Za zložljive življenjske medije za polaganje bakterij. Poglejte žive sredine. Uporabite diferencialno-diagnostične medije
Mikrobiološke raziskave - opazovanje čistih kultur mikroorganizmov, gojenje in gojenje njihove prevlade. Kulture imenujemo čiste, če so mikroorganizmi iste vrste. Smrad je potreben pri diagnostiki nalezljivih bolezni, prepoznavanju vrst in tipične pripadnosti mikrobov, pri naslednjih robotih, izločanju produktov življenja mikrobov (toksini, antibiotiki, cepiva itd.).
Za gojenje mikroorganizma (gojenje v kosih umih in vitro) so potrebni posebni substrati - življenjskega medija. Na sredinah mikroorganizma se izvajajo vsi življenjski procesi (živijo, odmrejo, tanko se razmnožujejo), zato jih imenujemo tudi sredice za gojenje.
Živi na sredini
Življenjska doba gojišča je osnova mikrobiološkega dela, ki pogosto kaže na rezultate vseh raziskav. Srednji del krivde je ustvariti optimalno (najboljše) pranje za življenje mikrobov.
Vimogi do sredine
Srednji so odgovorni za takšna dejanja:
1) biti živ, da lahko zlahka osvojiti osebi odvzameš vse govore, potrebno zadovoljevanje potreb po hrani in energiji. So vir organogenov in mineralnih (anorganskih) govorov, vključno z mikroelementi. Mineralni govor ni vključen le v strukturo klitina in aktivira encime, ampak določa tudi fizikalno in kemijsko moč medija (osmotski tlak, pH in in.). Pri gojenju nizkih mikroorganizmov v sredini dodajte rastne faktorje - vitamine, aktivne aminokisline, kot je klitin, ki ga ni mogoče sintetizirati;
Spoštovanje! Mikroorganizmi, tako kot vsa živa bitja, potrebujejo veliko vode.
2) matere optimalno koncentracijo vodnih ionov - pH, tako da le z optimalno reakcijo sredine, ki prispeva k prodiranju tunike, lahko mikroorganizmi osvojijo vitalnost govora.
Za veliko število patogenih bakterij je optimalen medij s šibkim lumenom (pH 7,2-7,4). Vignatok postane vibrio kolere - njegov optimum se nahaja v območju luž (pH 8,5-9,0) in vibrator tuberkuloze, ki zahteva rahlo kislo reakcijo (pH 6,2-6,8).
Sob ura rasti mikroorganizma v kislih ali lužnih produktih njihovega življenja ni spremenila pH, medij je odgovoren za pufriranje, tako da se lahko maščuje govor, tako da se produkti nevtralizirajo; menjava;
3) biti izotonični za mikrobne celice; tako je osmotski oprijem sredine lahko enak kot sredina celic. Za veliko število mikroorganizmov je optimalen srednji medij, ki vsebuje 0,5 % razlike do natrijevega klorida;
4) biti sterilen, drobci mikrobov tretjih oseb spremenijo rast obstoječega mikroba, kar pomeni njegovo moč in spreminja moč medija (skladišče, pH itd.);
5) glavna vmesna programska oprema zaradi butivologije in optimalne konsistence za mikroorganizme;
6) mati pevny okislyuvalno-vydnovny potencial, da spіvvіdnoshnja rechovins, scho za dajanje in sprejemanje elektronov, kar je izraženo z indeksom RH 2 . Ta potencial kaže povečanje v sredini kislosti. Za nekatere mikroorganizme je potreben visok potencial, za druge - nizek. Na primer, anaerobi se množijo pri RH 2, ki ni višji od 5, in aerobi - pri RH 2, ki ni nižji od 10.
7) čim bolj poenotiti, da povečamo količino ostalih sestavin. Tako je medij za gojenje bolj patogenih bakterij odgovoren za 0,8-1,2 g/l amino dušika NH 2 do celotnega dušika amino skupin aminokislin in nižjih polipeptidov; 2,5-3,0 g/l dušikovega dušika N; 0,5% kloridov v pererahunci za natrijev klorid; 1% peptona.
Bazhano, tako da so bila okolja jasnovidna - bolje je slediti rasti kultur, lažje si je zapomniti, da so okolja zašli mikroorganizmi tretjih oseb.
Razvrstitev sredine
Potreba po živih govorih in moč medija pri različnih vrstah mikroorganizmov nista enaka. To je neustavljivo ustvarjanje univerzalnega medija. Poleg tega pri izbiri tistega chi v sredini dodajte število dosežkov.
V tej uri je bila predstavljena veličino števila medijev, takšni znaki so postavljeni kot osnova za njihovo klasifikacijo.
1. Zunanje komponente. Po vihіdnim komponentah razlikujemo naravne in sintetične medije. Naravna gojišča so pripravljena iz proizvodov botaničnih in rastočih rastlin. na Danskem; uro gnilobe sredine, pri nekaterih sortah ličinke (meso in drugo) se nadomestijo z neobdelanimi: cistični in ribni borošni, krmni dež, krvni strdki in in. Ne glede na to, da je skladišče živih sredin iz naravnih proizvodov tudi zložljivo in se spreminja upad v obliki divjega sirovina. Sintetični mediji so pripravljeni iz kemično čistih organskih in anorganskih spojin, vzetih iz natančno določenih koncentracij in razlik v dveh destiliranih vodah. Prednost teh sredin je pomembna za tiste, ki imajo stalno skladišče (očitno so vanje vključeni govori skіlki in yakі), da je te sredine enostavno ustvariti.
2. doslednost(Stupin schіlnostі). Srednji so rіdkі, schіlnі in napіvіrіdki. Ti vmesni izdelki so pripravljeni iz redkih, dokler jih ne dodamo, da dodamo agar-agar ali želatino na sredino zahtevane konsistence.
Agar-agar je polisaharid, ki ga pridobivajo iz pevskih sort morskih alg. Vіn є za mikroorganizem z živahnim govorom in služi le za krepitev sredine. V vodi se agar topi pri 80-100°C, tali pri 40-45°C.
Želatina je beljakovina na potovanju bitja. Pri 25-30 ° C se želatinasti mediji stopijo, zato bodo kulture na njih vibrirale pri sobni temperaturi. Debelina teh medijev pri pH, nižjem od 60 in višjih od 70, se spremeni in smrad je slabo prevzet. Aktivni mikroorganizem nadomestna želatina kot življenjska govora - za rast medija se dvigne.
Poleg tega, kot srednje srce, zažgite zažgani krvni serum, zažgite jajca, krompir, sredino s silikagelom.
3. zaloga. Srednji deli so razdeljeni na preproste in zložljive. Prvim dodamo mesno peptonsko juho (MPB), mesno peptonski agar (MPA), juho in Hottingerjev agar, živo želatino in peptonsko vodo. Pripravijo se zložljive sredine, ki preprostim sredicam dodamo kri, sirovatke, ogljikove hidrate in druge govore, potrebne reprodukcije teh drugih mikroorganizmov.
4. Imenovanje: a) glavna (polživa) gojišča služijo gojenju bolj patogenih bakterij. Tse vishchezgadani MPA, MPB, juha in Hottinger agar, peptonska voda;
b) posebni mediji služijo za opazovanje in rast mikroorganizmov, kot je rast na preprostih gojiščih. Na primer, za gojenje streptokoka v sredino dodajte tsukor, za pnevmo-i meningokoke - krvni serum, za kašelj pri kašlju - kri;
c) selektivni (selektivni) mediji služijo za opazovanje pojočega tipa mikrobov, rast takšnih smrdi za nasitijo, zadušijo rast spremljajočih mikroorganizmov. Tako soli zhovchnyh kislin, ki poslabšajo rast črevesnih kolijev, naredijo medij selektiven za povzročitelja tifusne mrzlice. Sredina postane selektivna, ko jim dodamo poje antibiotikov, soli, spremembe pH.
Nekateri izbirni mediji se imenujejo akumulacijski mediji. Temelj takšnega medija je peptonska voda s pH 8,0. Pri tem pH se na njem aktivno razmnožuje vibrio kolere, drugi mikroorganizmi ne rastejo;
d) diferencialno-diagnostični mediji omogočajo razlikovanje (diferenciranje) ene vrste mikrobov z drugo encimsko aktivnostjo, na primer medij Hiss z ogljikovimi hidrati in indikatorjem. Z rastjo mikroorganizmov, ki se razcepijo na ogljikove hidrate, se barva medija spremeni;
e) konzervirna sredstva so namenjena za primarno setev in transport kasnejšega materiala; imajo prednost do patogenih mikroorganizmov in zanemarjajo razvoj saprofitov. Zadnji del takšnega medija je glicerinska suma, ki zmaga pri selekciji živahnosti pri spremljanju, ki ga izvajamo z metodo odkrivanja nizkočrevesnih bakterij.
Recepti za pripravo deaky sredin so predlagani za primer ofenzivne delitve in tistega drugega dela robčka.
Nadzorujte prehrano
1. Kakšen vimog se lahko zadovolji z bivalnimi prostori sredine?
2. Kako razvrstiti srednje komponente po zunanjih komponentah?
3. Kateri govori so za krepitev sredine?
4. Kaj so sredine?
5. Kaj se imenujejo srednji deli zložljivi, kakšna je njihova osnova?
6. Kako vam mediji omogočajo, da upoštevate pomembnejšo rast nekaterih mikrobov, medtem ko druge dušite za eno uro?
7. Kateri mediji kažejo encimsko aktivnost mikrobov?
upravitelj
Izpolnite obrazec in navedite, katere skupine dodajo sredino.
Priprava medijev
Pripomočki za pripravo medijev niso kriva maščevanja tujih govorov, na primer travnikov, ki jih vidijo nekakšne skle, ali oksidiranih dvoran, ki jih lahko zaužijemo v sredo, ko jo kuhamo v zarjavelih loncih. Preklinimo najboljše, emajlirane ali aluminijaste posode. Velike količine medija (desetine in stotine litrov) se pripravljajo v posebnih digestorjih ali reaktorjih (majhnih 14). Pred implantacijo je treba posodo temeljito oprati, sprati in posušiti. Novo stekleno posodo kuhajte vnaprej 30 minut v 1-2% klorovodikovi kislini ali hkrati zanyruyut za noč, nato pa jo dolgo sperite s tekočo vodo.
Spoštovanje! Posode, namenjene za pripravo medijev, ni mogoče uporabiti v druge namene, na primer za shranjevanje kemičnih reagentov ali za dekontaminacijo, ki jo je mogoče razkužiti - navit sledi teh govorov lahko povzročijo rast mikroorganizmov.
Vihіdnoy syrovina za pripravo velikega števila medijev postrežite z izdelki aborosline izleta bitja: meso in jogo zaminniki, mleko, jajca, krompir, soja, koruza, kvas in drugo.
Glavne živinske juhe se kuhajo v mesni vodi ali digestiji, odvzeti s kislinsko ali encimsko hidrolizo sirovina. Bouglioni s prebavo v 5-10 krat ekonomični, manj z mesno vodo. Seredovishcha na prebave, bogate z aminokislinami, otzhe, pozhivnishі; se lahko bolj pufra, tako da se lahko doseže stabilnejša pH vrednost. Poleg tega lahko pripravimo digest iz mesnih nadomestkov (krvni strdki, posteljica, kazein tudi).
Ob tej uri so bili laboratoriji oskrbovani z mesno vodo in centralizirano digestijo. Najpogosteje so skorjaste s Hottingerjevim digestorjem trebušne slinavke, kazeinskim hidrolizatom ali krmnimi kvasovkami. Iz tsikh napіvfabrikativ za petje receptov pripravite potrebno vmesno programsko opremo.
Koraki kuhanja sredina: 1) varianta; 2) nastavitev optimalne pH vrednosti; 3) osvetlitev; 4) filtracija; 5) stekleničenje; 6) sterilizacija; 7) nadzor.
zavre medijev na vročem ognju, vodnih kopelih, v avtoklavih ali kotlih, ki se segrevajo v parih.
nastavitev pH srednji so orientirani s pomočjo indikatorskih papirčkov. Za natančno določanje pH so vgrajeni s potenciometrom, zastosovuyuschie steklo elektrod je povezano z navodili bodisi primerjalnika (Mikhailis aparat), ki je sestavljen iz stojala z vtičnicami za epruvete (slika 15) in niza pH standardi. Pri pripravi sredin zvenijo z indikatorjem metanitrofenol, ki spremeni barvo v območju 6,8-8,4.
Za določitev pH medija epruvete 4 se premer in barva bučk, ki se ne ujema z epruvetami s standardi, namestijo na gnezda 1, 2, 3 in 5 (razdel. slika 15). V 1. in 3. epruveto nalijte 5 ml destilirane vode; v 5-y - 7 ml; v 2. - 4 ml vode in 1 ml indikatorja. V gnezdu 4 in 6 nastavite standard za zahtevani pH. V 1., 2. in 3. epruveto nalijemo 2 ml ohlajenega medija. Namesto epruvet premešajte.
Barva ridinov v epruvetah je enaka svetlobi, ki prehaja skozi, zapira zadnjo odprtino s filtrom (mat ali modro, kot da je svetloba intenzivno rumena). pH testiranega vzorca se razlikuje glede na pH standard, iz katerega je barva izbrana.
Pripravimo medij z nastavitvijo pH, v gnezdi 4 in 6 nastavimo standarde, katerih pH je blizu potrebnega, v 2. epruveto s testiranim medijem in indikatorjem pa dodamo iz birete ime cveta in travnik, pa tudi luč v 2. testni luči za standard, ali pa je razlika v kislosti kot pri svetlobnem standardu. Lužo (ali kislino) dodajamo, dokler se ne umiri, dokler se barva drugega vzorca ne ujema z barvo standardov. Kіlkіst lugu (abo kisline), dodajte do 2 ml medija v 2 vzorca, pereahovuyut za celotno dolžino pripravljenega medija. Na primer, 2 kapljici (0,1 ml) 0,05 n. travnik, potem je za zdravljenje 1 litra potrebno 500-krat več, do 50 ml 0,05 n. ali 2,5 ml 1n. odpreti travnik.
Med sterilizacijo se pH gojišč zniža za 0,2 na tisti za odstranitev gojišča s pH 7,2-7,4, storž pa pripravimo s pH 7,4-7,6.
Osvetlitev sredina vibrira, kot da pri kuhanju smrad kalamutnіyut ali potemni. Za posvetlitev v sredo segrejemo na 50 °C, vlijemo beljak piščančjega jajca, stepemo z vodo, premešamo in zavremo. Zgortayuchis, veverica zahoplyuє v obleganju klica srednjega dela. Na enak način je mogoče jajčni beljak zamenjati z viralnim krvnim serumom (20-30 ml na 1 liter medija).
Filtracijska kopel redki in taleči se želatinasti mediji vibrirajo skozi papirnato vodo ali skozi mater'yanі filtre. Filtriranje agarskih gojišč je težko - smrad se hitro ujame. Prezvočite jih skozi vato-gazni filter (pri virvi je postavljen servlet iz gaze in na njem je napisano prsi vate). Možno je vikoristovuvaty papir ali mater'yanі filtracijo, kot tudi izvajati filtracijo v vročem avtoklavu ali v virvah s pujsom.
Filtriranje agarskega gojišča lahko nadomestijo okoliščine. Sredino vlijemo v bližino visoke valjaste posode in stopimo v avtoklavu. V primeru zadostnega hlajenja sredine naprave za navijanje se zrak v njej pogosto usede na dno. Naslednji dan se strdek agarja odstrani iz posode (za kar posodo začasno postavimo v bližino vroče vode) in z nožem prerežemo spodnji del obleganja, ki se je nabral. Zgornji del se stopi in vlije na vrh posode.
polnjenje sredice v epruvetah (po 3-5 ml oz. 10 ml), viale, bučke, vzmetnice in kroglice največ 2/3 prostornine, zato se med sterilizacijo zamaški lahko zmočijo in sredice izgubijo sterilnost.
Sredino, kot sterilizirano pri temperaturah nad 100 ° C, vlijemo v čiste, suhe posode. Medije, ki so sterilizirane pri nizkih temperaturah, se vlijejo obov'yazkovo v bližini sterilnih posod.
Izlivanje sredine s pomočjo zalivalke, na koncu katere je oblečena gumijasta cev iz zatiskač Mora. Za mirno polnjenje vstavite čaše, birete, razpršilnike, brizge, pipete na tanko (majhnih 16).
Posoda iz sredine je zaprta z zamaški iz bombažne gaze, čez katere se nataknejo papirnati pokrovčki. Pomembno je, da pri prelivanju sredina ni zmočila robov posode, sicer se lahko zamaški prilepijo nanje. Na posodo za kožo pritrdite nalepko z imenom kraja bivanja in datumom priprave.
Sterilizacija. Način sterilizacije je treba shraniti v skladišču medija bivanja in indikacije za ta recept. Zrazkova shema za način sterilizacije gojišča je prikazana v tabeli. osem.
1 (Nekateri mediji z ogljikovimi hidrati, beljakovinami in vitamini bodo bolj verjetno sterilizirani za dodatne bakterijske filtre.)
Nadzor pripravljeno gojišče: a) za kontrolo sterilnosti gojišča ga postavimo v termostat za 2 dni, nato pa ga pregledamo. Vendar pa v okoljih ni znakov rasti, veljajo za sterilne in prenesene za kemično kontrolo količine kožnih lezij; b) kemična kontrola: preostalo obnoviti pH, namesto skupnega in amino dušika, peptona, kloridov (njihova količina je lahko enaka kot je navedena v receptu).
Kemijska kontrola medijev se izvaja v kemijskem laboratoriju; c) za biološko zatiranje papalino semen gojišča posadimo s posebej izbranimi kulturami mikroorganizmov, za njihovo rast pa presojamo življenjsko dobo (rast) moči gojišča. Pred končnim medijem dodajte etiketo in potni list, na katerega navedete ime skladišča medija, rezultate kontrole in іn.
Skrbijo za medij za sobno temperaturo v omarah, zanje je še posebej rezerviran. Deyakі seredovishcha, na primer, seredovischa s krvjo in vitamini, ga vzemite iz hladilnika.
Recepti za pripravo preprostih (osnovnih) medijev in izotoničnega natrijevega klorida
Izotonična raztopina natrijevega klorida. V 1 liter destilirane vode dodajte 9 g natrijevega klorida. Rozchinov filter, po potrebi nastavite pH і naloge, sterilizirajte pri 120 ° 30 minut.
Mesna pepton juha (MPB). Mesni vodi dodamo 1 % peptona in 0,5 % x. vključno z natrijevim kloridom, kuhajte na majhnem ognju 10-15 minut, da odprete usta, obnovite zahtevani pH in ponovno kuhajte 30-40 minut, dokler obleganja ni konec. Filtriramo, dodamo primarni volumen z vodo in steriliziramo 20 minut pri 120°.
Bouillon Hotinter. Digest Hottinger's digest z vodo 5-6 krat uparjenega, odvisno od tega, koliko amino dušika je mogoče izločiti in koliko je lahko v juhi (navedeno v potnem listu digesta in recepturi gojišča). Na primer, za pripravo medija z 1,2 g / l amino dušika smo ga razgradili na 9,0. g/l je treba razredčiti 7 5-krat (9,0:1,2). Razredčenemu digestiju dodamo 0,5 % natrijevega klorida in kuhamo na majhnem ognju, dokler sol ne postane bistra.
Mezopepton agar (MPA). Končni juhi (pred sterilizacijo ali po njej) dodamo 2-3% rafiniranega agar-agarja in kuhamo, mešamo, na šibkem ognju, dokler se agar popolnoma ne stopi. MPA lahko kuhamo v avtoklavu ali v aparatu Koch. Sredina je pripravljena, kot je potrebno, osvetlimo, filtriramo in steriliziramo 20 ur pri 120°C.
Napіrіdky agar smite 0,4-0,5% agar-agar.
Živilna želatina. V pripravljeno juho dodamo 10-15% želatine, segrevamo, dokler se ne stopi (ne zavre!), vlijemo v sterilne posode in steriliziramo z ravnim parom.
Recepti za izdelavo zložljivih jeder
Srednje z ogljikovimi hidrati. V glavno juho staljenega agarja dodajte potrebno količino (0,1-2%) čistega ogljikovega hidrata (na primer glukoze). Po tem jih vlijemo v sterilne posode in steriliziramo z ravnim parom. Pri tem načinu sterilizacije se pogosto uničijo drobci v ogljikovih hidratih, predvsem 25-30% razlik v ogljikovih hidratih, sterilizacija skozi bakterijski filter, dodajanje potrebne asepse v sterilni glavni medij - po kontroli sterilnosti se jedro pripravljena za implantacijo.
Sredi krvi pripravite 3 sterilne enostavne medije z dodajanjem do 30 % (zvok 5 %) sterilne defibrinirane krvi v aseptične posode (po možnosti v škatli). Agar sredice stopimo in ohladimo na 45 °C pred cym. Pri zahtevani temperaturi se lahko prenaša kot vroče, ne pa tudi opiku. Po dodatku krvi, dokler se ne prehiteva sredina, namesto sodnika odločno premešajo in nalijejo skodelice ali epruvete.
Spoštovanje! S krvjo ne moreš pljuvati na sredino – kri lahko spremeni tvojo avtoriteto.
Med sivo krvjo pripravi kar tako, kot sredico krvi. Glavnim sredicam dodamo 10-20% seruma, da ne maščujemo konzervansa in naprej inaktiviramo pri 56 ° z raztezanjem 30 minut v vodni kopeli ali v inaktivatorju. Ko je inaktiviran, se govor (komplement) poruši, kar škodljivo vpliva na mikrobe.
Sredi življenja. Enostavnim gojilom dodamo jovč v količini 10-40 % gojišča, obnovimo zahtevani pH in steriliziramo 20 minut pri 120 °C. Sterilni jovč lahko dodamo v sterilno gojišče v aseptičnih jamah.
Stekleničenje agarskih gojišč v petrijevki. Pred ustekleničenjem sredino stopimo v vodni kopeli in ohladimo na 45-50 ° C. Za skodelico s premerom 9 cm dodamo 15-20 ml sredine (višina kroglice 0,25-0,3 cm). Ker je kroglica večja, kolonije gledajo novo manjšo v nasprotju. Na loku tanke krogle je peščica smrtnih govorov in vologov (sredina svidka visi) ostro obrobljena - kultivacija uma je vse manj.
Sredine vlijemo v sterilne skodelice v aseptičnih posodah. Postavite skodelice s pokrovom, zažgete. Posodo vzemite s sredino z desne roke, tako da zmanjšate plamen ognja. Z levo roko stisnejo zamašek, ga stisnejo z mezincem in to stranjo. Zažgite vrat sodnika in z dvema prstoma leve roke narahlo naredite pokrov. Vstavite pod vrat viale, ne da bi se prilepili na rob skodelice. Nalijte sredino, zašijte, tako da se enakomerno dvigne vzdolž dna skodelice. Kot da se ob polivanju po sredini čebulice spet nastavijo, pred njimi, kot je sredina ujeta, prinesejo pol dneva sirnika ali palnika - čebulice se oluščijo. Nato skodelico zapremo in pustimo, da se ujamejo sredine. Yakshcho sivba preživite na dan polnjenja, sredino je treba posušiti. Za to skodelico v termostatu previdno odprite in namestite pokrove te skodelice z odprto stranjo navzdol za 20-30 minut. Kako preživeti prihodnji dan po polnjenju, skodelice, ki se ne posušijo, zažgejo na istem papirju, ki so ga sterilizirali, in jih postavijo v hladilnik.
Priprava poševnega agarja. Epruvete s 4-5 ml sterilnega staljenega agarskega medija postavimo v krhko lego (približno 20° pod rezom) s takšno režo, da sredina ne presega 2/3 epruvete, sicer lahko zmoči epruveto. pluta. Po tem, ko je sredina ujeta, epruvete postavite navpično - da odtok kondenzata. Bolje je, da se navadite na sveže rezan agar.
Spoštovanje! Ni mogoče coristuvatysya s sredino, za katero ni kondenzata. Nato vrtnice ponovno stopim v vodni kopeli in pokosim.
Suhi medij
Vitchiznyana promyslov_st vpuskaє suhi medij različnega prepoznavanja: preprost, izbirni, diferencialno-diagnostični, poseben. Tse praški v steklenicah s pokrovčki, ki se bodo zašrabili. Temni meglici odvzamejo suh medij in ga zaprejo – smrad je higroskopičen. V laboratoriju se praški uporabljajo za pripravo srednjih knjig na etiketah.
Prednost suhih medijev v čistih sredstvih, pripravljenih v laboratoriju, je standard (proizvajajo se v velikih serijah), enostavnost priprave, tako da jih lahko damo na razpolago v vseh (navit) glavah, stabilnost, ekonomičnost. Pomembno je, da jih lahko pripravimo iz mesnih nadomestkov: kazeinskega hidrolizata, fibrina, papaline in za induciranje beljakovinskih frakcij mikrobnih celic (sarcin).
Nadzorujte prehrano
1. Kako lahko uporabim pH medija za gojenje več patogenih mikrobov pred sterilizacijo in zakaj?
2. Pri kakšni temperaturi se agar medij stopi in ujame?
3. Kako je kriva priprava jedi, v katere so nosilci preliveni z ogljikovimi hidrati in beljakovinami?
upravitelj
1. Pripravite MPB, MPA, juho in Hottinger agar pH 7,2-7,4, nalijte v viale in epruvete; sterilizirati.
2. Pripravimo iz suhih praškov Hessovega medija, nalijemo v epruvete po 4-5 ml in steriliziramo.
3. Pripravite krvni agar in jogo vlijte v petrijevke.
4. Pripravite iz suhih praškov sredine Endo, EMC, Ploskireva in jih vlijte v petrijevko.
5. Pripravite agar poševnice.
Metode Posiviva
Pomemben korak pri bakteriološkem spremljanju je objava. Pri različnih načinih setve je potrebno preučiti naravo setvenega materiala in gojišča vikornega vikorja. Vsi smradi vključujejo metodo vezave: zaščito pred mikrobi tretjih oseb. Za to vadite naslednji post, vendar brez ostrih rukhivov, ki bodo vsakič pomagali colivanni. O uri posіvіv ni mogoče povedati. Bolje delaj pri boksu.
Spoštovanje! Ne pozabite upoštevati pravil posebne varnosti za eno uro dela z materialom.
Sejanje iz epruvete v epruveto. Epruveto z originalnim materialom in epruveto s sredino v levi roki med palcema in prstoma narahlo zmečkamo, tako da so robovi epruvet na isti ravni, njuni podstavki pa na vrhu čopiča. Zvočite epruveto iz izvornega materiala bližje sebi. Na desni roki, kot pisalo, odrežite bakterijsko zanko in jo sterilizirajte, tako da obrežite navpično v polmesecu. Z malim prstom tega roba dlani desne roke takoj užalite prometne zastoje. Zamaške ne streljajte z rivkom, ampak gladko - z lahkimi zasukanimi gibi. Utripa zamaški, robove epruvet ožge polmeseca palnika. Ocvrto zanko vnesemo skozi polovico palnika v epruveto s srednjim materialom, ohladimo in, ko zberemo malo materiala, previdno prestavimo v epruveto s sredine.
Pri sajenju sredice zadnji material podrgnemo po stenah epruvet čez matico in s sredino prevlečemo.
Pri sajenju na navaden medij s tamponom je treba jogo na sredini sprati 3-5 sekund, z njo sprati. Ko sivbі na sredino sredice, material podrgnemo po površini, ovijemo tampon, po katerem se tampon ne okuži (namesti se na epruveto, na enak način, kot ga dostaviš v laboratorij, se avtoklavira) .
Spoštovanje! Upoštevajte, da sredina ni mahala in ni zmočila plute.
Ko sivbі na kosih agarja, je treba material podrgniti po površini sredine s cikcak podobnim rouxom od spodaj navzgor, začenši od med kondenzatom.
Ko sivbі na reži sredine, vlije v epruvete s topotom, zanko z materialom preluknjamo s topotom, ki vibrira, tako da so vrste zasajene s "bodom".
Po setvi zanko odstranimo iz epruvete, ožgemo robove epruvet in po prehodu čepov skozi polovično širino palnika epruvete zapremo, nato pa zanko prepražimo.
Redko gradivo lahko posejemo s sterilnimi pipetami (Pasterjevo ali graduacijsko). Po setvi bodo pipete zanuryuyut pri dezinfekciji domovine.
Pri plastenkah, vzmetnicah in plastenkah položimo približno tako, kot pri epruveti, samo poberemo material na hrbtni strani (z zanko ali pipeto), nato pa posodo odpremo s sredino.
Sodniki iz posajene kulture so napisani in postavljeni na termostat.
Setev na epruvete iz petrijevk. Vivchivshi značaj gojenja kulture na skledi, s strani dna, z voščeno oljko, potrebno zasaditev delyanke. Pred seboj postavite skodelico z bogatim materialom s prežganim pokrovom. Z levo roko odprite pokrov in pod njim vstavite ožgano zanko. Ko ohladite zanko, zberite zaloge, material z določene parcele. Naredimo zanko, zapremo skodelico in vzamemo epruveto s sredine leve roke. Setev poteka na enak način, kot od epruvete do epruvete. Ko sem skodelico odložil, jo obrnite na glavo.
Setev na agar blizu petrijevke. Setev z lopatico. Lopatica je steklena ali kovinska cev, katere konec je na videz trikutnika upognjen. Lopatico lahko delate s pastersko pipeto, zignuvši pod kutom її tanke kinete, pred njo v pol lune palnice.
Z levo roko rahlo odprite pokrov in ga pobožajte z velikim in impresivnim prstom. Z zanko, s pipeto ali s stekleno paličico nanesemo pokrivni material na površino sredine, nato pa ga previdno drgnemo s krožno lopatico doti, ne prenehamo premikati lopatice po površini sredine, z levo roko z njo obrežite pokrov in takoj zavijte skodelico. Po končani setvi lopatico odstranimo iz skodelice in zapremo pokrov. V bližini dezinfekcijskega sredstva postavimo škripajočo lopatico, v bližini polovičnega gorilnika pa ocvremo kovinsko lopatico.
Posejte zanko. Majhno količino sadilnega materiala (tudi če je pomešano pred sterilno izotonično rozeto ali juho) z zanko vtremo v površino sredine roba skodelice, papalino enkrat spustimo skozi zanko od strani do kljun. Počakajmo do konca tistega meseca, ko se poteze končajo, prebodemo agar z zanko, poznamo preveč semenskega materiala. Preostali material, ki ostane na zankah, razporedimo s cikcakastimi volančki po celotni površini sredine. Po končani setvi skodelico zapremo in zanko plevemo.
Posejte zanko na sektorju. Skodelica s strani dna je zmečkana v sektorje. Setev se zaniha s cikcakastimi valovi od roba skodelice proti sredini. Šive je treba obdržati, da udarci ne vstopijo v kopenski sektor.
Sejanje s tamponom. Tampon z dodatnim materialom je treba vnesti v skodelico pri trohu in ga s krožnimi robovi zdrgniti po površini sredine ter oviti tampon in skodelico.
Sejanje trate. Približno 1 ml (20 kapljic) nativne kulture (kot je kultura iz želodčnega medija, ki jo lahko zmešamo s sterilno izotonično sorto ali juho) nanesemo na površino agarja in previdno razporedimo blato po površini agarja. medij. Skodelica se rahlo zaceli in s pipeto odstranimo odvečno kulturo, ki jo mahnemo v razkužilo. Tam so dali pipeto.
Sejanje agarja s tovarišem. Kulturo, vzgojeno na redkem mediju ali emulgiranem materialu, je treba dodati v posodo s stopljenim in ohlajenim na 45 °C agarjem, premešati in premešati v sterilni petrijevki. Dodaten material lahko dodate v prazno skodelico in vlijete 15-20 ml agarja, ohlajenega na 45 °C. Za mešanje namesto skodelice se trohe ukradejo in zavijejo. Skodelice pustimo na mizi, dokler se ne ujame sredina.
Osvetlitvene skodelice so podpisane s strani dna in postavljene na termostat s spodnjim delom navzgor.
Nadzorujte prehrano
1. Kaj potrebujete aseptično pranje za dan sivby? Zaokroži navzgor.
2. Kako je potrebno dokončati delovni prostor po sajenju?
Metode gojenja
Za uspešno pridelavo, krіm pravilno izbrano medij in pravilno obdelano setev, potrebujete optimalen um: temperatura, vsebnost vlage, prezračevanje (ponovitev obliža). Praviloma je čuječnim umom dovoljeno ustvarjati, odločno pazljivim na naravno okolje.
Temperatura. Optimalna temperatura za gojenje večine patogenih mikroorganizmov (37 °C) je določena na termostatu (slika 17). To je nastavek iz podvisnih sten, ki jih lahko vedno znova poznamo, ali vode, ki se ogreva z elektriko. Vіn zabezpecheniy s termostatom, ki samodejno prilagaja zahtevano temperaturo, in termometrom za nadzor temperature.
Epruvete s pridelki v regalih, mrežah za pikado ali kozarcih so nameščene na policijo termostata. Skodelice v termostatu so obrnjene na glavo. Torej, ponavljajoč se v termostatu, je prosto krožilo in ogrevanje je bilo enako, policija v termostatu je pihala z urezi in ni preplavila. Da ne bi ohladili kulture, ji termostat ne prikrajša sveže vode.
Laboratorijski pomočnik golše lahko registrira temperaturo v termostatu in izboljša čistočo v pripomočkih, v primeru okvare pa pokliče mojstra.
Svetloba Najpomembnejši mikrobi (pred njimi so vidni vsi patogeni) niso potrebni - gojijo se na temnih drevesih. Vendar pa za gojenje pigmentacije, saj je bolj aktivna na rožnati svetlobi, kulturo po termostatu vibriramo 2-3 dni v sobni svetlobi.
Spoštovanje! Naslednji edinstven hit neposrednih Sony izmenjav, ki škodi kulturi.
Vsebnost vode. Življenje mikrobov je nemogoče brez vologije - življenje govora prodre v klitin manj kot rozchinennym videz. Pri gojenju na odprtih gojiščih je treba zaščititi: nalijte jih v skodelico in jih kosite v epruvete pogosteje kot dan setve. Pri gojenju mikrobov, ki so še posebej občutljivi na prisotnost vode, na primer gonokokov, postavite termostat v posodo, napolnjeno z vodo.
Pogoji gojenja. Večina patogenih mikrobov se goji 18-24 let, vendar pazite, da pravilno raste (do 4-6 dni). Za varčevanje z vodo v njih je treba vatirane čepke zamenjati s sterilnimi humičnimi ali pa nanje namestiti humusne blazinice.
Spoštovanje! Gumijevi zamaški se sterilizirajo v avtoklavu, sežgejo v papirju.
Prezračevanje. Za porabo mikrobov v prosti kislini jih lahko razdelimo na aerobi in anaerobi. Žaljive skupine bodo zahtevale drugačno kultivacijo.
Dopolnitev kislega, ki je potrebna za gojenje aerobov in fakultativnih anaerobov, se razvije s pasivnim in aktivnim prezračevanjem.
Pasivno prezračevanje - gojenje ce na tankih in redkih gojiščih v posodah, zaprtih z bombažnimi ali bombažno-gaznimi zamaški, ali petrijevki. Pri takšnem gojenju mikrobi ohranjajo kislo, obstajajo razlike v sredini, ki se nahaja v posodi nad sredino in prihaja skozi skorjo. Pasivno prezračevane kulture lahko gojimo na površini ali na tanki kroglici sredine, kamor prodira kisli zrak.
Aktivno prezračevanje stagnira z glibinsko gojenjem mikrobov, če rastejo v velikem obsyagi medija. Da bi zagotovili zadostno kislost takih kultur, so postavljene na posebno goydalko - nenehno ponovno mešanje kultur, da se zagotovi varnost ponovitev. Pri gojenju v obsyagi rіdini, ki dosežejo desetine in stotine litrov, ki se izvajajo v pripomočkih, se imenujejo reaktorji ali fermentorji, jih ponovno prepihajo skozi kulturo s pomočjo posebnih gospodarskih poslopij.
Gojenje anaerobov zložene, nižje aerobne, pokrovače so potrebne za dostop do prostega zraka. Za koga morate na različne načine ponoviti življenjski medij.
Gojenje aktinomicetov, gliv, mikoplazm, L-oblik, spirohet in najpreprostejših. Gojenje teh mikroorganizmov je pomembno podobno gojenju mikrobov. Zanje so bili razviti posebni mediji in izbrani režimi, ki ustrezajo njihovim potrebam.
Čista kultura se imenuje zbirka mikrobov iste vrste na alkalnem ali redkem živem mediju.
Uporabljamo številne metode, da vidimo čisto kulturo nerazvrščeno v smislu moči materiala, ki se goji, in meti dosledzhennya. Zvočne čiste kulture iz izoliranih kolonij - koncentracija mikrobov na alkalnem mediju. Pomembno je omeniti, da se večina kolonije razvije iz ene mikrobne celice, tako da je čista kultura tega mikroorganizma.
Faze videnja čiste kulture:
1. dan - odstranitev izoliranih kolonij. Končni material spustimo z zanko, nanesemo s pipeto ali stekleno palčko na površino agarja v petrijevki. Z lopatico drgnite material po površini jedra; brez proplyuyuchi in brez obračanja lopatice, razširite seme na 2. in nato na 3. skledo. Pri takšnem namazu ima 1. skodelica veliko materiala in veliko mikrobov, 2. skodelica manj in 3. skodelica še manj.
Izolacijo kolonij lahko odstranite s sib zanko. V ta namen se material emulgira v juhi ali izotoničnem natrijevem kloridu.
2. dan - mikrobi rastejo na skodelicah. Pri 1. skodelici zveni bolj prijazno raste - ne vidite izolirane kolonije. Izolirane kolonije rastejo na površinskem agarju v 2. in 3. plošči. Migajo se z neutrudnim očesom, za dodatno pomoč, pri majhnem povečanju mikroskopa in v primeru stereoskopskega mikroskopa (razdelek 31). Kolonija se vzame s strani dna posode in prenese na agar poševne robove. Posivi postaviti na termostat.
Spoštovanje! Možno je ponovno preživeti manj izolirane kolonije.
3. dan - gojenje narave rasti na poševnem agarju. Rop mazilo, farbuyut yogo i, ko se je spremenilo, da je kultura čista, nadaljujte z njeno vyvchennya. Čigava vizija čiste kulture se bo končala. Gledano iz pojočega džerela se ta kultivirana kultura imenuje sev.
Ko pred redkim gojiščem vidite čisto hemokulturo: 10-15 ml sterilno odvzete krvi inokuliramo v 100-150 ml redkega gojišča. Tako sramežljiv do tistega, ki ima malo mikrobov v krvi. Spivvіdnoshenie krovі, shо sіvaєєєє, i zhivotnoe sredovischa 1:10 ne vypadkovo - tako doseči rozvedennâ krvi (nezmešana kri zhubno іє іє na mikroorganіzmi). Colby je treba postaviti na termostat. Skozi dobu (in po več kot eni uri kulture na prahu, kar se vidi) iz namesto bučk spustimo obešala na posode za izolacijo kolonij. Po potrebi ponovite obešanje v presledkih 2-3 dni.
Ko iz odseka zagledate čisto kulturo, izmivalne vode odtoka in druge rodine, jih centrifugirajo naprej v aseptične posode in posejejo obleganje. Še dlje, vizija čiste kulture vibrira na izjemen način.
Da bi videli čisto kulturo, so široko zasajena selektivna medija.
Številne metode za razvoj čistih kultur zmage imajo vidne biološke značilnosti mikroba. Na primer, ko vidite bakterije, ki tvorijo spore, segrevajte pri 80 ° 10 minut, vozite v vegetativni obliki; pri videnju buddnika tuberkuloze, odpornega na kisline in travnike, se za pomoč teh govorov material reducira v obliki spremljajoče flore; da bi videli pnevmokoke in kužne palčke, je treba material dati več mišem - v tem organizmu, ki je zelo občutljiv na te ljudi, se mikrobi množijo hitreje kot drugi.
Pri znanstveno naprednih robotih, zlasti za genetske študije, je treba vzeti kulture iz ene celice. Takšna kultura se imenuje klon. Za її otrimannya jih najpogosteje olupimo z mikromanipulatorjem - nastavkom, z orodji (iglami, pipetami) mikroskopskih raztezkov. Za pomoč trimacha pod nadzorom mikroskopa jim je treba injicirati zdravilo "viseča kapljica", vzeti klitino (eno) in jo prenesti v živi medij.
Videti kulture
Vivchennya morfologi, kolapsi, tinktorialna moč moči (razdelka Rodil 3), narava zrutanni na jedru (kulturna moč), encimsko aktivno nizko vidnih mirobov, yogo taksiji, Tobto je vrsta elegantnega , , sorta. Imenuje se identifikacija. Identifikacija mikroorganizma je pomembna tudi pri diagnostiki okužb, vstavljanju džerel in kanalov v njen prenos ter pri najnižjih znanstvenih in praktičnih rezultatih.
Kulturne oblasti
Različne vrste mikroorganizmov na gojišču rastejo na različne načine. Tsі vidminnosti služijo njihovim diferenciacijam. Nekatere so dobre za gojenje na preprostih gojiščih, druge so močne in rastejo samo na posebnih. Mikroorganizmi lahko dajo lažjo (pishne) rast, mir ali skopuha. Kulture so lahko brezbarvnimi, siruvatimi, siro-blakitnimi. Kulture mikroorganizmov, ki tvorijo pigment, so lahko različne okužbe: bela, rumena ali zlata v stafilokoku, chervone - v čudežni palici, modro-zelena - v modro-zeleni palici, pigment, kot, roza v vodi, zabarvlyuє ne samo .
Na schіlnyh Med mikroorganizmi v prahi, odvisno od količine sadilnega materiala, so odobrene bodisi saharoze ("travnik") bodisi izolirane kolonije. Kulture so hrapave in nizke, vrzeli in neprozorne, z mat površino, sijajne, gladke, kratke, suhe, grbaste.
Kolonije so lahko velike (4-5 mm v premeru in večje), srednje (2-4 mm), majhne (1-2 mm) in pritlikave (manj kot 1 mm). Smrad se loči po obliki, gnije na površini sredice (opukli, ploščati, kupolasti, vdolbini, okrogli, rozetasti), po obliki robov (enakomerni, kosmati, raztrgani).
Redko Srednji mikroorganizem lahko naredi gladko kalamuto, daje obleganje (zrnato, žagasto, plastično) ali pljune (spodnje, grobo, nagubano).
Na primer pri zasaditvi z vbodom mikrobi postanejo motni, srednji postanejo motni, srednji rastejo šele po »piku« in blokirajo odpiranje vrzeli.
Kulturne moči pomenijo poudarjanje narave rasti kulture, s preprostim očesom, s pomočjo povečevalnega stekla pod majhno povečavo mikroskopa ali korozivnega stereoskopskega mikroskopa. Velikost in oblika kolonij, oblika robov in prosojnost se vidijo v svetlobi, ki prehaja skozi, ko gledamo skodelice s strani dna. V prelomljeni svetlobi (s strani pokrova) se določi značaj površine, dlake. Konzistentnost je določena s piko zanke.
Morfološka moč
Preučevanje morfologije mikrobov lahko služi kot njihova diferenciacija. Morfologijo opazimo pri obdelanih pripravkih. Obnovite obliko in velikost klitina, njegovo razširitev v pripravku, prisotnost spor, kapsul, flagel. V farbovaniziranih pripravkih je treba mikrobe pripeljati do farba (tinktorska moč) - dobro ali slabo je jemati farb, saj ga je mogoče pripeljati do diferencialnega zabarvlena (za takšno barvo je zabarvlyuєtsya za Gram, Tsil - Nielsen in іn. ). Vitalna (živa) zabarvlennya vam omogoča, da namestite lahkomiselnost, da ločite žive in mrtve celice, da sledite njihovi podil. Razdelitev in krhkost je mogoče zdraviti z naravnimi (nekontaminiranimi) pripravki (razdelek 3).
Encimska aktivnost
Encimska aktivnost mikroorganizma v bagatu je drugačna. Lahko se uporablja kot vrsta in tip, ki pripada mikrobu, in se lahko uporablja za označevanje njegove različice (tako imenovane biovarianta). Oglejmo si glavno encimsko moč tega sestanka v jogi yakіsne.
Razgradnja na ogljikove hidrate(saharolitična aktivnost), tako da sposobnost razgradnje sladkorja in bogatega atomskega alkohola z raztopljenimi kislinami in kislimi plini, raste na sredini Hiss, yakі maščuje tisto, kar je najmanj ogljikovih hidratov in indikator. Pod delovanjem kisline, ki se zadovolji pri razdelitvi na ogljikove hidrate, indikator spremeni kontaminacijo medija. Zato se sredina imenuje "vrstica nizov". Mikrobi, ki ne fermentirajo v ogljikove hidrate, rastejo na mediju, ne da bi ga spremenili. Prisotnost plina je ugotovljena za zapiranje čebulic v sredinah z agarjem ali za nabiranje joge v "plovce" na redkih sredinah. "Plovec" - steklena cev z spajkanim steklom, žival navzgor, tako da pred sterilizacijo postavijo epruveto iz sredine (slika 18).
riž. 18. Vivchennya tsukrolitična aktivnost mikroorganizma. I - "vrstica nizov": a - srednja sredina z ogljikovimi hidrati in Andredejevim indikatorjem; b - podobno kot v sredini z indikatorjem BP: 1 - mikroorganizmi ne fermentirajo v ogljikove hidrate; 2 - mikroorganizmi fermentirajo v ogljikove hidrate iz kislinskih raztopin; 3 - mikroorganizmi fermentirajo v ogljikove hidrate z raztopljeno kislino in plinom; II - kolonije mikroorganizmov, ki ne odlagajo (bezbarvnі) in odlagajo laktozo
Poleg tega je saharolitična aktivnost prikazana na medijih Endo, EMC, Ploskireva. Mikroorganizmi, ki v svojih medijih fermentirajo mlečno kislino (laktozo) do kislosti, okužijo kolonijo - kislina spremeni barvo indikatorja. Kolonije mikrobov, ki ne fermentirajo laktoze, so neplodne (razdel. slika 18).
Mleko z rastjo mikrobov, ki fermentira laktozo, se pogoltne.
Z rastjo mikroorganizma, ki utvoryuyut amilazo, na sredini škroba, se razgradi. Za to vedo, saj se po dodajanju Lugolove papaline v kulturo barva medija ne spremeni. Nerazgradljivi škrob se daje iz cym rozchinom modre farbuvannya.
Proteolitska moč(V ta namen zmožnost cepitve beljakovin, polipeptidov itd.) raste na gojiščih z želatino, mlekom, sirovatko, peptonom. Pri gojenju na želatinastem mediju mikrobov, ki fermentirajo želatino, medij raste. Narava porazdelitve, ki jo imenujejo različne bakterije, je različna (slika 19). Mikrobi, ki razgrajujejo kazein (mlečne beljakovine), zahtevajo peptonizacijo mleka - izgleda kot mlečni mlečni pleh. Pri cepljenju peptonov se vidi indol, obtočna voda, amoniak. Luč se namešča s pomočjo indikatorskih papirjev. Filtrirni papir se zadnje čase izceja s pojočimi vrtnicami, visečimi, progasti z ozkimi samicami z dožino 5-6 divov, po zasaditvi kulture na MPB pa se med njo in steno epruvete položi zamašek. Po inkubaciji na termostatu je rezultat zagotovljen. Ammiac postane moder na lakmusovem papirusu; ko vidite sirvodnya na papriki, iztekel 20 % svinčevega acetata in natrijevega bikarbonata, se svinčev sulfat raztopi - črna paprika; indol viklikaє črna paprika, izpuščena z oksalno kislino (razdel. sl. 19).
Krіm zaznachenih sredovishch, zdatnіst mikroorganіzmіv rasplyuvatі vіznі zhivnі substratov vyznachayut za pomoč papirnatih diskov, pušča pesmi reagentov (indikator sistemi papirja "SIB"). Plošče spustimo v bližino epruvete s končno kulturo in po 3 letih inkubacije v termostatu pri 37 °C spremenimo barvo diskov, da presodimo porazdelitev ogljikovih hidratov, aminokislin, beljakovin itd.
Hemolitična moč (razvoj eritrocitov) raste na sredini krvi. Nekatere sredine postanejo same po sebi jasne, v ozkih sredinah kolonije pa je jasno območje (slika 20). Ko ga odobri methemoglobin, je sredina zelena.
ohranjanje pridelka
Vidileni in vyvchenі kultury (shtami), scho, da postanejo dragoceni za znanost ali virobnitstva, so vzeti iz muzejev živih kultur. Muzej Sovereign Union se nahaja na Državnem inštitutu za standardizacijo in nadzor medicinskih bioloških pripravkov. L. A. Tarasevich (DIBK).
Zavdannya zberіgannya - pіdtremati zhittєzdatnіst microorganіzmіv і pred njimi їх мілівії. Za koga se morate sprostiti ali dodati izmenjavo v mikrobnih celicah.
Ena najnaprednejših metod ohranjanja pridelka je liofilizacija – sušenje v vakuumu iz zamrznjenega mlina omogoča vzpostavitev anabioznega tabora. Druženje se izvaja na posebnih napravah. Kulture shranjujte v zaprtih ampulah pri temperaturi 4 °C, po možnosti -30-70 °C.
Ponovna izumitev posušenih pridelkov. Konico ampule močno segrejte v polmesecu in jo nalepite z novo vatirano palčko, rahlo namočite s hladno vodo, da nastanejo mikrorazpoke na gubah, skozi katere je mogoče prodreti v sredino ampule. S tem bodo skozi razpokane robove razpok ponovno sterilizirane.
* (Če je na tamponu preveč vode, jo lahko popijete v ampulo in porušite sterilnost kulture: zmoči se skozi ugotovljene mikrorazpoke, zato v ampuli nastane vakuum.)
Spoštovanje! Ne pozabite, da imajo zaprte ampule vakuum. Takoj, ko jo vtrite vanjo skozi veliko odprtino, se lahko kultura, ki jo najdemo v ampuli, razširi in pride ven.
Pustite, da vidite v zraku, s pinceto zlomite in odstranite vrh ampule. Odprtino rahlo popečemo in pasteriziramo s sterilno pipeto ali pa z brizgo v ampulo dodamo juho ali izotonično juho. Ampule zmešajte skupaj in posejte na medij. Rast novih pridelkov v prvih posevkih je lahko pogostejša.
Dolgotrajno konzerviranje kulture lahko izvajamo tudi z redkim dušikom (-196 °C) s posebnimi pripomočki.
Metode netrivialnega ohranjanja pridelkov so naslednje: 1) subkultivacija (periodična ponovna zasaditev na svežih gojiščih) v intervalih, da ležijo v prevladi mikroorganizma, gojišča in možganov pridelave. Vmesne kulture se vzamejo pri 4°; 2) prihranki pod žogo olії. Kulturo gojimo v agarju visoke 5-6 cm, prelijemo s sterilnim vazelinskim oljem (oljčna kroglica približno 2 cm) in shranimo navpično v hladilniku. Pogoji ohranjanja različnih mikroorganizmov v različnih, do tistega iz epruvet, kulturo občasno obesimo, da preverimo življenjsko dobo; 3) skladiščenje pri -20-70 ° C; 4) zbiranje iz zaprtih epruvet. Po potrebi se material vzame in obesi na svežo sredino.
Nadzorujte prehrano
1. Kaj je treba vključiti v razumevanje »bakterioloških raziskav«?
2. Kakšna kultura je lahko za takšno spremljanje?
3. Kaj je bakterijska kolonija, kultura, sev, klon?
4. Kakšno je razumevanje »kulturne moči mikrobov«?
upravitelj
1. Naučite se in opišite papalino kolonij. Ponovno jih posejte za agar poševno po sektorju.
2. Vivecit in opisati naravo rasti - kultura na poševnem agarju. Upoštevajte čistost in morfologijo kulture v inokuliranem pripravku.
3. Prenesite kulturo iz poševnega agarja v juho in diferencialno diagnostični medij. Preverite in v protokol zapišite naravo rasti kulture na teh medijih in encimsko moč.
M'yasopeptonny broth in m'yasopeptonny agar sta najpreprostejša živa medija, dodana večini bakterij. Glavni material za pripravo teh in drugih živih gojišč je mesna voda, ki je rumene barve domovine s kislo reakcijo. M'yasna voda za maščevanje belega govora (albumin), ekstraktivnega govora in aktivne soli.
Mesna voda in koncentracije mesno-peptonske juhe (po GOST 10444-63)
M'yaso yaloviche ali kіnské po odstranitvi ščetk, maščobe in kite preidemo skozi mlinček za meso, mleto meso pa prelijemo s hladno vodo iz pipe, pri čemer 500 g mletega mesa nalijemo na kožo z 1 liter vode. Po mešanju vsote jo segrejejo do vrelišča in nato segrevajo 1,5 leta. Manjšo količino mletega mletega mesa z vodo (do 5 l) lahko kuhamo na vročem ognju, pogosto mešamo, da se suhi delci mesa ne zažgejo.
Večja količina je boljša kot kuhanje v kotlih s parno srajco. Pripravljenost mesne vode je posledica filtriranja majhne količine le-te v epruveti skozi papirnati filter. Yakshcho filtrate prozory, mesna voda je pripravljena. Če filtrat pride ven kalamutny, potem je naslednji korak doti, doki ne vidijo prozornega filtrata. Po koncu kuhanja domovino prekuhamo skozi platno ali dvojno zloženo gazo, vso domovino sik in otriman prinesemo iz kuhanega mesa, da se prevrela voda pripelje do prostornine storža. Ni treba dodajati velike količine vode, saj bo voda zaradi vrenja mesa iztekla veliko soka iz mesa. Samo v primeru prebuhne variante, tistega loka razburkanega vrenja, pride do velikega izhlapevanja radine.
Otrimanovo mesno vodo vlijemo v steklene kozarce, nato jo kuhamo in steriliziramo v avtoklavu 20 minut pri normalni temperaturi 120 °C. Iz mesne vode, nabrane s takšnim rangom, po potrebi pripravite potrebno življenjsko snov.
Za zmanjšanje koncentracije mesne peptonske juhe (MPB) dodajte 10 g peptona in 5 g natrijevega klorida v 1 liter mesne vode. Reakcijski medij segrejemo na pH 7,0-7,2, zavremo, filtriramo skozi papirnati filter, nalijemo v čiste epruvete in zapremo z vatiranimi čepki, steriliziramo v avtoklavu 20 minut pri temperaturi 120 °C.
Vzreja m'yasopeptonne juhe
Priprava mesne vode poteka na enak način kot za koncentrirano juho, namesto 500 g mletega mesa pa vzamemo 250 g joge na 1 liter vode. V vdvіchі je mogoče razredčiti pripravljeno koncentrirano mesno vodo. V 1 liter razredčene mesne vode dodamo 5 g peptona, 2,5 g natrijevega klorida, nastavimo pH na 7,0-7,2 in pustimo, da vre na enak način, kot pri pripravi zgoščene mesno-peptonske juhe.
ribopeptonska juha
V tovarnah, ki izdelujejo ribje konzerve, lahko mesno vodo za pripravo medijev sušimo z ribjo vodo. Ribno vodo pripravimo iz velikega tankega rebra. Najboljše za cієї met ostriž, trska in ščuka. Zvіlnenu vіd kіstok in maščobo ribo prelijemo skozi mlinček za meso in prelijemo s hladno vodo iz pipe iz rožmarina 1 liter vode na 500 g mletih rib. Vsi nadaljnji postopki za pripravo ribje vode so podobni tistim za pripravo mesne vode.
Za pripravo ribopeptonske juhe se uporablja ribna voda. Na 1 liter ribje vode dodamo 10 g peptona, 5 g kuhinjske soli, nevtraliziramo na pH 7,0-7,2 in steriliziramo tako, kot je, kot mesno-peptonsko juho.
Prelivanje juhe v epruvete (pred sterilizacijo) poteka skozi kozarec virve, na konec katerega se natakne gumijasta cevka s konico in Morajevim prijemom (slika 52). Konico papaline pri vlivanju v epruveto zvijte, da robov epruvete ne zmočimo z juho, sicer je vatirani čep do konca suh in ga lahko vzklijo mikroorganizmi.
Vgrajene reakcije življenskih medijev
Z mikrobiološkimi ugotovitvami je treba ohranjati kislost in moč bivalnih okolij pri življenju. Aktivna kislost živega substrata je lahko, kot je bilo načrtovano, zelo pomembna v življenjskih procesih mikrobov: dodajajo svojo rastno, morfološko in fiziološko moč. Za večino bakterij je potreben medij s pH 7,2-7,4, za kvasovke in obilico - s pH 4,5-5,5.
Življenje sredine, ki je pripravljeno za manifestacijo biokemičnih moči mikrobov, je posledica matere optimalne, strogo dodeljene reakcije za ta mikrob. Nastavitev pH pripravljenega medija v mikrobiološkem laboratoriju je lahko elektrometrična ali kolorimetrična metoda. Elektrometrično določimo pH s pomočjo laboratorijskega pH metra (npr. LP-58 - slika 53) ali ionomirja (KFV-I1 - slika 54).
Za merjenje pH vrednosti dodanega revitalizirajočega medija za dodaten ionomer vlijemo približno 40 ml medija v bučko, jo napolnimo s kartušo s klor-srebrnim elementom in dodamo električni nastavek. Puščice galvanometra se premikajo in prikazujejo pH vrednost.
Pri uporabi laboratorijskega pH metra (LP-58) je stekleno in kalomelno elektrodo lažje ustaviti. Vreča steklene elektrode ima lahko tudi tanke stene - 0,03-0,05 mm, zato morate pri delu z njo biti previdni. Pred koncentriranjem stekla je treba elektrodo hraniti v destilirani vodi vsaj 1-2 leti, v primeru pogoste uporabe pa jo je treba hraniti v destilirani vodi in jo občasno zamenjati s svežo vodo.
Preden prilagodite pH s stekleno elektrodo, popravite pH lestvico pufra. Rožmarin pH pufranega območja je lahko blizu pH določenega območja. Temperaturni kompenzator nastavka je nastavljen na temperaturo puferskega območja in prilagaja nastavitveni in potenciometrični del nastavka za normalnim elementom. Nato po izpiranju elektrode z destilirano vodo in vimiryuvalno posodo nasičimo s preostalim medijem in zmerimo pH medija; nastavitev temperaturnega kompenzatorja na temperaturo medija in s pritiskom na gumb za vklop dodatne opreme na sprednji doshtsi pH metra označite navedbo puščic galvanometra na pH skali. Podrobna pravila za korystuvannya, nalashtuvannya in pazite na dodatke so opisana v navodilih, kako dodati dodatke. Trivalnost analize 3-5 min. Natančno poročajte o rezultatih.
Elektrometrično s pomočjo pH metra in ionomirja lahko tudi ročno preverite pH pripravljenega medija. Pri pripravi živih substratov za bakteriološke analize je potrebno prilagoditi pH medija in reakcijo spraviti na najvišjo vrednost, potem se bo praktična kolorimetrična metoda izkazala za učinkovito.
Osnova kolorimetrične metode temelji na moči indikatorjev, da s spreminjanjem koncentracije H-ionskih ionov spreminjajo svojo koncentracijo. Za indikator kože se spremeni njegov značilni razpon pH v območju katere koli barve. V skladu z GOST 10444-63 je treba za določitev pH živih medijev dodati 0,04% bromtimol modrega. Razpon bromtimol modrega je 6,0-7,6. V kislih medijih so trte napolnjene z rumeno zabarvlennya, v lužah - modro. Pri pH 7,1 daje svetlo zeleno-zeleno okužbo.
Za namen reakcije medija ali konzerviranih produktov se po razvoju mikroorganizmov v njih doda 0,04 % bromokrezolpurpurskih spojin. Bromocresolpurpur spremeni kontaminacijo v območju pH 5,2-6,3. V kislih medijih so vina bledo rumena, v nevtralnih rdeče-vijolična, pri pH 6,3 pa dajejo zeleno z vijoličastim odtenkom zabarvlenije.
Indikatorji so pripravljeni v naslednjem vrstnem redu: 0,1 g sposobnega indikatorja, imenovanega na analitskih terezah, se vtre na pesto (bagzhano ahat) iz 1/20 n. kavstična soda. Za odmerjanje 0,1 g bromtimol blackita vzemite 3,2 ml 1/20 n. razlika NaOH; za izdajanje 0,1 g bromcresolpurpur - 3,7 ml 1/20 n. odpreti travnik. Končni raztopini luž dodamo 250 ml destilirane vode in dodamo 0,04 % raztopine indikatorja. Priprave za razvoj indikatorja je treba vzeti na hladnem iz steklenih posod z zmleto pluto.
Pred sterilizacijo je treba pH medija nastaviti na enak (7,0-7,2). Za to veliko bučko (2-3 l) vlijemo v 1,5 l živega medija. Iz biret v njej začnite kaplja za kapljico vlivati 10% raztopine sode bikarbone ali šibko raztopino na travnik (na primer 0,1 N. raztopine natrijevega hidroksida), ves čas pereveryayuschie reakcijo medija v skladu z indikator (v tem primeru glede na bromtimol modro). V ta namen na belo porcelanasto ploščico (možno je narediti cachelno) nanesemo papalino iz sredice, ki ji dodamo drobec indikatorja. Če bromthymol modro, ko ji daš zhovte zabarvlennya, potem je treba soda infuzijo ali travnik nadaljevati doti, opoldanski doki v kapljicah indikatorja ne zataknejo v svetlo zelene barve. Če se ob dodajanju indikatorja v kapljicah preostalega medija pojavi zeleno-modri ton, potem je obarvanost lužice, ko titriramo, priteče v presežku in v bučko s sredino, dodati bolj svežo, še ne titrirano življenjsko dobo. -dajajoči medij in reakcija bo ponovno odkrita.
Popolnoma se izkaže v praksi s pomočjo primerjalnika in standardne Michaelisove lestvice. Ta metoda mora biti natančna - reakcija medija se spreminja do 0,1 pH enote. Za določitev pH medija za dodatni pripomoček Michaelis je treba preglasiti reakcijo medija za pomožno snov lakmusove paprike, tako da poznamo kot tak indikator toliko ampul iz pripomočka Michaelis je treba pospešiti. Ker je za večino živih medijev potrebna nevtralna reakcija z nizkim lumenom (pH 7,0-7,2), je treba vzeti indikator metanitrofenol in številne ampule s pH 6,8-8,2. Med sterilizacijo naj se pH substrata zniža za 0,2 enote, zato je za ustvarjanje optimalnih umov za rast mikroorganizmov pred sterilizacijo sredina, ki jo pripravimo, kriva materina pH 7,2-7,4.
Ko ponovno preverimo reakcijo medija glede na lakmus in izberemo indikator, vzamemo primerjalnik, v novo epruveto vstavimo standardne ampule s pravilnim pH (slika 55). V drugo epruveto prve vrste (št. 2) pri primerjalniku nalijemo 2 ml zadnjega revitalizirajočega medija; tu dodamo 4 ml destilirane vode in 1 ml 0,3 % raztopine izbranega indikatorja (imenovanega, kot že omenjeno, metanitrofenol). V dve skrajni epruveti prve vrste št. 1 in 3 nalijemo 2 ml revitalizirajočega medija in 5 ml destilirane vode. V srednjo epruveto druge vrste št. 5 damo le 7 ml destilirane vode. V dveh skrajnih vtičnicah druge vrste primerjalnika št. 4 in 6 vstavite ampule s standardnim razponom pH indikatorjev, v intervalu med katerima se obnovi reakcija medija.
Pogled na epruvete s svetlobo skozi spodnjo odprtino v primerjalniku na beli mat plošči, prebiranje zabarvlennya dosledzhuvannya rodini iz zabarvlennyam indikatorja. Če se kontaminacija v vzorcu z medijem vzame iz kontaminacije indikatorja v eni ampuli, je pH vrednost medija enaka pH vrednosti te standardne ampule. Če je barva končnega medija (v drugem vzorcu) svetlejša, nižja v standardni ampuli, potem v epruveto z gojiščem po kapljicah dodajamo 10 % količine sode bikarbone ali 0,1 n. rozchin їdkogo natra, vikoristuuuchi mikrobireta za to. Infuzija variacij, ki nevtralizirajo, po kapljicah, dokler se barva vzorca ne ujema z barvo v eni ampuli. Za določeno količino mililitrov sode abolugu, narisane za nevtralizacijo 2 ml medija (dane v epruveto št. 2), je vseeno, potrebujete nekaj mililitrov nevtralizacijske količine, da nastavite raven pH v popolna obvezna priprava živega organizma.
V zelo kislem okolju je pH vrednost dodeljena dodatnemu indikatorju para-nitrofenol. Rozchini іndikatorіv pripravi prihajajoči rang.
1. 0,3 g meta-nitrofenola zmešamo v 100 ml destilirane vode (razpon vrednosti pH od 6,8 do 8,4).
2. 0,1 g para-nitrofenola raztopimo v 100 ml destilirane vode (razpon vrednosti pH od 5,4 do 7,0).
S pomočjo univerzalnega indikatorja lahko nastavite tudi približno pH vrednost medija. Za to nalijte 2-3 ml zadnjega medija v porcelanasto skodelico in dodajte 2-3 kapljice univerzalnega indikatorja. Ko vsoto zmešate s stekleno palčko, zadimite barvo roja rojev na barvni lestvici papirja. pH končnega medija bo enak, kot je prikazano na barvni lestvici enako gojene samice. Stopnja natančnosti dodeljevanja pH z univerzalnim indikatorjem je blizu 0,5.
Priprava mesnega peptonskega agarja (MPA)
Agar (v malajščini »žele«) je zložljiv organski govor, ki je vzet iz morskih alg. Za kemičnim skladiščem vin se skriva vsota ogljikovih hidratov, ki jo lahko vidimo do polisaharidov - podobne galaktoze - in si lahko zaželimo gradnjo. Dodatki k redkemu srednjemu agarju dajo tako gostoto, da je taljenje več kot temperatura vrelišča. Agar se topi v vodi pri približno 80-86 °C, trši pri 36-40 °C. Zavdyaki tsoma na gojiščih agarja se lahko gojijo mikrobi za katero koli temperaturo, ki jim omogoča življenje.
Mesni pepton agar pripravimo iz koncentrirane mesne peptonske juhe. V veliko Erlenmeyerivsko bučko z ognjevzdržno plastjo, prostornina do 2 litra, zaprto z bombažnim zamaškom, nalijte koncentracije m'yasopeptonny brozge, dodajte 2 do 4% (depozitna sorta) drobno sesekljanega agarja, ne da bi se zvijali z zamašek, nataknite šibek zamašek.
Mesno peptonsko juho je treba jemati s srednjo reakcijo 7,4, tako da se med sterilizacijo pH zmanjša za 0,2. Reakcijo m'yasopepton agarja lahko namestimo, če se pojavi zunaj taline. Če je agar dobre viskoznosti in se ne obori, potem ko je pH nastavljen, kuhamo 12-15 minut, filtriramo skozi vato in vlijemo v bučko ali epruvete (deponiranje za uživanje) steriliziramo v avtoklavu za 20 minut pri 120 °C.
Če agar ni dovolj za čiščenje, lahko naredite obleganje. Vsekakor je treba pred sterilizacijo m'yasopepton agar razbistriti. Za to, dokler se ne stopi in ohladi na 50 ° C, mesni pepton agar, dodamo jajčni beljak, zmešamo s 30 ml vode in stepamo, dokler ne postanem zatič. Za 1 liter medija vzemite beljakovine enega piščančjega jajca. Agar je treba jemati resno z vnosom beljakovin in ga dati v avtoklav za 10 minut pri 120°C. Pod uro vrenja se beljaki zažgejo in zadušijo vse pomembne dele. Po avtoklaviranju agar filtriramo skozi filter iz bombažne gaze. Za koga vzemite kozarec virve velikega premera, nanj potegnite gazo in na žival položite tanko kepo vate. Vreli agar po potrebi hitro filtriramo in filtriramo, dokler se ne ujame in ga vlijemo v epruvete po 5-10 ml. Sterilizacija sredine se izvaja v avtoklavu, kot je navedeno zgoraj.
Po sterilizaciji epruvete s sredino, ki jo je treba nadomestiti s 5 ml agarja, postavimo v bolni tabor, da agar ne štrli iz zamaška. Po ulovu pridobijo "poševni" (ali poševni) agar. Epruvete z 10 ml agarja postavimo na stojalo in pustimo, da se ujamejo, odstranimo sredino in prelijemo na "visoko mizo". Skew agar ni priporočljiv dlje kot 4-7 dni, drobci vina visijo.
M'yasopeptonny agar je glavni življenjski medij, ki se izloča med bakteriološkimi analizami v mikrobioloških laboratorijih. Lahko ga premagate kot "preprost agar", takole: po dodajanju ogljikovih hidratov naredite kompleksen diferencialno-diagnostični medij.
Živi na sredini v mikrobiologiji imenujejo medije, ki se razlikujejo od zložljive strani preprostega skladišča, kot zastosovuyutsya za razmnoževanje bakterij in drugih mikroorganizmov v laboratorijskih industrijskih glavah.
Pripravljeni na življenje na sredini iz produktov naraščajočih pustolovščin bitja. Velik pomen v življenjskem mediju imajo rastni faktorji, ki katalizirajo presnovne procese mikrobnih celic (vitamini skupine B, nikotinska kislina itd.).
Kosi mediji pripravite za petje recepte iz različnih poparkov ali iz slanice in aborolina izleta z dodatkom anorganskih soli, ogljikovih hidratov in dušikovih govorov.
V bakteriološki praksi najpogosteje nadomestna so suha življenjska sredstva, ki jih pridobivamo na podlagi trenutne biotehnologije. Za їh prigotuvannya vikoristovuyut ekonomіchno dobičkonosnost neharchovu sirovinu: scho vtratili termіn pridatnostі krovozamіnniki (gіdrolіzin acid gіdrolіzat krovі tvarin, amіnopeptid - Enzymatic gіdrolіzat krovі; Product bіozin, sposoben za transport, bіozin, transport, transport in transport borovin. standardno skladišče.
Za doslednostživljenjska središča so lahko redki, napіrіdkie, schіlniy. Druga gojišča so pripravljena s potjo za dodajanje 1,5-2% agarja v redek medij, na primer - 0,3-0,7% agar. Agar je produkt predelave posebne vrste morskih alg, tali se pri temperaturi 80-86 ° C, je trši pri temperaturi blizu 40 ° C in v zamrznjenem stanju je srednje debeline. V nekaterih primerih se za ekstrakcijo življenjskega medija sklere uporablja želatina (10-15%). Številni naravni živi mediji (zažgan krvni serum, zažgani jajčni beljak) so pokrovače.
Za namen priznanja Srednje se delijo na glavne, selektivne in diferencialno-diagnostične.
Do glavnih lahko vidite srednje, ki zastosovuetsya za rast bogatih bakterij. To so triptični hidrolizati mesa, ribjih izdelkov, krvnih bitij ali kazeina, iz katerih pripravijo redek medij – živahno juho in živahni agar. Takšne sredine so osnova za pripravo zloženih maščobnih sredic - krvavih, krvavih, ki zadovoljujejo potrebe po hrani patogenih bakterij.
Izbirni življenski mediji so prepoznani po vibriranju vida in kopičenju mikroorganizmov pesmi (ali pevske skupine) iz materialov, ki bodo maščevali drugačno mikrofloro tretjih oseb. Ko se selektivni živi organizmi združijo, izhajajo iz bioloških značilnosti, kar posledično razkrije prisotnost podatkov o mikroorganizmih v prisotnosti več drugih. Na primer, vibrirajoča rast staphylococcus aureus je povezana s povečano koncentracijo natrijevega klorida, vibrio cholerae - v mediju luže na tanko.
Diferencialno-diagnostična življenjska sredstva so koristna za razmejitev štirih vrst (ali skupin) mikroorganizmov. Načelo spodbujanja teh medijev temelji na dejstvu, da se lahko različne bakterije med seboj razlikujejo po biokemični aktivnosti zaradi neenakega nabora encimov.
Posebno skupino sestavljajo sintetična in nesintetična življenjska sredstva. Skladišče sintetičnih medijev vključuje kemično čist govor: aminokisline, mineralne soli, ogljikovi hidrati, vitamini. V sintetični medij dodatno vključite pepton, izvleček kvasa in drugi živi govor. Te srednje najpogosteje uporabljajo znanstveno napredni roboti in v mikrobiološki industriji z izbiro antibiotikov, cepiv in drugih pripravkov.
V tujini bodo z metodo reševanja mrtvih pospešeno prepoznavanje določenih mikroorganizmov (enterobakterije, stafilokoki, streptokoki ipd.) imenovali mikrotestni sistem (MTS). Smrad so polistirenske plošče z luknjami, v katere so nameščeni sterilni diferencialni diagnostični mediji. Sterilizacija MTS se izvaja z UV testiranjem. Mikrotestni sistemi so še posebej učinkoviti v primeru obsežnih bakterioloških študij v praktičnih laboratorijih.
Wimogi do žive sredine
Ne glede na to, ali gre za življenjski medij, ga je mogoče pomiriti z napredovanjem vimog: maščevanje vsega, kar je potrebno za razmnoževanje mikroorganizma govora v obliki, ki jo je lahko osvojiti; mati optimalna vsebnost vode, viskoznost, pH, buti izotonična in prozorna. Živilni medij za kožo se sterilizira na pevski način v skladišču.
Pri pripravi živilskih gojišč je treba zaščititi potrebo po mikroorganizmih, ki se gojijo, v različnih živih elementih. Іsnuyut različne klasifikacije živih medijev.
Razvrstitev živih medijev za skladiščem:
1. Oprostite sredini(MPB, MPA, želatina, peptonska voda). Mesno-peptonska juha (MPB) je beljakovinska osnova vseh gojišč.
Іsnuє kіlka načini priprave MSB:
a) na mesnati vodi z dodajanjem končnega peptona;
b) na prebave produktov hidrolize prostega sirupa z dodatnimi encimi.
M'yaso-peptonny agar (MPA) otrimuyut način dodajanja agar-agar (1,5-3%) v MPB. Na primer, delitve MPA vzdolž diagonale epruvet in vial so enake kot nagibi agarja. Tako kot sredina je rozpodіlene na vzorcu navpično z višino 5-7 cm, z agar stojalo. MPA, ujete v petrijevke, kot so shtastshki - ploščni deli agarja. Tako kot srednja je navpična kroglica visoka 2-3 cm in diagonalna krogla enake velikosti, cena agar agarja.
2. Zložljiva sredina pripravljeno na osnovi preprostih dodatkov (ogljikovi hidrati, kri, žovč, jajca, sirovatka, mleko, sol, faktorji za rast tudi)
Razvrstitev živilskih medijev za zunanje komponente:
1. Centri naravnega življenja- Je naravni proizvod bitja ali rastoče rastline.
lahko buti:
Roslinnі (zunanji izdelki - soja, grah, krompir, korenje).
Bitja (zunanji proizvodi - meso, ribe, jajca, mleko, živalska tkiva, jovč, krvni serum).
Zmishani (MPA, sredina Levenshteina - Jensen toshcho).
2. Kosi mediji za odvzem predelanih naravnih izdelkov (mesna voda, digest), govor, otrimani z tsikh produktіv (pepton, kvasovke in koruzni izvlečki) in različne dodatke. Najpomembnejša in najbolj pestra skupina medijev za skladiščem najbolj stagnira. Pripravljeni so za petje receptov iz različnih poparkov či v divjini rastline, z dodatkom anorganskih soli, ogljikovih hidratov in dušikovih govorov.
3. Sintetični mediji(v domačem kemičnem skladišču) nastanejo iz kemično čistih zalog v točno pravih koncentracijah (z dodatkom ogljikovih hidratov, soli, aminokislin, vitaminov itd.). Na podlagi teh sredin z dodajanjem naravnih ali kosih sredin pridobijo sintetične sredine.
Razvrstitev živih medijev zaradi doslednosti: sredine buvayut redko(medij brez agarja), všeč(z agarjem do 1%), schіlnі(Agarovi - 1,5-2,5%). Redka gojišča se najpogosteje uporabljajo za gojenje fizioloških in biokemijskih lastnosti mikroorganizma, za kopičenje biomase in produktov izmenjave. Napіvridkі seredovishcha pojejo vikorist іz zberіgannya kultur, shіlnі — vіdіlennya mikroorganіzmіv, vychennya morphologiії colіnіy, dіgnostіchnyh іlіy, kolіkіsny іnіku, vznаchennya іnіh, vznаchennya, vznаchennya.
Razvrstitev živih medijev za namene prepoznavanja: univerzalni (namaz) in posebni.
Univerzalni (osnovni) mediji. Vikorna gojišča se uporabljajo za gojenje več nevibagly mikroorganizmov ali kot osnova za pripravo posebnih gojišč, ki jim dodajo kri, zukor, mleko, pinjenec in druge sestavine, potrebne za razmnoževanje tega mikroorganizma. Za tsієї skupine ležijo: MPB - m'yaso-pepton juha, MPA - m'yaso-pepton agar, MPZH - m'yaso-pepton želatina tanka.
Posebni mediji. Imenovana vidilennya in selektivno gojenje pojočih vrst mikroorganizmov, yakі rastejo na preprostih medijih.
Obstajajo takšne vrste posebnih medijev: obogatitveni mediji, elektivni, diferencialno-diagnostični, konzervativni in akumulacijski mediji.
Srednje bogastvo. Veliko mikroorganizmov ne raste na naravnih gojiščih, za povečanje življenjske vrednosti gojišča se mu dodajo ogljikovi hidrati (saharoza ali agar) ali beljakovine (serovatkovyj agar in juha, krvni agar in juha). Krvni agar ali krvno juho se odreže s potjo, da se v živi medij doda 5-10 % sterilne defibrinirane krvi ovce, zajca, konja, človeka. Srednji vikorist se uporablja za opazovanje streptokokov, pnevmokokov in drugih bakterij ter razvoj hemolitične aktivnosti. Sirovatkovy juho ali sivkasti agar se mimogrede vzame za dodajanje preprostih medijev 15-20% Kіnskoy ali bichachoї syrovatka.
2. Izbirne (selektivne) sredine. Ti mediji so prepoznani po vibriranju vida in kopičenju mikroorganizmov iste vrste iz materiala, ki naj bi maščevali videz mikrobov. Ko bomo na njih objavili material, ki bo maščeval seštevku različnih mikroorganizmov, bomo prikazali rast te vrste, za katero bo dani medij selektiven. Živost medija se doseže z načinom ustvarjanja umov, optimalnim za gojenje pojočih mikrobov (pH, Eh, koncentracija soli, shranjevanje živih govorov), tobto. pozitivna selekcija. Abo način za dodajanje na sredino govorov, ki ignorirajo druge mikroorganizme (zhovch, visoke koncentracije NaCl, antibiotiki itd.), tobto. negativna selekcija. V skupino tsієї lagati:
Selenit sredina- je najboljša sredina za mikrobe salmonele in griže v Sonneju. Natrijev selen, ki se nahaja v sredini, spodbuja rast teh bakterij in zavira rast spremljajoče flore.
Bizmut-sulfitni agar maščevati sol v blatu, diamantno zeleno. Salmonela raste na sredini gojišča, ki je videti kot črne kolonije. V nasprotnem primeru ne dajajte bakterij na srednji rast.
Žovtkovo-solilni agar (JSA) sredina za opazovanje stafilokokov je do 10% natrijevega klorida, kar upošteva večje število bakterij, ki jih vsebuje material. Poleg tega je sredina tudi diferencialno diagnostična, saj prisotnost jajčnega rumenjaka omogoča odkrivanje encima lecitinaze (lecitovitelaze), ki ubija patogene stafilokoke. Lecitinaza razgrajuje lecitin na fosforholin in nereaktivne vodne maščobne kisline, zato se sredina na nesrečo pozitivnih lecitinaza pozitivnih kolonij pojavi kot opalescentna cona v videzu "polmerne žile".
goveja juha selektivno za salmonelo, razmnoževanje takih stimulansov je dodano 10% zhovch, ki hkrati galmues rast spremljajočih mikroorganizmov.
lužnega agarja oz lužna peptonska voda selektivno za vibrio kolere, lužičasta reakcija medija (pH 9,0) ne spremeni rasti vibrija kolere, temveč rast drugih mikroorganizmov. 3-5 deb. F
3. Diferencialno-diagnostični medij. Za diferenciacijo ene vrste mikroorganizmov z drugačnim značajem njihove encimske aktivnosti je treba uporabiti diferencialno-diagnostične medije. Skladišče teh medijev je treba izbrati s takšnim rozrachunkom, da bi jasno razkrili najbolj značilno prevlado pevske vrste mikroorganizma, ki opisuje posebnosti njegove izmenjave govora.
Sredi manifestacije proteolitične in hemolitične zdatnosti mikrobov, maščevanje v vašem skladišču beljakovin govora: kri, mleko, želatina tanka. Najbolj obsežna gojišča so mesno-peptonska želatina (MPZ), ki je bila zažgana, mleko in krvni agar (KA).
Mediji za razvoj glikolnih moči vključujejo tri glavne sestavine: življenjsko osnovo (juha, agar), substrat (monota disaharida, bogatega alkohola) in indikator za manifestacijo določenih encimov. Encimsko cepite substrate, da ustvarite pH vrednost, ki spremeni koncentracijo medija. Najširša paleta barv medija z različnimi ogljikovimi hidrati (na primer od bromtimol modrega, indikatorja BP). Širša je tudi sredina Gissa, v kateri ščitijo raznolikost in sposobnost fermentacije različnih ogljikovih hidratov s kislinskimi raztopinami, kislino in plinom.
Za diferenciacijo enterobakterij peptonsko vodo nasičimo z naborom različnih ogljikovih hidratov, Andredejevim indikatorjem in plovci, ki olajšajo zaznavanje uplinjanja in pomagajo vizualno določiti spremembo pH, ki je značilna za različne mikroorganizme. Zokrema, ki se razgradi v kisli strani, spremeni pordelost medija z Andridejevim reagentom ali pozhovtinnya z vikarnim medijem z bromtimol modro, tako kot pri konzerviranju z Andredejevim indikatorjem in modrim bromtimolom, ne spremeni barve medija. Na primer, opazovanje patogenih bakterij iz črevesja okuži medij, kar omogoča diferenciacijo patogenih mikroorganizmov od post-črevesnih prebivalcev – mikroorganizmov, ki razgrajujejo laktozo.
Takšna sredina je sredina Enda. Glavne sestavine medija Endo so MPA, laktoza in bazični fuksin, natrijev sulfit. Sredi življenjskega kraja se je središče spremenilo v svetlo erizipelasto barvo. Pri fermentaciji laktoze se raztopi acetaldehid, ki reagira s sulfitom i, ki vibrira s komo, fuksin spremeni kolonije v svetlo rdečo barvo. Za to črevesna palica, saj fermentira laktozo, pri rasti na tem mediju vzpostavi rdeče kolonije s kovinskim bleščanjem, salmonelo in šigele pa brez soda, za tiste, ki ne smrdijo, ne fermentirajo laktoze.
4. Sredina kopičenja, pri nekaterih se poveča število posameznih vrst mikroorganizmov.
5. Konzervansi (transportni) mediji. Namenjeno za ohranjanje mikroorganizma v naslednji uri prevoza do meseca dostave. Ti mediji bi morali skrbeti za dodatke, ki preprečujejo razmnoževanje in smrt mikrobov, kar jim rešuje življenja. Glicerinska vsota (Tigin medij), fosfatno puferna vsota in Kari-Bleyrjeva, Amiesova (z aktivirano vugillijo in brez aktivirane vugillije), Stewartova in in.
Sterilizacija živilskih medijev.
Vsa življenjska sredstva se vlijejo neodvisno od njihovega znaka v čiste posode in sterilizirajo. Večina gojišč je sterilizirana z avtoklaviranjem, vendar pod različnimi pogoji ostanejo v skladišču.
1. Sintetična gojišča in vsa agarska gojišča, ki jih ne smemo hraniti v lastnem skladišču avtohtonih beljakovin in ogljikovih hidratov, steriliziramo 15-20 minut v avtoklavu pri temperaturi 115-120°C in tlaku 1-1,5. vzdušja.
2. Seredovishcha z ogljikovimi hidrati in mlekom (do ravni laktoze), živo želatino steriliziramo z naravno paro pri temperaturi 100 ° C delno ali v avtoklavu pri 112 ° C in s tlakom do 1 atmosfere.
3. Seredovishcha, v skladišče katerega vstopijo beli govor (krvni serum, ascitična domovina), nihajo s tindalizacijo ali filtracijo.
4. Za sterilizacijo živilskih medijev, ki se hranijo v lastnem skladišču, se naravne beljakovine utrdijo s filtracijo skozi membranske filtre Seitz.
Za nadzor sterilnosti medija po sterilizaciji postavite termostat na 37°C za 3-5 dB. Nekateri srednji deli krivcev ostanejo odprti, na površini pa so v tovarišeh živih sredin nedolžnih znaki rasti. Za kontrolo sterilnosti se določi kemična kontrola pripravljenih gojišč, ki vpliva na to, da se pH, količina skupnega in aminskega dušika ter kloridov določijo v nalepkah serije kože.
Іsnuє tudi biološki nadzor medijev. V vsakem primeru se papalina kalčkov sredine posadi z laboratorijsko kulturo tistega mikroba, za katerega se pripravi sredina in goji značaj rasti jogo. Šele potem, ko so sredinci pokazali kontrolo, so lahko zmagovalni za priznanja.
Za prepoznavanje bivalnih prostorov so srednji razdeljeni v takšne glavne kategorije.
Univerzalni- Medij, na katerem je dobra rast bogata z vrstami patogenih in nepatogenih bakterij. Pred njimi lahko vidite: mesno-peptonsko juho (MPB = mesna voda + 1 % pepton + 0,5 % NaCl), mesno-peptonski agar (MPA = MPB + 2-3 % agar).
Diferencialno-diagnostična- mediji, ki omogočajo zdravljenje ene vrste bakterij z drugimi vrstami encimske aktivnosti ali kulturnimi manifestacijami. Pred njimi se vidi sredina Endo, Levina, Ploskirev, Gissa in mnogi drugi.
selektivno(sinonimi: selektivno, selektivno, zbagachuvalnі) - vmesna programska oprema, ki maščuje govor, ki so nadomestni z mikroorganizmi prve vrste in ne jemljejo ali povzročajo spremembe v rasti drugih mikroorganizmov. Selektivni mediji omogočajo neposredno selekcijo bakterij iz preučevanega materiala. Med temi so Muller, Selenitov, Rapoport, 1% peptonska voda in drugi.
Diferencialno selektivno- sredine, ki bodo pridobile moč diferencialno-diagnostičnih in selektivnih sredin. Smrad vikoristovuyutsya, zokrema, za zgodnjo identifikacijo te identifikacije bakterij, ki jo lahko opazimo pri velikem številu široko razširjenih vrst enterobakterij in psevdomonad (sredina Syvolodsky).
Poseben- Gojišča, posebej pripravljena za rast tihih bakterij, da ne rastejo, sicer pa je grdo rasti na univerzalnih gojiščih. Pred njimi se vidi sredina McCoy-Chapina (za preprečevanje rasti tularemije), kri MPA (za preprečevanje rasti patogenih streptokokov), sredina Levenshtein-Jensena (za opazovanje tuberkuloze tuberkuloze) in іn.
Sintetični- Sredi slanega kemičnega skladišča, ki je vir anorganskih soli z dodatki kemičnih polj, jak služi kot džerel premoga ali dušika. Zadnji del takšnega sintetičnega medija je minimalni medij M-9, v katerem sta energija in ogljik glukoza, dušik pa NH4C1. Sintetični mediji so lahko bolj zložljivi z vključenimi različnimi aminokislinami, bazami in vitamini.
Nap_sintetični- sintetični medij, ki se mu lahko doda, pa naj gre za naravni izdelek, na primer krvni serum. Obstaja veliko različnih možnosti za žive medije, ki so zasnovane tako, da ustrezajo potrebam različnih vrst bakterij in diagnostičnim namenom.
Asinhroni elektromotor A4 za pogonske mehanizme, ki ne vplivajo na frekvenčno regulacijo ovijanja (ventilatorji, izpušni ventilatorji, črpalke). O značilnostih motorjev serije A4 in njihovih značilnostih lahko izveste na
