare a 80° per 10 minuti, guidando in forma vegetativa; in caso di vedere la tubercolosi buddnik, resistente agli acidi e ai prati, per l'aiuto di questi discorsi, il materiale viene ridotto sotto forma della flora di accompagnamento; per vedere pneumococco e bastoncini della peste, il materiale dovrebbe essere somministrato a più topi - in quell'organismo, che è altamente sensibile a queste persone, i microbi si moltiplicano più rapidamente di altri.

Nei robot scientificamente avanzati, soprattutto per gli studi genetici, è necessario prelevare colture da una cellula. Tale cultura è chiamata clone. Per її otrimannya, vengono spesso sbucciati con un micromanipolatore - un accessorio, con strumenti (aghi, pipette) di espansioni microscopiche. Per l'aiuto del trimach sotto il controllo di un microscopio, dovrebbero essere iniettati con il farmaco "gocciolina sospesa", prendere la clitina (una) e trasferirla nel mezzo vitale.

Vedere le culture

Morfologi Vivchennya, crolli, potere tintoriale del potere (div. Rodil 3), la natura degli zrutanni sul nucleo (potere culturale), enzimatico attivamente il basso dei mirob visibili, gli yogo taxi, il Tobto è il Tipo dell'elegante , , varietà. Si chiama identificazione. L'identificazione del microrganismo è importante anche nella diagnosi di infezioni, inserimento di dzherel e canali nei trasferimenti її e ai minimi risultati scientifici e pratici.

Autorità culturali

Diversi tipi di microrganismi crescono in modi diversi sui media. Tsі vіdminnosti serve le differenziazioni. Alcuni sono buoni da coltivare su mezzi semplici, altri sono forti e crescono solo su mezzi speciali. I microrganismi possono dare una crescita più leggera (pishne), pace o avari. Le culture possono essere bezbarvnimi, siruvatimi, siro-blakitnimi. Le colture di microrganismi, che compongono il pigmento, possono essere di colore diverso: bianco, giallo o dorato nello stafilococco, chervone - nel bastoncino miracoloso, blu-verde - nel bastoncino blu-verde, il pigmento è diverso nell'acqua, il serpentino non è solo.

Su schіlnyh Tra i microrganismi nel maggese, a seconda della quantità di materiale vegetale, sono approvate sia saccarosio ("prato"), sia colonie isolate. Le colture sono ruvide e basse, lacune e opache, con una superficie opaca, lucida, liscia, corta, secca, irregolare.

Le colonie possono essere grandi (4-5 mm di diametro e più grandi), medie (2-4 mm), piccole (1-2 mm) e nane (meno di 1 mm). Il fetore si differenzia per forma, marcisce sulla superficie del centro (opukli, piatto, a cupola, depresso, rotondo, a rosetta), per la forma dei bordi (uniforme, crespo, strappato).

Rara Il microrganismo medio può fare un calamure liscio, dare un assedio (granulare, simile a una sega, simile alla plastica) o uno sputo (inferiore, ruvido, rugoso).

Per esempio quando piantati con una puntura, i microbi diventano torbidi, quelli centrali diventano torbidi, quelli centrali crescono solo dopo la "puntura", bloccando l'apertura del divario.

I poteri culturali significano, sottolineando la natura della crescita della cultura, con un occhio semplice, per l'aiuto di una lente d'ingrandimento sotto un piccolo ingrandimento di un microscopio o di un microscopio stereoscopico corrosivo. La dimensione e la forma delle colonie, la forma dei bordi e la trasparenza si vedono nella luce che passa, guardando le coppe dal lato del fondo. Nella luce spezzata (dal lato del coperchio) si determina il carattere della superficie, il pelo. La consistenza è determinata dal punto del ciclo.

Potere morfologico

Lo studio della morfologia dei microbi può servire come loro differenziazione. La morfologia si osserva nelle preparazioni trattate. Ripristinare la forma e le dimensioni del clitina, la sua espansione nella preparazione, la presenza di spore, capsule, flagelli. Nelle preparazioni farbovanizzate, è necessario portare i microbi al farb (potere tintoriale) - è bene o male prendere il farb, poiché può essere portato allo zabarvlen differenziale (per un tale colore, è zabarvlyuєtsya per Gram, Tsil - Nielsen e іn. ). Vital (vivente) zabarvlennya ti consente di installare la frivolezza, di differenziare le cellule vive e morte, di seguire il loro podil. La suddivisione e la friabilità possono essere trattate in preparazioni autoctone (non contaminate) (div. sezione 3).

Attività enzimatica

L'attività enzimatica del microrganismo nel bagat è diversa. Può essere utilizzato come specie e tipo appartenente a un microbo e può essere utilizzato per designare la sua variante (la cosiddetta biovariante). Diamo un'occhiata al principale potere enzimatico di quell'appuntamento yoga yakіsne.

Scomposizione in carboidrati(attività saccarolitica), in modo che la capacità di decomporre l'anello e il ricco alcol atomico con l'acido disciolto e il gas acido, cresca nel mezzo di Gissa, yakі vendica quello che è l'altro carboidrato e indicatore. Sotto l'azione dell'acido, che viene soddisfatto quando si divide in carboidrati, l'indicatore cambia la contaminazione del mezzo. Ecco perché il centro è chiamato "riga di stringhe". I microbi, che non fermentano in carboidrati, crescono sul mezzo, senza cambiarlo. La presenza di gas è stabilita per la chiusura di bulbi in mezzo con agar, o per l'ammassamento di yoga nei "galleggianti" su mezzo raro. "Float" - un tubo di vetro con un vetro saldato, un animale in salita, in modo che prima della sterilizzazione mettano una provetta dal centro (Fig. 18).

Riso. 18. Attività tsukrolytic di Vivchennya di microrganismo. I - "fila di stringhe": a - mezzo centrale con carboidrati e indicatore di Andrede; b - simile al centro con l'indicatore BP: 1 - i microrganismi non fermentano in carboidrati; 2 - i microrganismi fermentano in carboidrati da soluzioni acide; 3 - i microrganismi fermentano in carboidrati con acido e gas disciolti; II - colonie di microrganismi che non si estendono (bezbarvnі) e stendono il lattosio

Inoltre, l'attività saccarolitica è mostrata sui mezzi di Endo, EMC, Ploskireva. I microrganismi, fermentando l'acido lattico (lattosio) all'acidità nei loro mezzi, rendono la colonia infetta - l'acido cambia il colore dell'indicatore. Le colonie di microbi che non fermentano il lattosio sono sterili (div. Fig. 18).

Il latte con la crescita di microbi, che fermenta il lattosio, viene ingerito.

Con la crescita del microrganismo che utvoryuyut amilasi, nel mezzo dell'amido, si decompone. Lo sanno, dopo aver aggiunto lo spratto di Lugol alla cultura, il colore del mezzo non cambia. L'amido non in decomposizione è dato dal cym rozchinom blue farbuvannya.

Potere proteolitico(A tale scopo, la capacità di dividere proteine, polipeptidi, ecc.) Cresce sul supporto con gelatina, latte, sirovatka, peptone. Quando cresce sul mezzo gelatinoso di microbi, che fermentano la gelatina, il mezzo cresce. Diversa è la natura della distribuzione, chiamata da diversi batteri (Fig. 19). I microbi che scompongono la caseina (proteine ​​​​del latte), richiedono la peptonizzazione del latte: sembra una euforbia lattiginosa. Quando si scindono peptoni, indolo, acqua circolatoria e ammoniaca. La luce viene installata per l'aiuto di carte indicatrici. La carta da filtro ultimamente trasuda rose canterine, pendenti, striate di femmine strette con una dozhina di 5-6 div, e dopo aver piantato la coltura sull'MPB, viene posizionato un tappo tra esso e il muro della provetta. Dopo l'incubazione al termostato, il risultato è garantito. Ammiac diventa blu sul papiro tornasole; quando vedi sirvodnya sulla paprika, trapelato il 20% di acetato di piombo e bicarbonato di sodio, il solfato di piombo viene sciolto - paprika nera; indolo viklikaє paprika nera, trapelata con acido ossalico (div. fig. 19).

Krіm zaznachenih middleware, zdatnіst іkroorganіzmіv razdavіvaty raznі zhіnі zhivnі substrati vyznachayut per l'aiuto di dischi di carta, infiltrazioni cantano reagenti (sistemi di indicatori di carta "SIB"). I dischi vengono abbassati vicino alla provetta con la coltura finale e dopo 3 anni di incubazione in termostato a 37°C, cambiano il colore dei dischi per giudicare la distribuzione di carboidrati, aminoacidi, proteine, ecc.

Il potere emolitico (sviluppo degli eritrociti) cresce nel mezzo del sangue. Alcuni dei centri diventano chiari da soli, ma negli stretti centri della colonia c'è una zona chiara (Fig. 20). Quando approvato dalla metaemoglobina, il centro è verde.

conservazione delle colture

Vidileni e vyvchenі kultury (shtami), scho per diventare prezioso per la scienza o virobnitstva, sono presi dai musei delle culture viventi. Il Sovereign Union Museum si trova presso il Sovereign National Institute of Standardization and Control of Medical Biological Preparations. LA Tarasevich (DIBK).

Zavdannya zberіgannya - pіdtremati zhittєzdatnіst microorganіzmіv è avanti їх іх мілівії. Per chi hai bisogno di rilassarti o aggiungere uno scambio di cellule microbiche.

Uno dei metodi più avanzati di conservazione delle colture è la liofilizzazione: l'essiccazione sotto vuoto da un mulino congelato consente l'istituzione di un campo di anabiosi. L'uscita viene eseguita su dispositivi speciali. Conservare le colture in fiale sigillate a una temperatura di 4 ° C, preferibilmente -30-70 ° C.

Reinvenzione delle colture essiccate. Riscaldare fortemente la punta dell'ampolla in una mezzaluna di una palnica e incollarla con un nuovo batuffolo di cotone, bagnarla leggermente con acqua fredda, in modo che si creino microfessure sulla piega, attraverso yakі povіtrya penetrare correttamente nel mezzo di l'ampolla. Con questo, passando attraverso i bordi screpolati delle fessure, verranno nuovamente sterilizzati.

* (Se c'è troppa acqua sul tampone, puoi berla nell'ampolla e distruggere la sterilità della coltura: si bagna attraverso le microfessure che si sono stabilite, quindi c'è il vuoto nell'ampolla.)

Rispetto! Non dimenticare che le fiale sigillate hanno il vuoto. Non appena lo strofini attraverso la grande apertura, la cultura che si trova nell'ampolla potrebbe diffondersi e uscirà.

Lasciandoti vedere nell'aria, con un paio di pinzette rompi e rimuovi la parte superiore dell'ampolla. Bruciare leggermente l'apertura e pastorizzare con una pipetta sterile, oppure aggiungere un brodo o un brodo isotonico nell'ampolla con una siringa. Mescolare le fiale insieme e seminare sul terreno. La crescita di nuove colture nelle prime colture può essere più comune.

La conservazione a lungo termine della coltura può essere effettuata anche con azoto raro (-196 ° C) con accessori speciali.

I metodi di conservazione non banale delle colture sono i seguenti: 1) subcoltivazione (reimpianto periodico su terreno fresco) ad intervalli per risiedere nel predominio del microrganismo, del mezzo e delle menti di coltivazione. Le colture intermedie sono prelevate a 4°; 2) risparmi sotto la palla di olії. La coltura viene coltivata in un supporto di agar alto 5-6 cm, versata con olio di vaselina sterile (palla di oliva di circa 2 cm) e conservata verticalmente in frigorifero. I termini della conservazione di diversi microrganismi in diversi, a quelli da provette appendono periodicamente la coltura, per verificarne la vita; 3) conservazione a -20-70 ° С; 4) raccolta da provette sigillate. Se necessario, il materiale viene prelevato e appeso su un centro fresco.

Controllare la nutrizione

1. Cosa dovrebbe essere incluso nella comprensione della "ricerca batteriologica"?

2. Che tipo di cultura può essere per un simile seguito?

3. Che cos'è una colonia batterica, una coltura, un ceppo, un clone?

4. Qual è la comprensione del "potere culturale dei microbi"?

gestore

1. Impara e descrivi lo spratto delle colonie. Riseminali per l'inclinazione dell'agar per settore.

2. Vivechit e descrivere la natura della crescita - coltura su agar inclinato. Considerare la purezza e la morfologia della coltura nella preparazione inoculata.

3. Trasferire la coltura dallo slant di agar al brodo e al mezzo diagnostico differenziale. Controllare e annotare nel protocollo la natura della crescita della cultura su questi mezzi e potere enzimatico.

Il brodo M'yasopeptonny e l'agar m'yasopeptonny sono i mezzi viventi più semplici aggiunti alla maggior parte dei batteri. Il materiale principale per la preparazione di questi e altri mezzi viventi è l'acqua di carne, che è il giallo della terra natale con una reazione acida. Acqua M'yasna per vendicare il linguaggio bianco (albumina), il linguaggio estrattivo e il sale attivo.

Acqua di carne e concentrazioni di brodo di carne e pepton (secondo GOST 10444-63)

M'yaso yaloviche o kіnské dopo la rimozione di spazzole, grasso e tendini vengono passati attraverso un tritacarne e la carne macinata viene versata con acqua fredda del rubinetto, versando 500 g di carne macinata in 1 litro d'acqua sulla pelle. Dopo aver mescolato la somma, la riscaldano fino al punto di ebollizione, quindi la riscaldano per 1,5 anni. Una piccola quantità di carne macinata sommata con acqua (fino a 5 l) può essere bollita sul fuoco caldo, mescolando spesso, in modo che le particelle di carne secche non brucino.

Una grande quantità è meglio che bollire in calderoni con una camicia a vapore. La prontezza dell'acqua della carne è dovuta al filtrarne una piccola quantità in una provetta attraverso un filtro di carta. Yakshcho filtrato prozory, l'acqua di carne è pronta. Se il filtrato esce kalamutny, il passo successivo è quello di doti, i moli non vedono il filtrato di prozory. Dopo la fine della cottura, la patria viene fatta bollire attraverso la tela, o garza doppia piegata, l'intera patria sik e otriman viene portata fuori dalla carne bollita, portata con acqua bollita al volume della pannocchia. Non è necessario aggiungere una grande quantità di acqua, perché, come risultato della bollitura della carne, l'acqua passerà molto succo dalla carne. Solo nel caso di una variante troppo tempestosa, quell'arco di ebollizione chiassosa, si ha una grande evaporazione del radino.

L'acqua della carne di Otriman viene versata in barattoli di vetro, quindi viene fatta bollire e sterilizzata in autoclave per 20 minuti a una temperatura normale di 120 °C. Dall'acqua della carne raccolta da un tale grado, se necessario, prepara il mezzo vitale necessario.

Per ridurre la concentrazione di brodo di peptone di carne (MPB), aggiungere 10 g di peptone e 5 g di cloruro di sodio a 1 litro di acqua di carne. Portare la reazione del mezzo a pH 7,0-7,2, far bollire, filtrare su filtro di carta, versare in provette pulite e chiudere con batuffoli di cotone, sterilizzare in autoclave per 20 minuti alla temperatura di 120 °C.

Brodo di allevamento di m'yasopeptonny

La preparazione dell'acqua di carne viene eseguita allo stesso modo, come per il brodo concentrato, e invece di 500 g di carne macinata, vengono presi 250 g di yogo per 1 litro d'acqua. È possibile diluire l'acqua di carne concentrata preparata in vdvіchі. Aggiungere 5 g di peptone, 2,5 g di cloruro di sodio a 1 litro di acqua di carne diluita, regolare il pH a 7,0-7,2 e lasciare sobbollire allo stesso modo, come quando si prepara un brodo concentrato di peptone di carne.

brodo di ribopeptone

Nelle fabbriche che producono pesce in scatola, l'acqua di carne per la preparazione di medium può essere conciata con acqua di pesce. L'acqua di Ribna dovrebbe essere preparata dal grande ribi sottile. Ideale per cієї incontrato lucioperca, merluzzo e luccio. Zvіlnenu sotto forma di spazzole e grasso, il pesce viene passato attraverso un tritacarne e versato con acqua di rubinetto fredda dal rosmarino 1 litro d'acqua per 500 g di pesce tritato. Tutte le ulteriori operazioni per la preparazione dell'acqua di pesce sono simili a quelle per la preparazione dell'acqua di carne.

L'acqua di Ribna viene vicorata per la preparazione del brodo di ribopeptone. Per 1 litro di acqua di pesce, aggiungere 10 g di peptone, 5 g di sale da cucina, neutralizzare a pH 7,0-7,2 e sterilizzare così com'è, come il brodo di carne e peptone.

Il versamento del brodo nelle provette (prima della sterilizzazione) viene effettuato attraverso un bicchiere di virva, all'estremità del quale viene applicato un tubo di gomma con punta e presa di Mora (Fig. 52). Arricciare la punta dello spratto quando lo si versa in una provetta, in modo che i bordi della provetta non siano bagnati di brodo, altrimenti il ​​tampone di cotone è asciutto fino al punto e può essere germinato da microrganismi.

Reazioni installate di medium vivificanti

Con i riscontri microbiologici, è necessario mantenere viva l'acidità e la potenza degli ambienti di vita. L'acidità del substrato vivente è attiva, come si supponeva, di grande importanza nei processi vitali dei microbi: ne aggiungono la crescita, il potere morfologico e fisiologico. Per la maggior parte dei batteri è necessario un mezzo con un pH di 7,2-7,4, per lieviti e una pletora - con un pH di 4,5-5,5.

Zhivnі sredovishcha, scho si è preparato a rivelare i poteri biochimici dei microbi, a causa della madre ottimale, suvoro assegnata a questa reazione microbica. Impostare il pH del mezzo preparato nel laboratorio microbiologico può essere sia con metodi elettrometrici che colorimetrici. Il pH viene determinato elettrometricamente con l'ausilio di un pHmetro da laboratorio (ad esempio LP-58 - Fig. 53) o ionomir (KFV-I1 - Fig. 54).

Per misurare il valore del pH del mezzo rivitalizzante aggiunto per un ulteriore ionomero, versare circa 40 ml del mezzo nel pallone, riempirlo con una cartuccia con un elemento cloro-argento e aggiungere un attacco elettrico. Le frecce del galvanometro si muovono e mostrano il valore del pH.

Quando si utilizza un pHmetro da laboratorio (LP-58), è più facile fermare l'elettrodo di vetro e calomelano. Una borsa di un elettrodo di vetro può essere anche pareti sottili - 0,03-0,05 mm, quindi quando si lavora con esso, è necessario prestare attenzione. Prima di concentrare il vetro, l'elettrodo va tenuto in acqua distillata per almeno 1-2 anni, e in caso di funzionamento frequente è necessario mantenerlo in acqua distillata, sostituendolo periodicamente con acqua dolce.

Prima di regolare il pH con un elettrodo di vetro, correggere la scala del pH del tampone. Rosmarino Il pH dell'intervallo tamponato può essere vicino al pH dell'intervallo specificato. Il compensatore di temperatura dell'attacco è impostato sulla temperatura del range del tampone e regola la parte di regolazione e potenziometrica dell'attacco dietro l'elemento normale. Quindi, dopo aver risciacquato l'elettrodo con acqua distillata e nave vimiryuvalny, saturarlo con il mezzo rimanente e moderare il pH del mezzo; impostando il compensatore di temperatura alla temperatura del fluido e premendo il pulsante di accensione dell'accessorio posto sul frontale doshtsi del pHmetro, segnare l'indicazione delle frecce del galvanometro sulla scala del pH. Le regole dettagliate per corystuvannya, nalashtuvannya e veglia sugli accessori sono descritte nelle istruzioni su come aggiungere agli accessori. Banalità dell'analisi 3-5 min. Riporta i risultati in modo accurato.

Con l'aiuto di un pHmetro e di ionomir, è anche possibile controllare manualmente il pH del mezzo preparato elettrometricamente. Quando si preparano substrati viventi per analisi batteriologiche, è necessario regolare il livello di pH del mezzo e portare la reazione al valore più alto, quindi il pratico metodo colorimetrico si rivelerà efficace.

La base del metodo colorimetrico si basa sul potere degli indicatori di modificare la loro concentrazione modificando la concentrazione di ioni H. Per un indicatore della pelle, il suo caratteristico intervallo di pH, nell'intervallo di qualsiasi cambiamento di colore. Secondo GOST 10444-63, per stabilire il pH dei mezzi viventi, è necessario aggiungere lo 0,04% di blu di bromotimolo. L'intervallo del blu di bromotimolo è 6,0-7,6. In ambienti acidi, le viti sono piene di zabarvlennya giallo, nelle pozzanghere - blu. A pH 7,1 dà un'infestazione verde-verde chiaro.

Ai fini della reazione del mezzo o dei prodotti in scatola, dopo lo sviluppo di microrganismi in essi, viene aggiunto lo 0,04% dei composti di bromocresolpurpur. Bromocresolpurpur modifica la contaminazione nell'intervallo di pH di 5,2-6,3. In ambienti acidi, i vini sono di colore giallo pallido, in quelli neutri - rosso-viola e a pH 6,3 dà il verde con una sfumatura viola di zabarvlennia.

Gli indicatori sono preparati nel prossimo rango: 0,1 g di un indicatore vitale, chiamato su analitico teres, viene strofinato sul mozzo (agata bagzhano) da 1/20 n. Soda caustica. Per erogare 0,1 g di bromotimolo blackite, assumere 3,2 ml di 1/20 n. la differenza di NaOH; per dosare 0,1 g bromcresolpurpur - 3,7 ml 1/20 n. apri il prato. Aggiungere 250 ml di acqua distillata alla soluzione di pozzanghera finita e aggiungere lo 0,04% della soluzione dell'indicatore. I preparativi per lo sviluppo dell'indicatore dovrebbero essere presi al freddo dai vasi di vetro con un tappo di sughero.

Prima della sterilizzazione, il pH del mezzo deve essere regolato su un valore uguale (7,0-7,2). Per questo, una grande fiaschetta (2-3 l) viene versata in 1,5 l del mezzo vivente. Dalle burette in esso, iniziare a versare goccia a goccia il 10% della soluzione di bicarbonato di sodio o una soluzione debole al prato (ad esempio, 0,1 N. della soluzione di idrossido di sodio), sempre pereveryayuschie reazione del mezzo secondo il indicatore (in questo caso, secondo il blu di bromotimolo). A tale scopo, su un gres porcellanato bianco (è possibile fare una cachelna), applicare uno spratto di granelli di mezzo, a cui aggiungere un granello di indicatore. Se il blu di bromotimolo, quando gli dai uno zhovte zabarvlennya, allora l'infusione di soda o il prato deve essere continuato doti, i moli del centro nelle gocce dell'indicatore non si impantanano nei colori verde chiaro. Se appare un tono verde-blu nelle goccioline del mezzo rimanente quando si aggiunge l'indicatore, allora la colorazione della pozza, una volta titolata, affluisce in eccesso e nel pallone con il mezzo, dovrebbe essere aggiunta più fresca, non ancora titolata, la vita -dare il mezzo e la reazione sarà riscoperta.

Dimostrandosi perfettamente nella pratica con l'aiuto di un comparatore e della scala standard Michaelis. Questo metodo dovrebbe essere accurato: la reazione del mezzo varia fino a 0,1 unità di pH. Per determinare il pH del mezzo per l'accessorio aggiuntivo di Michaelis, è necessario scavalcare la reazione del mezzo per l'ausiliario di cartina di tornasole, così da conoscere, come tale indicatore, un tale numero di fiale dall'accessorio di Michaelis dovrebbe essere accelerato. Poiché per la maggior parte dei mezzi viventi è necessaria una reazione neutra e a basso lume (pH 7,0-7,2), è necessario prendere l'indicatore metanitrofenolo e un numero di fiale con un pH di 6,8-8,2. Durante la sterilizzazione, il pH del substrato dovrebbe diminuire di 0,2 unità, quindi per la creazione di menti ottimali per la crescita di microrganismi prima della sterilizzazione, il mezzo, che viene preparato, è colpa della madre pH 7,2-7,4.

Dopo aver ricontrollato la reazione del mezzo secondo il tornasole e aver scelto un indicatore, prendere un comparatore, installare fiale standard con il pH corretto in una nuova provetta (Fig. 55). In un'altra provetta della prima fila (n. 2), al comparatore si versano 2 ml dell'ultimo mezzo rivitalizzante; qui aggiungere 4 ml di acqua distillata e 1 ml di una soluzione allo 0,3% dell'indicatore selezionato (denominato, come già accennato, metanitrofenolo). Alle due provette estreme della prima fila n. 1 e 3 vengono versati 2 ml del mezzo rivitalizzante e 5 ml di acqua distillata. Al tubo centrale di un'altra fila n. 5, posizionare solo 7 ml di acqua distillata. Alle due prese estreme dell'altra fila del comparatore n. 4 e 6, inserire fiale con una gamma standard di indicatori di pH, nell'intervallo tra il quale viene ripristinata la reazione del mezzo.

Guardando le provette di luce attraverso l'apertura inferiore nei comparatori su una piastra bianca opaca, esaminando lo zabarvlennya dosledzhuvannya rodini dallo zabarvlennyam dell'indicatore. Se la contaminazione del campione con il mezzo viene prelevata dalla contaminazione dell'indicatore in una fiala, il valore pH del mezzo è uguale al valore pH di questa fiala standard. Se il colore del mezzo finito (in un altro campione) appare più chiaro, più basso nell'ampolla standard, la provetta con il mezzo viene aggiunta goccia a goccia con il 10% della quantità di bicarbonato di sodio o 0,1 n. rozchin їdkogo natra, microburette vikoristuuuuchi per questo. L'infusione di variazioni, che neutralizzano, goccia a goccia, fino a quando il colore del campione non corrisponde al colore di una fiala. Per una certa quantità di millilitri di soda abolugu, rigata per neutralizzare 2 ml del mezzo (posto nella provetta n. 2), non importa, sono necessari alcuni millilitri di una quantità neutralizzante per impostare il livello di pH nella tutta la preparazione obbligatoria di un organismo vivente.

In ambienti altamente acidi, il valore del pH è assegnato all'indicatore aggiuntivo para-nitrofenolo. I rozchini іndikatorіv preparano il grado in arrivo.

1. Si mescolano 0,3 g di metanitrofenolo in 100 ml di acqua distillata (valore del pH compreso tra 6,8 e 8,4).

2. 0,1 g di paranitrofenolo vengono sciolti in 100 ml di acqua distillata (valore del pH compreso tra 5,4 e 7,0).

È inoltre possibile impostare un valore di pH approssimativo del mezzo con l'aiuto di un indicatore universale. Per questo, versare 2-3 ml dell'ultimo mezzo in una tazza di porcellana e aggiungere 2-3 gocce di un indicatore universale. Dopo aver mescolato la somma con un bastoncino di vetro, fumo il colore dello sciame di sciami sulla scala dei colori della carta. Il pH del mezzo finito sarà lo stesso indicato nella femmina di allevamento uguale della scala dei colori. Il grado di precisione dell'assegnazione del pH da parte di un indicatore universale è vicino a 0,5.

Preparazione dell'agar peptone di carne (MPA)

Agar (in malese "gelatina") è un linguaggio organico pieghevole, che è tratto dalle alghe marine. Dietro il magazzino chimico dei vini c'è una somma di carboidrati, che si possono vedere fino ai polisaccaridi - simili al galattosio - e che possono desiderare di costruire. Le aggiunte all'agar medio raro danno uno spessore tale che la fusione è superiore alla temperatura di ebollizione. L'agar fonde in acqua a circa 80-86 °C, più duro a 36-40 °C. Zavdyaki tsoma su terreni di agar può essere coltivato microbi per qualsiasi temperatura che consenta loro di vivere.

L'agar di peptone di carne è preparato con brodo concentrato di peptone di carne. In una grande beuta Erlenmeyerivsk con uno strato refrattario, la capacità è fino a 2 litri, sigillata con un tappo di cotone, versare concentrazioni di brodo m'yasopeptonny, aggiungere dal 2 al 4% (varietà di deposito) di agar tritato finemente, senza curvare con un tappo, metti un tappo debole.

Il brodo di pepton di carne deve essere assunto con una reazione media di 7,4, in modo che durante la sterilizzazione il pH diminuisca di 0,2. La reazione dell'agar m'yasopeptone può essere installata se appare al di fuori del fuso. Se l'agar è di buona viscosità e non precipita, dopo aver impostato il pH, far bollire per 12-15 minuti, filtrare con un batuffolo di cotone e versare nel pallone o nelle provette (deposito per il consumo), sterilizzare in autoclave per 20 min a 120 °C.

Se l'agar non è una purificazione sufficiente, puoi assediare. In ogni caso, prima della sterilizzazione, è opportuno chiarificare l'agar m'yasopeptone. Per questo, finché non sarà sciolto e raffreddato a 50°C, peptone di carne agar, aggiungete l'albume, mescolate con 30 ml di acqua e sbattete fino a che non diventi uno spillo. Per 1 litro di medium, prendi le proteine ​​di un uovo di gallina. L'agar deve essere preso sul serio con l'introduzione di proteine ​​e messo in autoclave per 10 minuti a 120°C. Sotto l'ora di ebollizione, i bianchi bruciano e soffocano tutte le parti importanti. Dopo la sterilizzazione in autoclave, l'agar viene filtrato attraverso un filtro di garza di cotone. Per chi, prendere un bicchiere di virva di grande diametro, passarci sopra una garza e mettere sull'animale un sottile batuffolo di cotone idrofilo. Filtrare velocemente agar bollente secondo necessità e filtrare fino a catturarlo versandolo in provette da 5-10 ml. La sterilizzazione del mezzo viene eseguita in un'autoclave, come indicato sopra.

Dopo aver sterilizzato le provette con la parte centrale, che dovrebbe essere sostituita da 5 ml di agar, mettila nel campo malato in modo che l'agar non sporga dal tappo. Dopo essere stati catturati, ottengono agar "obliquo" (o smussato). Le provette con 10 ml di agar vengono poste su un treppiede e lasciate catturare, rimuovendo il centro, versare su un "tavolo alto". L'agar inclinato non è raccomandato per più di 4-7 giorni, i cocci di vino pendono.

L'agar di pepton di carne è il principale mezzo vitale, che viene vicorato durante le analisi batteriologiche nei laboratori microbiologici. Puoi batterlo come un "semplice agar", in questo modo: dopo aver aggiunto i carboidrati, creando un complesso mezzo diagnostico differenziale.

Vivi nel mezzo in microbiologia, chiamano i supporti, che sono diversi dal lato pieghevole di un semplice magazzino, come zastosovuyutsya per la riproduzione di batteri e altri microrganismi nelle menti industriali di laboratorio.

Pronto per la vita nel mezzo dai prodotti del numero di crescenti avventure della creatura. Grande significato nel mezzo vitale dei fattori di crescita che catalizzano i processi metabolici delle cellule microbiche (vitamine del gruppo B, acido nicotinico, ecc.).

Pezzo multimediale preparare per cantare ricette da vari infusi o dal viaggio di salamoia e aboroslyne con l'aggiunta di sali inorganici, carboidrati e discorsi azotati.

Nella pratica batteriologica il più delle volte vicari sono i mezzi vivificanti secchi, ottenuti sulla base dell'attuale biotecnologia. Для їх приготування використовують економічно рентабельну нехарчову сировину: що втратили термін придатності кровозамінники (гідролізин-кислотний гідролізат крові тварин, амінопептид - ферментативний гідролізат крові; продукти біотехнології (кормові дріжджі, кормовий лізин, виноградне борошно, білколізин). часу, зручні при транспортуванні та мають magazzino standard visibile.

Per coerenza i centri vitali possono essere rari, napіrіdkie, schіlniy. Altri mezzi vengono preparati con un percorso per aggiungere l'1,5-2% di agar a un mezzo raro, ad esempio - 0,3-0,7% di agar. L'agar è un prodotto della lavorazione di un tipo speciale di alghe, si scioglie a una temperatura di 80-86 ° C, è più duro a una temperatura prossima ai 40 ° C e allo stato congelato ha uno spessore medio. In alcuni casi, per l'estrazione del mezzo vivificante sclerale, viene utilizzata la gelatina (10-15%). Un certo numero di mezzi viventi naturali (siero di sangue bruciato, albume d'uovo bruciato) sono capesante.

Ai fini del riconoscimento le medie sono suddivise in principale, selettiva e differenziale-diagnostica.

Fino a quelli principali si possono vedere quelli centrali, che zastosovuetsya per la crescita di batteri ricchi. Questi sono idrolizzati triptici di carne, prodotti ittici, creature del sangue o caseina, da cui preparano un mezzo raro: un brodo vivace e un agar vivace. Tali mezzi sono la base per la preparazione di mezzi grassi piegati, sanguinanti e sanguinolenti che soddisfano le esigenze alimentari dei batteri patogeni.

I medium elettivi donatori di vita sono riconosciuti per la visione vibrante e l'accumulo di microrganismi di un tipo di canto (o di un gruppo di canto) dai materiali, che vendicheranno una diversa microflora di terze parti. Quando gli organismi viventi selettivi sono combinati, emergono dalle caratteristiche biologiche, che sono simili ai dati dei microrganismi dal maggior numero di altri. Ad esempio, la crescita vibratoria di staphylococcus aureus è associata a una maggiore concentrazione di cloruro di sodio, vibrio cholerae - nel mezzo della pozzanghera in modo sottile.

I mezzi vivificanti diagnostici differenziali sono efficaci per la demarcazione di quattro specie (o gruppi) di microrganismi. Il principio di incoraggiamento di questi mezzi si basa sul fatto che diversi batteri possono essere distinti tra loro per attività biochimica dovuta a un insieme diseguale di enzimi.

Un gruppo speciale è composto da mezzi vivificanti sintetici e non sintetici. Il magazzino dei mezzi sintetici comprende un discorso chimicamente puro: aminoacidi, sali minerali, carboidrati, vitamine. Nel mezzo sintetico, includi anche peptone, estratto di lievito e altri discorsi viventi. Questi intermedi sono più spesso utilizzati da robot scientificamente avanzati e nell'industria microbiologica con la selezione di antibiotici, vaccini e altri preparati.

Nel resto del mondo, con il metodo di salvataggio dei morti, l'identificazione accelerata di alcuni microrganismi (enterobatteri, stafilococco, streptococco, ecc.) sarà chiamata sistema di microtest (MTS). La puzza è costituita da piastre di polistirene con fori, in cui sono collocati mezzi diagnostici differenziali sterili. La sterilizzazione di MTS viene effettuata mediante test UV. I sistemi di microtest sono particolarmente efficaci in caso di massicci studi batteriologici in laboratori pratici.

Wimogi al centro vivente

Che sia un mezzo vitale, può essere rassicurato avanzando vimog: vendicare tutto ciò che è necessario per la riproduzione del microrganismo della parola in una forma facile da conquistare; le madri hanno contenuto d'acqua, viscosità e pH ottimali, ma sono isotoniche e possono essere trasparenti. Il mezzo vitale per la pelle viene sterilizzato in modo cantato in modo maggese nel magazzino.



Quando si preparano mezzi vivificanti, è necessario proteggere il bisogno di microrganismi, che vengono coltivati, in vari elementi vitali. Іsnuyut diverse classificazioni dei mezzi viventi.

Classificazione dei mezzi viventi dietro il magazzino:

1. Perdona il mezzo(MPB, MPA, gelatina, acqua peptonata). Il brodo di carne e peptoni (MPB) è la base proteica di tutti i mezzi.

Іsnuє kіlka modi per preparare MSB:

a) su acqua carnosa dall'aggiunta di peptone finito;

b) sui digeriti dei prodotti dell'idrolisi dello sciroppo libero con enzimi aggiuntivi.

M'yaso-peptonny agar (MPA) otrimuyut un modo per aggiungere agar-agar (1,5-3%) a MPB. Ad esempio, le divisioni dell'MPA lungo la diagonale delle provette e delle fiale sono le stesse degli smussi dell'agar. Come la parte centrale, il campione è alto in verticale 5-7 cm, con supporto di agar. MPA, catturato in piastre Petri come shtastshki - parti di piastre di agar. Come quella centrale, c'è una pallina verticale alta 2-3 cm e una pallina diagonale della stessa dimensione, il prezzo dell'agar agar.

2. Centro pieghevole preparato sulla base di semplici additivi per cantare (carboidrati, sangue, zhovch, uova, sirovatka, latte, sale, fattori di crescita anche)

Classificazione dei mezzi vivificanti per i componenti esterni:

1. Centri vitali naturali- È un prodotto naturale di una creatura o di una pianta in crescita.

Posso buti:

Roslinnі (prodotti esterni - semi di soia, piselli, patate, carote).

Creature (prodotti esterni - carne, pesce, uova, latte, tessuti animali, jovch, siero di sangue).

Zmishani (MPA, al centro di Levenshtein - Jensen toshcho).

2. Pezzo multimediale portare via prodotti naturali trasformati (acqua di carne, digerito), discorso, otrimanі z tsikh produktіv (estratti di peptone, lievito e mais) e vari additivi. Il gruppo di medium più importante e più vario dietro il magazzino è il più stagnante. Sono preparati per cantare ricette da vari infusi di chi nel numero selvaggio della pianta, con l'aggiunta di sali inorganici, carboidrati e discorsi azotati.

3. mezzi sintetici(nel magazzino chimico di casa) sono formati da stock chimicamente puri alle giuste concentrazioni (con l'aggiunta di carboidrati, sali, aminoacidi, vitamine, ecc.). Sulla base di questi mezzi, aggiungendovi dei mezzi naturali oa pezzi, acquisiscono dei mezzi sintetici.

Classificazione dei mezzi viventi per coerenza: mezzo buvayut rara(media senza agar), come(Con agar fino all'1%), squisito(Agarovі - 1,5-2,5%). I mezzi rari sono più spesso utilizzati per la coltivazione delle caratteristiche fisiologiche e biochimiche del microrganismo, per l'accumulo di biomassa e prodotti di scambio. Napіvridkі seredovishcha sing vicorist іz zberіgannya cultures, shіlnі — vіdіlennya mikroorganіzmіv, vychennya morphologiії colіnіy, dіgnostіchnyh іlіy, kolіkіsny іnіku, vznаchennya antagonіstіchnyh vіlіvnosti іnshih.

Classificazione dei mezzi viventi ai fini del riconoscimento: universale (diffuso) e speciale.

Medium universali (di base). I mezzi vicorosi sono usati per coltivare più microrganismi nevibagly, o come base per preparare mezzi speciali, aggiungendovi sangue, zukor, latte, latticello e altri ingredienti necessari per la riproduzione di quel microrganismo. Ai gruppi tsієї si trovano: MPB - brodo di m'yaso-pepton, MPA - agar m'yaso-pepton, MPZH - gelatina di m'yaso-pepton sottilmente.

Mezzi speciali. Nominato vidilennya e coltivazione selettiva di specie cantanti di microrganismi, yakі cresce su mezzi semplici.

Esistono tali tipi di mezzi speciali: mezzi di arricchimento, mezzi elettivi, diagnostici differenziali, conservativi e di accumulo.

Ricchezza media. Un sacco di microrganismi non crescono su mezzi naturali, per aumentare il valore vivente del mezzo, viene aggiunto ad esso in carboidrati (brodo di saccarosio o agar) o proteine ​​(agar e brodo serovatkovy, agar sangue e brodo). L'agar sangue o il brodo sanguigno viene prelevato con un percorso per aggiungere il 5-10% di sangue defibrinato sterile di pecora, coniglio, cavallo, essere umano al mezzo vitale. Il vicario medio viene utilizzato per l'osservazione di streptococchi, pneumococchi e altri batteri, nonché per lo sviluppo dell'attività emolitica. Il brodo di Sirovatkovy o l'agar grigiastro sono presi tra l'altro per aggiungere a semplici mezzi il 15-20% di Kіnskoy o bichachoї syrovatka.

2. Intermedi elettivi (selettivi). Questi mezzi sono riconosciuti per la visione vibrante e l'accumulo di microrganismi dello stesso tipo dal materiale, che serve a vendicare l'aspetto dei microbi. Inserendo su di essi il materiale per vendicare la somma di diversi microrganismi, mostreremo la crescita di quella specie, per la quale un determinato terreno sarà selettivo. La vivacità del mezzo è raggiunta dal percorso della creazione di menti ottimali per la coltivazione dei microbi cantanti (pH, Eh, concentrazione salina, conservazione dei discorsi viventi), tobto. selezione positiva. Abo modo di aggiungere al centro dei discorsi, che ignorando altri microrganismi (zhovch, alte concentrazioni di NaCl, antibiotici, ecc.), Tobto. selezione negativa. Al gruppo tsієї di mentire:

Selenite centrale- є la migliore via di mezzo per i microbi della salmonella e della dissenteria a Sonne. Il selenio di sodio, che si trova nel mezzo, stimola la crescita di questi batteri e sopprime la crescita della flora che li accompagna.

Agar bismuto-solfito vendicare il sale nel fango, il verde diamante. La salmonella cresce al centro del terreno che sembra colonie di colore nero. Altrimenti, non somministrare batteri sulla crescita centrale.

Zhovtkovo-agar salato (JSA) la via di mezzo per l'osservazione degli stafilococchi è fino al 10% di cloruro di sodio, che tiene conto del maggior numero di batteri contenuti nel materiale. Inoltre, il mezzo è anche diagnostico differenziale, poiché la presenza del tuorlo d'uovo consente di rilevare l'enzima lecitinasi (lecitovitelasi), che uccide gli stafilococchi patogeni. La lecitinasi decompone la lecitina in fosforcolina e acidi grassi dell'acqua non reattivi, motivo per cui la parte centrale delle colonie positive alla lecitinasi positiva alla calamità appare come una zona opalescente sotto l'aspetto di una "vena radio".

brodo di manzo selettivo per la salmonella, alla riproduzione di tali stimolanti viene aggiunto il 10% di zhovch, che favorisce immediatamente la crescita dei microrganismi di accompagnamento.

agar di pozzanghera o acqua peptone pozzanghera selettivo per il colera vibrio, la reazione in pozzanghera del mezzo (pH 9,0) non modifica la crescita del colera vibrio, ma la crescita galmui di altri microrganismi. 3-5 deb. F

3. Mezzi diagnostici differenziali. I mezzi diagnostici differenziali dovrebbero essere utilizzati per la differenziazione di un tipo di microrganismo con un diverso carattere della loro attività enzimatica. Il magazzino di questi mezzi dovrebbe essere selezionato con un tale rozrachunkom, in modo da rivelare chiaramente il predominio più caratteristico del tipo di microrganismo che canta, delineando le peculiarità del suo scambio di parole.

Nel mezzo della manifestazione di microbi proteolitici ed emolitici zdatnosti, vendetta nel tuo magazzino di discorso proteico: sangue, latte, gelatina sottile. I mezzi più ampi sono la gelatina di carne-peptone (MPZ), che è stata bruciata, il latte e l'agar sangue (KA).

I mezzi per lo sviluppo dei poteri glicolici includono tre componenti principali: una base vivificante (brodo, agar), un substrato (monota di disaccaride, alcol ricco) e un indicatore per la manifestazione di determinati enzimi. Sciacquare enzimaticamente i substrati per produrre un valore di pH che modifichi la concentrazione del mezzo. La più ampia gamma di colori del mezzo con vari carboidrati (ad esempio, dal blu di bromtimolo, indicatore BP). Più ampio è anche il centro di Giss, nel quale ne tutelano la diversità e la capacità di fermentare diversi carboidrati con soluzioni acide, acide e gassose.

Per la differenziazione degli enterobatteri, saturare l'acqua peptonata con una serie di vari carboidrati, l'indicatore di Andrede e i galleggianti, che facilitano il rilevamento della gassificazione e aiutano a determinare visivamente il cambiamento del pH, che è caratteristico di vari microrganismi. Zokrema, scomponendosi nella parte aspra, arrossa il mezzo con il reagente di Andride, o pozhovtinnya con un mezzo vicario con blu di bromotimolo, proprio come quando in scatola con l'indicatore di Andrede e bromtimolo blu, non cambia il colore del mezzo. Ad esempio, l'osservazione di batteri patogeni dall'intestino infetta il mezzo, il che consente la differenziazione dei microrganismi patogeni dagli abitanti post-intestinali - microrganismi che decompongono il lattosio.

Tale mezzo è il mezzo di Endo. I componenti principali del mezzo Endo sono MPA, lattosio e fucsina basica, solfito di sodio. Nel mezzo del luogo vivificante, il centro è stato trasformato in un colore chiaro dell'erisipela. Durante la fermentazione del lattosio, l'acetaldeide viene sciolta, che reagisce con il solfito i, che vibra con il coma, la fucsina trasforma le colonie in un colore rosso brillante. Per questo il bastoncino intestinale, poiché fermenta il lattosio, quando cresce su questo terreno forma colonie rosse con riflessi metallici, e salmonella e shigel senza botte, per chi non puzza, non fermenta il lattosio.

4. Il mezzo dell'accumulazione, in alcuni di essi c'è un aumento del numero di singole specie di microrganismi.

5. Mezzi di conservazione (di trasporto). Nominato per la conservazione del microrganismo durante l'ora di trasporto successiva al mese di consegna. Questi mezzi dovrebbero prendersi cura degli additivi, che impediscono la riproduzione e la morte dei microbi, salvando le loro vite. Somma di glicerina (mezzo di Tiga), somma tampone fosfato e di Kari-Bleyr, di Amies (con vugillia attivata e senza vugillia attivata), Stewart e in.

Sterilizzazione di mezzi vivificanti.

Tutti i medium vivificanti vengono versati indipendentemente dal loro segno in piatti puliti e sterilizzati. La maggior parte dei mezzi viene sterilizzata in autoclave, ma in condizioni diverse, lasciata a maggese nel proprio magazzino.

1. I terreni sintetici e tutti i terreni agar, che non devono essere conservati nel proprio magazzino di proteine ​​e carboidrati nativi, vengono sterilizzati per 15-20 minuti in autoclave ad una temperatura di 115-120°C e una pressione di 1-1,5 atmosfere.

2. Seredovishcha con carboidrati e latte (fino al livello di lattosio), la gelatina viva viene sterilizzata con vapore diretto a una temperatura di 100 ° C frazionata o in un'autoclave a 112 ° C e con una pressione fino a 1 atmosfera.

3. Seredovishcha, nel cui magazzino entra nella lingua bianca (siero sanguigno, patria ascitica), fluttua con tindalizzazione o filtrazione.

4. Per la sterilizzazione dei mezzi vivificanti, che sono conservati nel proprio magazzino, le proteine ​​native sono polimerizzate mediante filtrazione attraverso i filtri a membrana Seitz.

Per controllare la sterilità del mezzo dopo la sterilizzazione, posizionare un termostato a 37°C per 3-5 dB. Alcune delle parti intermedie dei colpevoli vengono lasciate aperte e in superficie nei compagni dei vivi degli innocenti ci sono segni di crescita. Per il controllo della sterilità, viene determinato il controllo chimico del mezzo preparato, che influisce sul fatto che il pH, la quantità di azoto totale e amminico e i cloruri sono determinati nelle decalcomanie della serie cutanea.

Іsnuє anche il controllo biologico dei media. In questo caso, uno spratto di germogli del centro viene piantato con una coltura di laboratorio di quel microbo, per il quale viene preparato il centro, e viene coltivato il carattere della crescita dello yogo. Solo dopo, poiché i medi hanno mostrato il controllo, possono essere vittoriosi per le confessioni.

Per il riconoscimento degli alloggi, quelli intermedi sono suddivisi in queste categorie principali.

universale- Medio, su cui una buona crescita è ricca di specie di batteri patogeni e non patogeni. Davanti a loro puoi vedere: brodo di carne e peptoni (MPB = acqua di carne + 1% peptone + 0,5% NaCl), agar carne e peptoni (MPA = MPB + 2-3% agar).

Differenziale-diagnostico- mezzi, che consentono di trattare una specie di batteri con altri tipi di attività enzimatica o manifestazioni culturali. Davanti a loro si può vedere il centro di Endo, Levina, Ploskirev, Gissa e molti altri.

selettivo(sinonimi: selettivo, selettivo, zbagachuvalnі) - middleware, che vendica il linguaggio, che è vicario dei microrganismi della prima specie e non prende o causa un cambiamento nella crescita di altri microrganismi. I mezzi selettivi consentono la selezione diretta dei batteri dal materiale studiato. Tra questi ci sono Muller, Selenitov, Rapoport, acqua peptonata all'1% e altri.

Differenziale selettivo- i medi, che acquisiranno il potere di diagnostici differenziali e medi selettivi. La puzza vikoristovuyutsya, zokrema, per l'identificazione precoce di quell'identificazione di batteri, che può essere vista in un gran numero di specie ampiamente ampliate di enterobatteri e pseudomonadi (il centro di Syvolodsky).

Speciale- Terreni, appositamente preparati per la crescita di batteri silenziosi, in modo che non crescano, altrimenti è brutto crescere su terreni universali. Davanti a loro, si può vedere il centro di McCoy-Chapin (per la prevenzione della crescita della tularemia), il sangue dell'MPA (per la prevenzione della crescita di streptococchi patogeni), il centro di Levenshtein-Jensen (per l'osservazione della tubercolosi della tubercolosi) e in.

Sintetico- Al centro di un gustoso magazzino chimico, che è una fonte di sali inorganici con l'aggiunta di campi chimici, gli yak fungono da dzherel di carbone o azoto. Il calcio di un tale mezzo sintetico è il mezzo minimo M-9, in cui l'energia e il carbonio sono il glucosio e l'azoto è NH4C1. I mezzi sintetici possono essere più pieghevoli con vari aminoacidi, basi e vitamine incluse.

Nap_sintetico- mezzi sintetici, ai quali se ne può aggiungere uno, sia esso un prodotto naturale, ad esempio siero del sangue. Esistono molte opzioni diverse per i mezzi viventi, progettate per soddisfare le esigenze di diversi tipi di batteri e scopi diagnostici.

Motore elettrico asincrono A4 per l'azionamento di meccanismi che non influiscono sul controllo della frequenza dell'avvolgimento (ventilatori, aspiratori, pompe). Puoi scoprire le caratteristiche dei motori della serie A4 e le loro caratteristiche su